P15^INK4b／MTS2对人肝癌细胞增殖的影响

利用自行构建的稳定高表达Ｐ１５ＩＮＫ４Ｂ的人肝癌细胞，研究了抑癌基因Ｐ１５在细胞增殖中的作用。首先将抑癌基因Ｐ１５的ｃＤＮＡ构建到高效真核表达的质粒载体ＰＸＪ４１－ｎｅｏ中的ＥｃｏＲＩ／ＸｈｏＩ位点，构建成Ｐ１５真核表达质粒ＰＸＪＰ１５。通过脂质体法将ＰＸＪＰ１５质粒转梁人肝癌细胞ＸｈｏＩ位点，构建成Ｐ１５真核表达质粘ＰＸＪＰ１５。通过脂质体法将ＰＸＪＰ１５质粒转染人肝癌细胞ＸｈｏＩ位点，构建成Ｐ     

Pfu酶基因的克隆、表达、纯化及长距离PCR的研究

用ＰＣＲ方法从Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆｕｒｉｏｓｕｓ的总ＮＤＡ扩增出了含有Ｐｆｕ ＤＮＡ ｐｏｌＡ基因的２．３ｋｂ片段,并将该基因克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ载体。用ＮｃｏＩ和ＸｈｏＩ对重组质粒ｐＴ－ｐｆｕ进行了酶切。并将ｐｆｕ ｐｏｌＡ基因捶 入表达载体ｐＥＴ－３ｄ－Ｘ。     

血管生成抑制因子TSF的设计、表达及其对血管生成的抑制效应

ＰＦ４的Ｃ－末端１３肽和ＴＳＰ１的４２９～４５９片段３１肽通过Ｇｌｙ－Ｐｒｏ－Ｇｌｙ肽桥设计为融合蛋白ＴＳＦ．采用ｐＧＥＸ－２Ｔ载体在 Ｅ．ｃｏｌｉＪＭ１０９中获得了 ＴＳＦ蛋白的高效表达．采用 ＭＴＴ方法、损伤细胞迁移实验。鸡胚绒毛尿囊膜实验和小鼠移植肿瘤抑制实验，测定了ＴＳＦ及其相关物ＧＳＴ－ＴＳＦ，ＰＦ４（５８－７０），ＴＳＰ１（４２９～４５９）等对血管生成和肿瘤生长的抑制效应．结果显示ＴＳＦ特异抑制小牛主动脉血管内皮细胞的生长，并有明显的剂量依赖关系；非常显著抑制血管内皮细胞的运动迁移；显著抑制鸡胚绒毛尿囊膜的新生血管生成；上述抑制活性ＴＳＦ＞＞ＧＳＴ－ＴＳＦ＞ＰＦ４（５８～７０）＞ＴＳＰ１（４２９～４５９）．ＴＳＦ显著抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的生长，１．０μｍｏｌ／ｋｇ·ｄ的ＴＳＦ对Ｌｅｗｉｓ肺癌的抑瘤率达到６８．７５％．结果说明ＴＳＦ的重组设计是成功的，ＴＳＦ为一个人工重组的有效的血管生成抑制因子．     

异三聚体G蛋白在细胞外钙调素调控rbcS基因表达中的作用

以转基因烟草悬浮培养细胞为材料，对异三聚体Ｇ蛋白在胞外钙调素（ＣａＭ）促进ｒｂｃＳ基因表达跨膜信号转导中的作用进行了研究．细菌毒素实验表明，Ｇ蛋白激活剂ＣＴＸ可以促进转基因烟草ｒｂｃＳ基因表达，而其抑制剂ＰＴＸ则抑制ｒｂｃＳ基因表达；同时证实ＣＴＸ可以恢复被ＣａＭ抗血清抑制的ｒｂｃＳ基因表达，而ＰＴＸ可以抑制外源ＣａＭ促进的ｒｂｃＳ基因表达，通过提纯包埋有ＧＴＰａｓｅ活性测定荧光底物的正向型质膜囊     

缺铁诱导玉米根cDNA文库的构建及铁胁迫基因(fdr3)的筛选和鉴定

为了分离铁缺乏相关基因，构建了一个滴度为４．５ｘ１０~５ｐｆｕ／μｇ的λＺＡＰ表达型缺铁胁迫玉米根 ｃＤＮＡ文库．通过差异筛选得到 ６个阳性克隆．经 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ验证在缺铁条件下加强表达的有ｆｄｒ３（Ｆｅ－ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ－ｒｅｌａｔｅｄ） ｃＤＮＡ ｃｌｏｎｅ。     

链霉菌M1033同源重组葡萄糖异构酶缺陷型菌株的构建

为实现有工业生产价值的葡萄糖异构酶双突变体酶ＧＩ（Ｇ１３８Ｐ－Ｇ２４７Ｄ）的稳定高效表达，在建立７号淀粉酶链霉菌Ｍ１０３３原生质体转化条件的基础上，构建了含６００ｂｐ不完整ＧＩ（Ｇ１３８Ｐ－Ｇ２４７Ｄ）结构基因片段的插入型同源重组质粒ｐＸＷ，并通过同源重组模式整合到Ｍ１０３３的染色体上，实现了ＧＩ基因的破坏（ｇｅｎｅ ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ），获得了同源重组葡萄糖异构酶缺陷型菌株。对同源重组片段的分     

角蛋白在诱导细胞凋亡的爪蟾卵提取物中发生特异降解

细胞色素Ｃ加入非洲爪蟾（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉｓ）卵提取物Ｓ－１５０，激活爪蟾凋亡特异蛋白酶ＸＣＰＰ３２，诱导非细胞体系凋半随凋亡诱导过程，卵提取物Ｓ－１５０表现出一定的变化，其蛋白组成，特别是骨蛋白变化明显，Ｗｅｓｔｅｒｎ检测证明爪蟾卵提取物中４２ｋｕ酸性角蛋白被ＳＣＰＰ３２特异降解。酸性角蛋白降低在凋亡过程中可能具有重要作用。     

PKC对HeLa细胞G1/S期进程调控及其机理的研究

研究了ＰＫＣ活性变化对ＨｅＬａ细胞Ｇ１／Ｓ期进程的影响及其作用机理，结果表明：（１）ＨｅＬａ细胞Ｇ１期ＰＫＣ活性的变化影响其Ｇ１／Ｓ期进程，其中Ｇ１期ＰＫＣ活性升高促进Ｇ１／Ｓ期进程，而ＰＫＣ活性降低显著抑制Ｇ１／Ｓ期进程；（２）ＰＫＣ的刺激剂ＴＰＡ促进早期应答基因ｃ－ｍｙｃ与ｃ－ｊｕｎ的表达，ＰＫＣ的抑制剂ＧＦ－１０９２０３Ｘ抑制其表达；（３）ＨｅＬａ细胞Ｇ１／Ｓ期进程中，ＴＰＡ作用促进Ｇ１期Ｃ     

人β-簇珠蛋白基因上游远侧端调控元件与GATA转录因子结合模式

用羟基脲诱导ＨＥＬ细胞，将诱导前后细胞核内蛋白质因子与人β－类珠蛋白基因ＬＣＲ调控元件内ＤＮａｓｅⅠ超敏感点Ⅲ和Ⅳ核心ＤＮＡ序列（ＨＳ３－１４７１６－－１４９９１ＢＰ和ＨＳ４－１８３０６－１８５８６ＢＰ）的结合模式进行了分析，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析结果表明，随着羟基脲诱导ＨＥＬ细胞时间的延长，细胞核内ＧＡＴＡ－２的含暧渐减少；与之相反，ＧＡＴＡ－１的含量却随着诱导的时间而增加。结合竞争性ＥＭＳ     

高能量分辨率的 μ-XRF实验分析

由Ｘ射线聚焦透镜联合Ｘ射线机形成的Ｘ射线微束与平面晶体波长色散位置灵敏谱仪（ＰＳＳ）构成的高能量分辨率的μＸＲＦ（ｍｉｃｒｏ－Ｘ－ｒａｙ ｆｌｕｏｒｉｓｃｅｎｃｅ）分析实验装置取得初步实验结果，在实验中，得到被绵计数率与Ｘ射线机功率成线性增长，ＴｉＫα和ＣｒＫα的能量分辨率分别达到１６．６和２３．６ｅＶ并能分辨开不锈钢中ＣｒＫβ和ＭｎＫα峰，和同步光微束与ＰＳＳ结合的结果相比较，表明用这装置实现高     

TMV-RNA 非翻译区对外源基因在整体植物中表达水平的影响

利用ＧＵＳ基因及ＴＭＶ－ＲＮＡ非翻译区序列构建了４种ＧＵＳ基因的植物表达载体，即ｐＢＧ４３７，ｐＢＧ４３８，ｐＢＧ４４０和ｐＢＧ４４０△ＮＯＳ。在这４种表达载体中带双增强子的３５Ｓ启动子的下游分别由ＧＵＳ－ＮＯＳ，Ω－ＧＵＳ－ＮＯＳ，Ω－ＧＵＳ－３’ＵＴＲ－ＮＯＳ和Ω－ＧＵＳ－３’ＵＴＲ组成４个不同的表达框架。转基因烟草ＧＵＳ活性检测表明，转ＰＢＧ４４０植株的ＧＵＳ活性是转ｐＢＧ４３７的５倍，是转     

MoO3/α-Fe2O3体系表面相互作用的研究

通过机械混全焙烧法制备了ＭｏＯ３／α－Ｆｅ２Ｏ３样品，采用了ＸＲＤ，ＸＰＳ，ＬＲＳ，ＴＧ－ＤＴＡ以及Ｍｏｅｓｓｂａｅｒ谱研究了ＭｏＯ３与α－Ｆｅ２Ｏ３之间的相互作用，ＸＲＤ和ＸＰＳ证实，在适当的温度下焙烧的样品，ＭｏＯ３在α－Ｆｅ２Ｏ３表面上的分散容量为０．８ｍｍｏｌＭｏＯ３／１００ｍ＾２α－Ｆｅ２Ｏ３，ＬＲＳ和ＦＴ－ＩＲ结果表明，在低含量的样品中，Ｍｏ＾６＋主要讲入α－Ｆｅ２Ｏ３的表面四面体位；     

龙虾D-甘油醛-3-磷酸脱氢酶与辅酶类似物结合的晶体学

与辅酶不同，辅酶类似物ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｅ和ＳＮＡＤ与Ｄ－甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＧＡＰＤＨ）的结合不表现协同性．用共晶方法和座滴汽相扩散技术培养出中国南海龙虾（Ｐａｌｉｎｕｒｕｓ ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ）ＧＡＰＤＨ与ＡＤＰ－ｒｉｂｏｓｅ和ＳＮＡＤ复合物的晶体．Ｘ射线衍射数据分析表明它们的空间群均为Ｃ２，并具有类似晶胞参数，分别为 α＝ １５．２８０ ｎｍ， ｂ＝ １０．０３５ ｎｍ， ｃ＝ １２．８３１ ｎｍ， β＝１１０．２８°和α＝１５．３４１ ｎｍ，ｂ＝１０．０５１ ｎｍ，ｃ＝１２．８４４ｎｍ，β＝１１０．４８°．估算不对称单位合１个分子即４个亚基．与ＧＡＰＤＨ全酶和酶蛋白晶体比较，属于不同晶型．这个结果提示着辅酶类似物的结合产生了比较大的酶构象变化，而且这个构象变化不同于辅酶结合引起的构象变化．旋转函数计算结果表明，这两种辅酶类似物复合物的四聚体也具有明显的２２２分子对称性．它们的结构分析并与全酶和酶蛋白比较将为了解酶的协同性机理提供一些有益的线索．     

稻瘟病病原物诱导启动子的构建及表达

利用ＰＣＲ技术从小麦和马铃薯中分别扩增并克隆了病原诱导性谷胱甘肽－Ｓ－转移酶基因ＧｓｔＡｌ和Ｇｓｔｌ启动子片段，将它们分别与水稻肌动蛋白基因（Ａｃｔｌ）核心启动子序列、５’端非翻译前导序列以及ＧＵＳ基因融合构建出植物载体ｐＷＭＩＧ－５０和ｐＰＭＩＧ－５０，然后转化水稻，并对嵌合启动子的诱导活性进行了分析。结果表明：（１）在转基因水稻细胞中嵌合启动子可受稻瘟病病原物的诱导；（２）水稻Ａｃｔｌ第一内含     

兔防御素NP-1基因在转基因烟草中的表达及其对烟草青枯病的抗性研究

从兔子肝脏细胞中扩增到防御素ＮＰ－１成熟的编码序列,长约２００ｂｐ。将此片段插入到切除了ＧＵＳ编码序列的ｐＢＩ１２１质粒载体中,构建成植物表达载体ＰＢＩＣ－３５ＳＮＰ１。     

高能量分辨率的μ-XRF实验分析

由Ｘ射线聚焦透镜联合Ｘ射线机形成的Ｘ射线微束与平面晶体波长色散位置灵敏谱仪（ＰＳＳ）构成的高能量分辨率的μ－ＸＲＦ（ｍｉｃｒｏ－Ｘ－ｒａｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）分析实验装置取得初步实验结果在实验中，得到被分析元素的计数率与Ｘ射线机功率成线性增长， Ｔｉ Ｋα和 Ｃｒ Ｋα的能量分辨率分别达到 １６．６和 ２３．６ ｅＶ并能分辨开不锈钢中 Ｃｒ Ｋβ和 Ｍｎ Ｋα峰，和同步光微束与 ＰＳＳ结合的结果相比较，表明用这装置实现高能量分辨率的元素分析是可行的．同时讨论了目前存在的问题及解决的可能性。     

固氮粪产碱菌ntrC 基因部分缺失突变株的构建及其特性

为研究粪产碱菌ｎｔｒＣ基因表达产物对其他固氮基因表达的调节功能，构建了ｎｔｒＣ基因的部分突变株。将粪产碱菌Ａ１５０ｎｔｒＣ基因克隆于自杀性质粒ｐＵＳＰ２０２上，获得重组质粒ｐＳＵＭ１，将ｌａｃＺ－Ｋｍ，Ｋｍ基因片段替换重组质粒中的ｍｔｒＣ片段，获得ｎｔｒＣ部件缺失的自杀性质粒ｐＳＵＭ２，ｐＳＵＭ３。采用同源重组双交换法将上述两质粒与野生型Ａ１５０１中的ｎｔｒＣ同源片段转换，获得ｎｔｒＣ部分缺失突变     

转基因马铃薯中病原诱导GO基因的表达及其对晚疫病的抗性

利用ＰＣＲ技术从黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）中扩增并克隆了葡萄糖氧化酶（ｇｌｕｃｏｓｅ ｏｘｉｄａｓｅ，简称ＧＯ）基因，并将马铃薯病原诱导型启动子（Ｐｒｐ１－１基因启动子）与其融合构建了植物表达载体ｐＣＡＭＧＯ。经农杆菌介导转化获得了转基因植株，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交显示葡萄糖氧化酶基因整合进马铃薯基因组。该基因的表达及所引起的Ｈ２Ｏ２的生成由淀粉－ＫＩ的显色反应得到证实。用马铃薯晚     

含RGD环六肽与整合素蛋白α_(Ⅱb)β_3的结合反应

ＲＧＤ序列普遍存在于细胞外基质蛋白中，并能为许多整合素蛋白所识别．利用 ＥＬＩＳＡ，ＳＰＲ等技术，对表面固定的人工合成生物素－含 ＲＧＤ环六肽［ｃｙｃｌｏ（－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－Ｇｌｙ－）］与人血小板整合素蛋白α_（Ⅱｂ）β_３的结合能力进行了检测结果表明，含ＲＧＤ环六肽与生物素基团之间的间臂长度在 １．４８～２．２ ｎｍ时， ＲＧＤ序列才能有效进入α_（Ⅱｂ）β_３以头部的反应中心并发生结合反应；反应的平衡解离常数为 １．１μｍｏｌ／Ｌ．为在固体表面研究整合素蛋白介导的细胞吸附过程提供了一个理想的模型系统．     

与水稻光敏核不育性相关的cDNA片段的鉴定和染色体定位

对利用ｃＤＮＡ－ＲＡＰＤ技术获得的光敏核不育水稻可育和不育幼穗ｍＲＮＡ差异表达的ｃＤＮＡ片段进行Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交鉴定，获得１个与光敏核不育性相关的阳性片段ＲＰＧ４３。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交及相应的ＲＡＰＤ分析表明，ＲＰＧ４３为单拷贝序列，是转录后的加工产物。序列分析表明，ＲＰＧ４３长度为７４４ｂｐ，其中第１２６～１８５的６０个碱基与人类１１号染色体的ｐａｃ ｐＤＪ３５６ｄ６ ＤＮＡ序列有７２％的