Nuc和mecA基因在金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性检测中的初步应用

目的为获得金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药信息,评估通过PCR扩增nuc基因、mecA基因检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。方法收集获得63株临床分离鉴定的金黄色葡萄球菌,采用传统药敏检测方法进行菌株药敏测试;再用PCR方法检测菌株是否携带nuc基因和mecA基因,以传统药敏检测结果为参照,评估用PCR扩增技术检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。结果 1.样本菌株中有24株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphyococcus aureus,MRSA),39株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphyococcus aureus,MSSA)。来自重症医学科的分离株中MRSA数量较多。2.样本菌株nuc基因携带率为85.7%,其中nuc基因在MRSA菌株中的携带率为87.50%,在MSSA菌株中携带率为84.62%;3.样本菌株mecA基因的携带率为19.05%,其中MRSA菌株的mecA基因携带率为50.0%,MSSA中均不携带mecA基因。来自重症医学科的MRSA中同时携带mecA基因和nuc基因的比例为77.78%。结论用PCR技术检测nuc基因、mecA基因来快速鉴定金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性可能存在一定比例的误诊结果。     

成都地区健康犬及其畜主鼻腔金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的分离及耐药性研究

为了解成都地区健康犬及其主人金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌的携带率及耐药情况,对收集的鼻腔棉拭子样本308份(犬源和人源各154份)进行相关细菌分离、纯化及鉴定.对获得菌株进行药物敏感性和mec A基因检测.结果表明:犬源和人源金黄色葡萄球菌分离率分别为5.19%(8/154)和13.64%(21/154),犬源和人源中间型葡萄球菌分离率分别为9.74%(15/154)和2.60%(4/154);金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌中mec A检出率分别达20.71%和68.42%;29株金黄色葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶耐药最严重(耐药率R达93.10%),对青霉素G和复方新诺明耐药较严重(R分别为72.41%和58.62%),对其余药物呈不同水平耐药性(耐药率范围6.90%~27.59%);19株中间型葡萄球菌对磺胺二甲嘧啶、青霉素G耐药非常严重(R分别达100.00%和94.74%),对红霉素及复方新诺明耐药较严重(R分别为78.95%和73.68%),对其余药物呈不同水平耐药性(R范围5.26%~63.16%),26.32%中间型葡萄球菌对苯唑西林耐药.不同来源菌株表现出较严重多重耐药性,尤其是耐苯唑西林中间型葡萄球菌呈100.00%多重耐药性.以上结果说明,健康犬和人类鼻腔内可携带金黄色葡萄球菌和中间型葡萄球菌,这些菌株已呈较严重耐药性,在这些菌株中mec A基因普遍存在,应加强对这两种细菌流行情况及其耐药性检测.     

舍曲林对金黄色葡萄球菌多重耐药性的逆转作用

以多重耐药金黄色葡萄球菌为研究对象,通过测定非抗生素类药物舍曲林与不同抗生素作用的最低抑菌浓度、生长速率、时间-杀菌曲线及实时荧光定量PCR定量检测耐药基因mecA和外排泵基因norA的转录水平,探讨舍曲林对金黄色葡萄球菌多重耐药性的逆转作用及逆转机制.结果显示:当舍曲林质量浓度高于1μg/mL时,对金黄色葡萄球菌有抑制作用;亚抑菌浓度(1/2 MIC)的舍曲林和四环素联用时对金黄色葡萄球菌具有杀菌作用;当舍曲林和四环素、环丙沙星、克林霉素联用时对金黄色葡萄球菌具有协同或相加抑制作用,可使其对3种抗生素的敏感性提高75%以上;低质量浓度的舍曲林可显著降低外排泵基因norA和SCCmec基因盒中mecA基因的表达水平.实验结果表明,舍曲林能通过抑制norA和mecA等耐药基因的表达来调控金黄色葡萄球菌的多重耐药性,通过联合抑菌部分逆转金黄色葡萄球菌对多种抗生素的耐药性.     

142株金黄色葡萄球菌的分布及耐药性分析

了解酒泉市第二人民医院金黄色葡萄球菌的分布及耐药性,为临床合理使用抗菌药物治疗感染性疾病提供实验依据。对酒泉市第二人民医院2014年1月1日至2016年12月31日的门诊及住院患者中分离的142株金黄色葡萄球菌的分布及耐药性情况进行回顾性分析和总结。142株金黄色葡萄球菌中,来自脓液的占42.3%,居首位,其余依次为伤口分泌物39.4%,痰液11.3%,咽拭子4.2%,尿液2.8%。MRSA的检出率为23.9%,低于CHINET耐药监测网。对青霉素的耐药率高达97.2%,对克林霉素,红霉素的耐药率较高,分别为63.4%和70%。未检出对万古霉素耐药或中介的金黄色葡萄球菌。本院金黄色葡萄球菌对多种药物产生了不同程度的耐药性,虽然MRSA的检出率低于CHINET耐药监测网,但耐药趋势应引起重视。     

致仔猪腹泻大肠杆菌的耐药性与质粒谱分析

对河北省不同地区发病猪场分离的已经过系统鉴定的12株猪源大肠杆菌,采用K-B纸片法进行了15种抗生素的耐药性检测,并提取质粒,对耐药谱和质粒谱型进行了比较分析。结果显示,分离菌株对氨苄西林的耐药率达到了100%,对阿莫西林的耐药率为91.7%,对四环素和复方新诺明的耐药率介于50%～70%。分离菌株存在多重耐药性,以耐4种、6种和7种药物为主,占总数的75%。对分离菌株耐药谱与质粒谱的分析表明,大肠杆菌的质粒携带与细菌的耐药性之间并没有明显的对应关系。     

276例临床分离金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的 分析住院患者金黄色葡萄球菌的耐药特点,为临床合理用药提供依据.方法 细菌鉴定应用VITEK32全自动微生物分析鉴定系统,采用K-B法对临床分离的金黄色葡萄球菌菌株进行药物敏感性试验;头孢西丁和苯唑西林纸片扩散法检测MRSA.结果 276株金黄色葡萄球菌中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 165株占59.8％;金黄色葡萄球菌(MSSA) 111株,占40.2％.MRSA对青霉素G、氨苄西林100％耐药;对万古霉素、利奈唑胺、替考拉宁100％敏感;对氯霉素、呋喃妥因、利福平耐药率分别为9.1％、15.2％、17％;其他耐药率都在60％以上.MRSA的耐药率明显高于MSSA,且呈逐年上升趋势.结论 金黄色葡萄球菌对多种抗菌药均具有较高的耐药性,临床应根据药敏结果确定患者的治疗方案.糖肽类抗生素(万古霉素、替考拉宁)可作为MRSA重症感染患者的首选药物.     

血培养中的病原菌分布及耐药性分析

目的：了解血培养病原菌分布及耐药情况,为临床感染性疾病的治疗提供参考依据。方法：采用Bact/Alert3D血培养仪、VITEK-2 Compact鉴定系统及K-B法进行血培养、细菌鉴定和药敏试验,统计、分析病原菌分布及药敏结果。结果：4758份血培养标本分离出病原菌391株（8.22%）,检出革兰阴性杆菌197株,其中大肠埃希菌（131株）、肺炎克雷伯菌（21株）、洋葱伯克霍尔德菌（10株）检出率较高;革兰阳性球菌检出182株,以表皮葡萄球菌（53株）、人葡萄球菌（39株）、金黄色葡萄球菌（22株）为主。大肠埃希菌对氨苄西林、头孢曲松、复方磺胺甲恶唑耐药率高达94.92%、81.36%、63.49%;表皮葡萄球菌对青霉素G、红霉素耐药率高达95.65%、75.51%。结论：血培养病原菌菌种多样化,以大肠埃希菌、凝固酶阴性葡萄球菌为主,且对常用抗生素耐药率较高,临床应加强耐药性监测,合理选用抗生素。     

养殖环境病原菌以及超级细菌气溶胶的发生与传播的监测

为了观察和评估养殖环境耐药细菌气溶胶的形成与扩散,采用Andersen-6级空气样品收集器在养鸡场鸡舍环境舍内、外(到下风方向800 m)收集空气样品;与此同时,采集鸡只粪便样品。对样品分离的大肠杆菌(E.coli)进行药物敏感性测试。结果显示,各个地点分离的E.coli对利福平和青霉素完全耐药,但他们对妥布霉素、庆大霉素敏感;有不同数量的菌株对氟哌酸、链霉素、头孢哌酮、氯霉素、复合磺胺和四环素有不同程度的耐药性。采用多重PCR方法,分别对从鸡、猪、牛舍(共21个)及其环境中分离到的480株大肠杆菌,进行了5种毒素基因即STa,STb,LTa,Stx1和Stx2/Stx2e的检测。结果表明,分离株都携带有一定数量的毒素基因,很多携带2种或2种以上。通过对11个动物舍(鸡、猪、牛、兔)空气和粪便样品分离的426株肠球菌对四环素类(TetM)、氨基糖甙类抗生素及万古霉素VanA和VanB主要耐药基因的检测表明,14.55%的细菌对β-内酰胺酶耐药;分离株都存在不同程度的对四环素类抗生素的耐药性;共检测出31株肠球菌携带vanA和vanB耐药基因;绝大多数肠球菌携带氨基糖苷修饰酶(AME)基因的一种或几种。     

产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌的耐药性监测

目的：探讨大理地区产β-内酰胺酶金黄色葡萄球菌的耐药情况。方法：采用VITEK-32型全自动微生物鉴定仪将葡萄球菌属鉴定到种，头孢硝噻吩滤纸片法检测β-内酰胺酶，药物敏感试验采用K-B法。结果：61株金黄色葡萄球菌中产β-内酰胺酶13株，产酶率21．3％，产酶株对万古霉素最敏感，其次为左氧氟沙星，对其他抗生素的耐药率前四位分别是氨苄西林92．4％，青霉素G92-4％，红霉素84．7％，克林霉素69.3％。结论：金黄色葡萄球菌的β内酰胺酶检测应作为常规项目开展，产β-内酰胺酶的金黄色葡萄球菌对青霉素类，大环内酯类抗生素高度耐药，万古霉素无耐药菌株，为首选药物，应在药敏试验指导下合理选用抗生素。     

川西北牦牛源产肠毒素大肠杆菌的分子流行病学调查

为调查川西北地区牦牛源产肠毒素大肠杆菌的流行情况,对采自川西北甘孜州和阿坝州的26份腹泻牦牛粪便样品进行大肠杆菌分离,分别以分离的大肠杆菌DNA和牦牛腹泻粪便样本提取的总DNA为模板,采用PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌黏附因子K99+菌毛基因片段,分析产肠毒素大肠杆菌在牦牛腹泻中存在情况,同时比较两种DNA提取方法对产肠毒素大肠杆菌PCR检出率的差异;以分离自外表健康牦牛粪便的105株大肠杆菌DNA为模板,采用PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌黏附因子K99+菌毛基因片段,比较牦牛源产肠毒素大肠杆菌在外表健康牦牛和腹泻牦牛中的携带情况.结果:从26份牦牛腹泻粪便样本中共鉴定出84个大肠杆菌菌落携带K99菌毛基因,这些菌落分别来自所有26份牦牛腹泻样品,因此,牦牛腹泻样本100%分离并检测到携带K99+菌毛基因的产肠毒素大肠杆菌;而粪便总DNA检测结果为K99+菌毛基因阳性率84.62%(22/26),粪便中提取的总DNA模板K99+菌毛基因PCR检出率略低于分离鉴定的细菌DNA检出率;105株外表健康牦牛粪便样本分离株中检测到携带K99+菌毛基因的产肠毒素大肠杆菌34株,检出率为32.38%(34/105),产肠毒素大肠杆菌在牦牛腹泻样本中的检出率显著高于外表健康牦牛粪便的检出率(P0.001).结果表明,产肠毒素大肠杆菌在牦牛粪便中存在广泛,是引起牦牛腹泻的一种重要病原菌;以粪便中提取的总DNA为模板,可快速检测牦牛粪便中产肠毒素大肠杆菌的存在.     

针对不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株的agr Ⅰ-Ⅳ分型初探

目的:金黄色葡萄球菌附属基因调节子(agr)位点是一个全面的群集感应系统并且控制着毒力因子的产生,本研究旨在针对不同来源的金黄色葡萄球菌分离菌株进行agr Ⅰ-Ⅳ基因分型研究.方法:根据金黄色葡萄球菌agrⅠ-Ⅳ基因组别类型的引物,对五种不同来源的169株金黄色葡萄球菌DNA模板进行多重PCR扩增,获得目的基因,以判断agr基因型.结果:169株分离菌株中,agrⅡ型的检出率为19%(32/169),agrⅢ型检出率为12%(20/169),agrⅣ型检出率为8%(14/169),五种不同来源的金黄色葡萄球菌均有检出agrⅡ型,均未检出agrⅠ型,并且都含有未能分型的agr阴性菌株.研究结果表明不同来源金黄色葡萄球菌分离菌株中agr Ⅰ-Ⅳ基因型的流行情况.该方法对于金黄色葡萄球菌菌株分子分型有一定的借鉴意义,也为金黄色葡萄球菌菌株分子流行病学调查奠定一定的基础.     

猪源沙门氏菌的耐药性检测与分析

采集辽宁省大连市鲜猪肉78份,选择性培养基分离沙门氏菌,划线纯化后,通过invA 序列对菌株进行鉴定,采用纸片琼脂扩散法(K-B法)检测沙门氏菌对12种抗生素的耐药性。结果共得到15株沙门氏菌,检出率为19.23 %。沙门氏菌对各种抗生素的耐药率在0 ％～73.3 %,其中对硫酸庆大霉素的耐药率最高,为73.3 %;对其他抗菌药物的耐药率依次是盐酸诺氟沙星(60 %)、氟苯尼考、盐酸环丙沙星(53.3 %)>阿莫西林(13.3 %)>头孢噻吩、头孢噻肟、氨苄西林(6.7 %)>头孢曲松、头孢他啶、氨曲南、亚胺培南(0 %),共产生10种耐药谱。由此表明,目前大连市开发区的超市和农贸市场受沙门氏菌污染率较高,并且沙门氏菌对各类抗生素表现出了多重耐药谱,应该给予足够的重视。     

STEC的耐药性监测和分析

目的了解各种标本来源的产志贺样毒素大肠杆菌(STEC)对常用抗生素的敏感性.方法采用WHO推荐的K-B法,进行分鉴定菌株对18种抗生素的药物敏感试验,依照NCCLS判定结果.结果各种来源产志贺样毒素的大肠杆菌共46株,O157型23株,其余为非O157型.全部STEC对复方新诺明耐药,对链霉素耐药率为28.3%(13株),氨苄西林为30.4%(14株),红霉素为69.6%(32株),而且有5株对至少4种以上抗生素产生多重耐药,耐药谱为复方新诺明-链霉素-红霉素-氨苄西林.非O157型STEC耐药菌次为122,而O157型为63.结论非O157型STEC对抗生素可能较易形成耐药性.     

汕头南澳海绵Halichondria sp.放线菌分离的研究

海绵相关微生物是药物开发的重要资源.本文利用6种培养基对汕头南澳普遍存在的海绵Halichondria sp.的共附生放线菌进行分离和培养,共得到36株放线菌.基于16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,这些放线菌分别属于Streptomyces、Nocardiopsis和Micromonospora属.抗菌活性筛选结果显示,分离菌株分别对Staphylococcus aureus、Bacillus subtilis和Escherichia coli等的生长有抑制作用.同时分子方法筛选显示这些放线菌具有潜在产生聚酮类、角蒽环类和非核糖体多肽类的能力.本研究结果为海绵相关微生物在药物开发方面积累了基础数据.     

华东师范大学在校生皮肤上葡萄球菌类型及其抗药性分析

实验采集了华东师范大学在校学生皮肤表面的细菌样品,通过Baird Parker培养基选择性分离葡萄球菌属菌株.对分离到的菌株进行染色体DNA的提取,并扩增16S rRNA基因;通过16S rRNA基因序列分析菌株类型及菌株之间的系统发育关系;最后利用纸片琼脂扩散法(K-B法)检测葡萄球菌菌株对10种常见的抗生素敏感性并进行分析.结果分离得到了共31株葡萄球菌菌株,然后对各菌株的16S rRNA基因序列进行系统发育关系分析,将其分为6个不同的葡萄球菌种.通过对抗生素敏感性分析显示,31株菌中对10种抗生素检测没有完全敏感的菌株,其中氨苄青霉素、阿莫西林和恩诺沙星3种抗生素抗菌效果都比较低,抗性率分别为91％,91％和72％;阿米卡星的抗葡萄球菌效果最好,在31株菌株中只有3株菌株对阿米卡星具有抗性.上述结果显示,不管是维族人群还是汉族人群,皮肤表面都存在大量葡萄球菌,而维族人群中存在的数量高于汉族人群,但在菌株类型上并没有显著差异.存在于健康人体表面的葡萄球菌对常见10种抗生素具有较高的抗性,阿米卡星对葡萄球菌的敏感性最好.     

康宁木霉（Trichoderma koningii）SMF2分泌的peptaibols类抗菌肽Trichokonins抑菌活性研究

Peptaibols是一类来源于土壤微生物，由非核糖体合成酶（nonribosomal peptide synthetase， NRPS）合成的富含α 氨基异丁酸（α aminoisobutyric acid, Aib）的抗菌肽的总称. Trichokonins属于长链peptaibols第一亚家族，其对普通金黄色葡萄球菌和1株临床分离的多抗金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）均为50?μg/mL，但时间杀菌曲线表明后者对MIC浓度的Trichokonins耐受性明显大于前者. 在含50?μg/mL浓度Trichokonins的培养基中连续转接20次后普通金黄色葡萄球菌和多抗金黄色葡萄球菌对Trichokonins的敏感性都明显降低，MIC值均提高到200?μg/mL以上, 表明金黄色葡萄球菌对Trichokonins产生了明显的抗性. 这与目前普遍认为的抗菌肽不易产生抗性的观点不一致, 其抗性产生的具体机制有待于进一步的研究.     

喙尾琵琶甲抗菌活性的研究

目的:观察喙尾琵琶甲乙醇提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抑菌活性.方法:采用试管稀释法测定喙尾琵琶甲乙醇提取物对5株临床分离的MRSA菌株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),初步判断其抑菌效果.结果:喙尾琵琶甲乙醇提取物对5株MRSA的MIC值为0.98～1.95 mg/mL,MBC值为3.9～7.8 mg/mL.结论:喙尾琵琶甲乙醇提取物具有良好的体外抑菌活性.     

野生树鼩可培养细菌和真菌携带情况的调查

目的对树鼩携带的可培养微生物群系进行初步调研,为制定树鼩的微生物学等级标准提供依据。方法采集61只野生树鼩呼吸道分泌物、肠道内容物和体表毛发,接种于多种培养基进行细菌分离培养,并进行生化、药敏和16SrRNA测序鉴定。结果在所采集的样品中共分离和检测到可培养的16个科32个属56种细菌及10个属的11种真菌;以肠杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属和支原体属的携带率最高。其中常见病原菌有甲型副伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、嗜肺巴斯德杆菌、肺炎链球菌、空肠弯曲菌、弗劳地柠檬酸杆菌、鲍氏志贺菌和支原体等。结论树鼩携带细菌和真菌的属种丰富、复杂,存在着多种人兽共患疫病的病原微生物。