海鱼中李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌的检测

检测了来自4个商场的20种海鱼,共120个样品,按3管MPN计数法每100 g鱼肉中李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌的平均值分别为396.72和214.78,平均出现率各为80.8%和43.3%,其中4月份的李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌数量远高于其它月份;按季节分,则各数值从大到小依次是春季、秋季、夏季和冬季;检测次数在3次以上的不同种类海鱼中都有李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌的检出,其数量和出现率与海鱼的种类密切相关,其中海鲶中的感染最严重;各个商场的海鱼都有李斯特氏菌和单核细胞增生李氏菌的检出;所分离的单核细胞增生李氏菌的血清型以1型和4型为主。     

单增李斯特氏菌快速鉴定技术的研究

目的:建立单增李斯特氏茵快速鉴定技术;方法: 选择Hly、Inl基因设计扩展片段分别为300～400bp、600～700bp的二对特异性引物,进行PCR扩增;结果: 单增李斯特氏菌标准菌株及本实验室分离保存的单增李斯特氏菌均扩增出两奈明显条带,其它食品中常见致病菌及非增李斯特氏菌均不见扩增条带.52株李斯特氏茵生化符合菌中,有30株菌同时扩增出两条明显条带,与mini-VIDSA测定法比较,两者符合率达92.31%(P＞0.5;X2=0.5).结论: 本实验建立的PCR鉴定技术为一种简便、快速、敏感性强、特异性高的单增李斯特氏茵鉴定方法.     

应用Tem-PCR技术同时检测3种致病菌的研究

应用靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)技术建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157三种致病菌的高通量简易检测方法.实验分别以沙门氏菌的inv A基因、单核细胞增生李斯特氏菌的hly基因、大肠埃希氏菌O157 rfb E基因为靶基因,设计3对特异性引物,并与通用引物连接组成Tem-PCR引物,通过反应条件优化,建立了TemPCR检测方法.结果表明,建立的Tem-PCR方法特异性强,其检测灵敏度分别为沙门氏菌1.1×103CFU/m L、单核细胞增生李斯特氏菌5.6×102CFU/m L、大肠埃希氏菌O157 2.3×103CFU/m L.方法不需要优化调整各引物对的浓度,易于使用,有效地解决了传统多重PCR方法扩增效率不均衡的问题.     

牛板筋中单核细胞增生李斯特氏菌的检测研究

单核细胞增生李斯特氏菌是一种重要的食源性致病菌,对食品安全和人类健康具有危险性。本文通过对牛板筋中单增李斯特菌检测的微生物法、全自动微生物鉴定仪法和荧光PCR法这3种方法进行研究,得出结论:3种方法结果具有较高一致性,其中荧光PCR法快速、高效,在食品安全抽检和监测工作中值得应用和推广。     

基于ActA基因的单核细胞增多性李斯特菌的序列分型研究

根据单核细胞增多性李斯特菌ActA基因序列保守区设计一对引物，对21个菌株进行PCR扩增，得到长度为820bp的片段。PCR产物经过纯化后直接测序，并对其中的506bp进行同源性分析。结果表明单核细胞增多性李斯特菌分离株具有5个明显不同的克隆谱系，每个谱系的同源性均在95％～100％。16个单核细胞增多性李斯特菌奶相关和环境分离株可被分成4个谱系，其中2个谱系（C、D）均为奶相关分离株和成品奶分离株；加工厂地面污水分离株为独立的一个谱系。初步表明，成品奶中污染的单核细胞增多性李斯特菌来自于奶牛场，而非加工环境。     

食品中单增李氏菌实时荧光PCR检测鉴定方法的建立

运用实时荧光PCR(Real-time PCR)技术建立了对食品中单增李氏菌进行检测的快速方法，设计的引物和探针的序列特异性强，省去凝胶电泳的繁琐，降低了污染的可能性，在对26种病原菌进行检测过程中，运用实时荧光PCR法和经典培养法进行比较，结果表明用实时荧光PCR法检测单核细胞增多李斯特氏菌，更快速、敏感、特异性更高。     

李斯特氏菌的各种分型方法在其流行病学调查中的应用

李斯特氏菌是一种重要的人畜共患的食源性病原菌，选择适宜的方法对其进行分型研究，更有利于合理准确诠释李斯特氏菌病的流行病学。本文就李斯特氏菌的各种分型方法在其流行病学调查中的应用及其实用性进行了综述。     

单核细胞增生李斯特菌三种检测方法的比较

目的:通过比较国标法、real-time PCR法和LAMP方法,得到适合基层实验室快速检测单核细胞增生李斯特菌的方法。方法:分别用国标法、real-time PCR法和环介导的等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)法检测李斯特菌,并进行方法比较。结果:三种方法对单增李斯特菌的检测结果一致.国标法整个检测过程需5~7 d;real-time PCR法实验条件要求高,成本高,检测需1.5~2.5 d;LAMP法实验条件低,成本低,检测时限与real-time PCR相同。结论:LAMP法检测单增李斯特菌灵敏度高、特异性强、快速高效和低成本,适合基层实验室应急检测和现场监测使用。     

POR-DHPLO技术快速检测食品中英诺克李斯特氏菌

应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术,建立食品中英诺克李斯特氏菌的快速检测方法．根据英诺克李斯特氏菌的特有基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测,并以41株参考菌株做特异性试验．试验结果表明该方法具有很好的特异性,经PCR—DHPLC可检测食品中英诺克李斯特氏菌．该方法可以快速、准确检测英诺克李斯特氏菌,是食品微生物快速检测的新技术．     

PCR-DHPLC技术快速检测食品中英诺克李斯特氏菌

应用PCR结合变性高效液相色谱（DHPLC）技术,建立食品中英诺克李斯特氏菌的快速检测方法．根据英诺克李斯特氏菌的特有基因设计特异性引物,PCR扩增的产物经DHPLC技术进行快速检测,并以41株参考菌株做特异性试验．试验结果表明该方法具有很好的特异性,经PCR—DHPLC可检测食品中英诺克李斯特氏菌．该方法可以快速、准确检测英诺克李斯特氏菌,是食品微生物快速检测的新技术．     

腐乳发酵过程中微生物群落结构动态的ERIC-PCR指纹图谱分析(修改稿)

建立一种不依赖纯培养，可以在腐乳发酵工业现场使用的监测微生物群落结构变化的分子技术。以腐乳发酵过程的前期、中期、后期的微生物群落为研究对象，每周采样1次，连续4周。获得腐乳发酵物总DNA的ERIC-PCR指纹图谱。结果表明，在4个采样时期之间，对应的各个采样点的ERIC-PCR指纹图谱差异不大，具有较好的相似性，Cs值在59～100之间；同一采样时期不同采样点指纹图谱之间既有相同的特征条带，又存在差异性条带，显示了在此期间微生物群落的连续动态变化过程。通过对腐乳发酵过程中的微生物群落结构的指纹图谱分析，可开发出对该系统微生物群落结构动态变化进行检测的技术。     

枯草芽孢杆菌TY7210菌株的ERIC-PCR快速鉴别

以ER IC核心序列为引物,以2株枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,采用PCR对T aq DNA聚合酶用量、PCR退火温度及模板DNA浓度进行优化,建立了快速鉴别芽孢杆菌的ER IC-PCR方法,并对5株芽孢杆菌进行了分析.结果表明枯草芽孢杆菌TY 7210菌株与其他芽孢杆菌菌株具有不同的指纹图谱,尤其不同于枯草芽孢杆菌(ATCC 1.1849),为芽孢杆菌的快速鉴别奠定了基础.     

转Bt水稻与常规水稻根际土壤细菌类群的比较研究

用纯培养结合ERIC-PCR方法,比较研究了转Bt水稻和常规水稻根际土壤中细菌不同类群的数量和组成的变化.结果显示,在8种单一碳源培养基平板上,转Bt水稻根际土壤的细菌数量均明显不同于常规水稻,其中以山梨醇为单一碳源的细菌生理类群为优势菌群,而以草酸钠为单一碳源的细菌生理类群则消失.ERIC-PCR指纹图谱分析显示,转Bt水稻根际土壤样品和常规水稻根际土壤样品在相同单一碳源培养基上回收菌群的ERIC-PCR图谱明显不同,表现为条带的数目、位置和亮度的变化,表明其属同一生理类群但菌群的组成却各不相同.综合以上结果,可以初步判断转Bt水稻根际土壤的细菌生理类群无论在数量或是结构组成上均明显不同于常规水稻.     

赞比亚铜带省重金属污染对当地民众健康的影响（英文）

目的研究赞比亚铜带地区水、土壤和食物中的重金属污染以及因为赞比亚铜带地区小户农民利用污水浇灌农田对健康带来的影响。方法对该地区的水、土壤和食物按月进行采样,共计采集水样71份,土壤样49份,农作物样65份。采用标准方法分析土壤和水样中的生物可利用重金属元素,通过消解法分析农作物中的重金属总量。结果及结论分析结果表明,在该研究地域的水、土壤和农作物已经受到重金属的污染,此研究结果将用于促进赞比亚铜带省的采矿区对食品质量以及与重金属污染的粮食作物消费安全问题采取有效措施,避免使用矿区废水作为农用灌溉用水,控制和减少污水对农作物的污染。     

不同细胞裂解方法提取活性污泥总DNA研究

采用直接提取法对活性污泥总DNA进行提取,以化学机械法为基础,在细胞裂解步骤中,分别设计了化学法与超声法、高温法、反复冻融法、珠磨法及液氮研磨法相结合等方法,并通过DNA样品的浓度、纯度、提取率以及肠杆菌基因间重复共有序列扩增片段多态性等4个指标对活性污泥总DNA提取的不同细胞裂解方法进行比较,确定了反复冻融法为提取效率高、DNA纯度好且适用于PCR扩增的最佳DNA提取方法.     

Characterization of Bacterial Strains Isolated from a Novel Seawater-based Retting Treatment of Hemp

Cultivable bacteria were isolated from seawater-based retting treatment of hemp, in which three of purified strains （SW- 1, SW- 2, and S-SW1） produced relatively high levels of pectinase activities, and also produced mannanases and xylanases. PCR-based entebacterial repetitive intergenic consensus primers （ERIC-PCR） were employed for fingerprinting DNA of the bacterial strains. The ERIC-PCR fingerprints of stains SW- 1, SW- 2, and S-SW1 were found to be different, and should be further identified for each isolate. Strains SW- 1 and SW- 2 were identified as Stenotrophomnas maltophilia, while strain S-SW1 was assigned to Ochrobactrum anthropi by BIOLOG system. These two species represented rhizosphere bacterial genera, and possibly were introduced by the hemp plants. These organisms seemed potentially capable of producing pectinase and hemicellulase, and thus effectively degrading the gum substances in the seawater retting. This research could be helpful for improving a novel seawater-based retting treatment of hemp.     

多重荧光PCR同时检测转基因成分35S和Nos方法的建立

根据商品化转基因作物中常用的花郴花花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止（Nos）的序列特点，设计并合成了两对引物和相对应的荧光双链探针，建立一种应用荧光双链探针的多重荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和Nos终止子的方法，并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等11份实物样品进行了检测，其中有5份样品结果阳性，结果表明所建立的多重荧光PCR方法能同时检测了35S方法同时检测出35S和Nos双组分，较常规PCR技术更为简便、快速、准确，有很很好的应用前景。     

大理市散装食品包装纸中砷含量的测定与分析

目的：了解大理市散装食品包装纸中砷的含量。方法：采用银盐法分析散装食品包装纸中砷含量情况。结果：16份样品中,12份检出砷,检出率为75.0%,16份样品均未超过国家标准值,合格率为100%。通过对各大超市和散装点检出率及砷含量进行比较,检出率差异有统计学意义,而含量差异无统计学意义;对是否含有油墨两种样品中的检出率及砷含量进行比较,检出率差异有统计学意义,而含量差异无统计学意义。结论：本次所检测的散装食品包装纸的卫生状况还是比较好的,但其砷的检出率高,说明仍存在一些问题,卫生监督部门应该引起重视。     

一起伦敦沙门氏菌食物中毒的实验室检验

目的对一起食物中毒的采集样本进行相关微生物学检验,并应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对检出的菌株进行溯源检测,确定引起食物中毒的病原菌(同源性).方法依据GB4789方法对采集的样品进行病原菌分离、鉴定及药敏试验(K-B法),应用PFGE检测技术对检出的伦敦沙门氏菌进行分子分型,通过BioNumerics软件进行聚类分析.结果所检出5株菌株的生化试验、血清学试验和药敏试验结果一致,PFGE图谱有4株为相同菌株,1株菌株与其他菌株相似率为96%.结论该起食物中毒与伦敦沙门氏菌分离株为相同克隆群,PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究.     

微生物法测定功能性饮料中维生素B12含量研究

该文建立了测定功能性饮料中维生素B12含量的微生物法.参考食品安全国家标准GB 5413.14—2010婴幼儿食品和乳品中维生素B12的测定方法，利用莱士曼氏乳酸杆菌生长速率与B12浓度的线性关系，制备标准曲线，根据标准曲线计算样品中B12的含量.根据功能性饮料与奶粉基底不同，对国标法中样品处理进行优化改良，同时实验中进行了加标回收对实验过程进行质量控制，并使用试剂盒法对测定结果进行比对.该方法操作简便，灵敏性及准确性高，可适用于功能性饮料中维生素B12含量的检测.