双载体固定化中国红豆杉细胞的初步研究

对采用海藻酸钠和聚乙烯醇（ＰＶＡ）混合的双勒体包埋中国红豆杉悬浮细胞的条件进行了初步研究,建立了一套合适的国家化细胞条件,海藻酸钠浓度为３０ｇ／Ｌ,聚乙烯醇（ＰＶＡ）浓度为７０ｇ／Ｌ,ＣａＣｌ２浓度２０／Ｌ,包埋浓度为０．１８ｇ／Ｌ,接种密度为０．１２ｇ／Ｌ,在此基础上,对中国红豆杉细胞固定化２的培养基进行了优化,实验结果表明,从红豆杉树皮中分离出的真菌物作为诱导物能限制细胞生长,且明显促进紫杉醇     

中国红豆杉悬浮细胞固定化增减生产紫杉醇

对海藻酸钠包埋法固定中国红豆杉悬浮细胞的条件进行研究,建立了一套合适的固定化操作条件,即海藻钠浓度为３０ｇ／Ｌ聚乙烯醇浓度为８０ｇ／Ｌ,ＣａＣｌ２沈度为２０ｇ／Ｌ,包埋密度为０．２ｋｇ／Ｌ,接种密度为０．１ｋｇ／Ｌ。     

固定化黄曲霉生产L—苹果酸的研究

报道采用海藻酸钠包埋法,以制备固定化黄曲霉生产Ｌ－苹果酸,确定最佳固定化条件和最适固定化细胞发酵条件,这些条件分别为海藻酸钠浓度２５ｇ．Ｌ＾－１,ＣａＣｌ２浓度２０ｇ．Ｌ＾－１,１０ｇ．Ｌ＾－１聚乙烯多胺和１０ｇ．Ｌ＾－１戊二醛交联,菌体浓度９０ｇ．Ｌ＾－１,葡萄糖浓度８０ｇ．Ｌ＾－１,起始ｐＨ值为６．０－７．０,培养温度３２℃,固定化细胞质量／培养基体积比例为１５／５０。     

红豆杉细胞植板方法的研究

在红豆杉细胞植板中,适宜的培养基是优化的ＭＳ培养基,其中ＮＡＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ,６ＢＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ;培养细胞生长周期约４０ｄ;培养基中最优碳源浓度是：蔗糖３０ｇ／Ｌ、葡萄糖１０ｇ／Ｌ．无机盐最佳浓度是：ＮＨ＋４１０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＮＯ－３４０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＰＯ３－４１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ．研究表明,培养基的ｐＨ值与植板率密切相关．氨基酸及维生素等有机成分能明显促进细胞生长．来自细胞悬浮培养物的条件培养基能显著地促进红豆杉培养细胞的单细胞在低密度植板时的克隆形成     

Chitosan对红豆杉PAL及Taxol合成的影响

研究了Ｃｈｉｔｏｓａｎ（聚氨基葡糖）对红豆杉悬浮培养细胞ＰＡＬ（苯丙氨酸解氨酶）活性及Ｔａｘｏｌ（紫杉醇）生物合成的影响．种胚来源的红豆杉细胞培养在改良ＭＳ液体培养基中,于培养的第１８ｄ添加不同浓度的Ｃｈｉｔｏｓａｎ．Ｃｈｉｔｏｓａｎ浓度为１００～１０００ｍｇ·Ｌ－１时对红豆杉细胞ＰＡＬ活性有明显的诱导作用,且诱导作用随浓度的增加而增强,在诱导作用下ＰＡＬ活性在１６ｈ达到峰值;Ｃｈｉｔｏｓａｎ浓度在１００ｍｇ·Ｌ－１时对红豆杉细胞的生长基本无抑制作用,增产效果最显著（约为对照组的１０倍）,Ｃｈｉｔｏｓａｎ可作为Ｔａｘｏｌ合成的诱导子．     

红豆杉细胞植板方法的研究

在红豆杉细胞植板中、适宜的培养基是优化的ＭＳ培养基,其中ＮＡＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ,６ＢＡ浓度为０．５ｍｇ／Ｌ,培养细胞生长周期为４０ｄ;培养在中最优碳源浓度是：蔗糖３０ｇ／Ｌ,葡萄糖１０ｇ／Ｌ,无机盐最佳浓度是：ＮＨ＾＋４１０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＮＬ＾－３４０ｍｍｏｌ／Ｌ,ＰＯ＾３－４１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ。研究表明,培养基的ｐＨ值与植板率在。氨基酸及维生素等有机成分能明显促进细胞生长。     

固定化猴头菌细胞的研究

报道了利用海藻酸钠固定化猴头菌细胞的发酵情况．就包埋剂的最佳浓度、固定化细胞的发酵条件以及固定化猴头菌细胞在深层发酵中应用的可行性进行了探讨．结果表明：最佳海藻酸钠的浓度为２％，氯化钙浓度为２％，固定化猴头菌细胞在发酵培养基内的代谢与游离细胞的代谢基本一致，发酵液中氨基酸含量最高可达８００ｍｇ／Ｌ，多糖含量最高可达１４００ｍｇ／Ｌ，固定化细胞可以连续使用３２～４８ｄ，因此固定化猴头菌细胞在工业生产中是可行的     

代谢途径的调节对紫杉醇生物合成的促进作用

通过采用一些代谢调节剂,研究了红豆杉细胞中一些初生代谢途径以及甲瓦龙酸（ＭＶＡ）途径与紫杉醇生物合成的关系,并对这些调节剂的协同作用进行了工艺研究．结果表明,第１５ｄ加入１００ｇ／Ｌ黄豆芽提取液、１００ｍｇ／Ｌ丙二酸钠和６．２ｍｇ／Ｌ硼酸,或第１５ｄ加入４２．７ｍｇ／ＬＣＣＣ,２５．６ｍｇ／Ｌα－蒎烯及１１．５ｍｇ／ＬＥＧＴＡ,其协同作用都能显著提高紫杉醇的产量．此外,试验结果表明真菌诱导物对细胞的影响与Ｃａ离子通道变化引起的信号传导有关．     

真菌诱导物对红豆杉细胞的影响

从红豆杉树皮、根皮中分离得到了十种真菌,由这些真菌制成的真菌诱导物加入到红豆杉细胞培养物中后,均能引起细胞发生过敏反应,细胞生长量下降,培养液ｐＨ值降低,但是各种真菌诱导物对紫杉醇合成的促进作用有很大的差别,最佳的情况为加入真菌诱导物后,紫杉醇的含量达到细胞干重的０．０７％．可为红豆杉细胞大规模培养提高紫杉醇的产量提供依据．     

前体物质和化学诱导子对云南红豆杉细胞生长和产生紫杉醇的影响

研究了几种前体物质和化学诱导子对云南红豆杉细胞生长产生紫杉醇的影响,结果表明,在培养第１２ｄ培养其中添加１ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１或２ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１苯丙氨酸、５ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１丙酮酸钠和１ｇ．Ｌ＾－１牛儿醇可显提高细胞中紫杉醇的含量,同对照相比,紫杉醇产量分别增加了４０．０％、９５．７％和１２１．３％;使用高盐渗透胁迫剂（３００ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１）高糖渗透胁迫剂（２５ｇ．Ｌ＾－１蔗糖和２５ｇ．Ｌ＾－１甘露醇）、桂皮酸（３ｍｍｏｌ．Ｌ＾－１）和硫酸钒酰（１０ｍｇ．Ｌ＾－１）可显促进细胞中紫杉醇的合成,同时对照相比,紫杉醇产量分别增加了２３．０％、８８．０％、４２．８％和１０３．０％。     

红豆杉细胞在反应器中培养动力学的研究

应用气升式生物反应器及搅拌式生物反应器悬浮培养红豆杉细胞,得到细胞生长和紫杉醇合成动力学曲线.经过反应器动力学的比较,结果表明红豆杉细胞较适于在机械搅拌式反应器中培养.     

Involvement of NO in fungal elicitor-induced activation of PAL and stimulation of taxol synthesis in<Emphasis Type="Italic">Taxus chinensis</Emphasis> suspension cells

Elicitor prepared from the cell walls of Peni-cillium citrinum induces multiple responses of Taxuschinensis cells, including nitric oxide (NO) generation, se-quentially followed by the activation of PAL and synthesis oftaxol. NO scavenger cPITO and nitric oxide synthase (NOS)inhibitor PBITU prevent the latter two reactions, all of whichare triggered in the absence of elicitor by NO donor sodiumnitroprusside (SNP). The elicitor-induced NO release ofTaxus chinensis suspension cells is strongly inhibited byPBITU. These results demonstrate a causal relationship be-tween NO generation and the latter two reactions of Taxus chinensis cells to the elicitor, and also indicate that NO, pro-duced via NOS in Taxus chinensis cells treated with fungalelicitor, might act as an essential signaling molecule for trig-gering the activation of PAL and synthesis of taxol.     

几种胁迫因素对中国红豆杉细胞培养的影响

中国红豆杉细胞培养过程中 ,在第 10d添加 0 .6mg/mL的真菌F5提取物可使紫杉醇的合成量达 30 0μg/ g干重细胞 ;在培养第 2 0d添加 2 0mg/LAg+ ,紫杉醇的合成量达 83μg/ g干重细胞 ;在培养第 2 0d添加 4mg/LCu2 + ,紫杉醇的合成量达 35 μg/ g干重细胞     

固定化微环境对南方红豆杉细胞生长

研究了固定化微环境对南方红豆杉细胞生长和紫杉醇合成的影响，结果表明：固定化细胞停滞期缩短，细胞膜脂氧合酶活性和脂过氧化产物含量远远高于悬浮细胞，同时苯丙氨酸解氨酶活性显著增加，微环境溶液内紫杉醇含量与悬浮细胞有显著性差异. 研究表明固定化微环境能促进红豆杉细胞紫杉醇含量增加但对细胞膜脂产生了过氧化.     

继代时间对南方红豆杉细胞生长和产生紫杉醇的影响

通过激素组合正交实验及继代时间的选择对南方红豆杉细胞增殖培养条件进行了优化研究。结果表明在细胞生长对数期继代比静止期继代细胞增长率提高 1.6倍 ,而紫杉醇产量差异不大。同时在对 75个激素处理的筛选实验中证实NAA与 6 BA的组合优于 2 ,4 D与 6 BA的组合 ,其中NAA 1mg/L +6 BA 1mg/L的处理可获得最大增长率     

继代时间对南方红豆杉细胞生长和产生紫杉醇的影响

通过激素组合正交实验及继代时间的选择对南方红豆杉细胞增殖培养条件进行了优化研究，结果表明在细胞生长对数期继代比静止期继代细胞增长率提高1．6倍，而紫杉醇产量差异不大，同时在对75个激素处理的筛选实验中证实NAA与6－BA的组合优于，2，4－D与6－BA的组合，其中NAA1mg／L＋6－BA1mg／L的处理可获得最大增长率。     

紫杉醇产生菌的筛选与发酵条件的调控

采用稀释倒平板法分别从云南红豆杉和南方红豆杉中分离出230余株内生真菌,经薄层层析、紫外及HPLC分析初步筛选,确定有5株表现出产紫杉醇的特性,其中1株真菌产率较高,约为1 mg/L.产紫杉醇的内生真菌菌丝体生长和紫杉醇积累之间存在相反的关系.低浓度乙酸铵(＜0.01 mmol/L)有利于菌丝体生长,不利于紫杉醇积累;较高浓度的乙酸铵不利于菌丝体生长而有利于紫杉醇积累.较高浓度的苯丙氨酸和酒石酸铵(＞0.05 mmol/L)有利于菌丝体生长,不利于紫杉醇积累;较低浓度的苯丙氨酸和酒石酸铵不利于菌丝体生长而有利于紫杉醇积累.亮氨酸对菌丝体生长和紫杉醇积累的影响很小;苯甲酸钠抑制菌丝体的生长和紫杉醇的积累.     

红豆杉胚源细胞株的培养和紫杉醇的生产

研究了建立适用于紫杉醇生物合成的红豆杉 ( Taxus chinensis)胚源细胞株的方法 .红豆杉成熟种子 ,用自来水冲洗 9d,培养 1 0 d,萌发率可达 1 0 0 %.已萌发的种胚在诱导培养基中培养 6d,愈伤组织的诱导率达 1 0 0 %,使用红豆杉茎源细胞株看护培养诱导出的愈伤组织使愈伤组织的继代成活率提高一倍 .红豆杉茎源细胞株生长 1 5d的条件培养液也能使愈伤组织继代成活率提高 60 %.对建立的胚源细胞株进行了筛选和培养 ,其中细胞株 E2和 E3生长快 ,紫杉醇含量也较高     

一株产紫杉醇的红豆杉内生真菌的分离鉴定

用组织研磨涂布法对中国红豆杉中产紫杉醇的内生真菌进行分离,得到45株内生真菌;通过形态学和分子生物学手段对一株产紫杉醇的菌株Tax-4进行鉴定,其结果为黑团壳属(Massaria)。表明从中国红豆杉中分离得到了一株产紫杉醇的黑团壳属内生真菌,丰富了产紫杉醇内生真菌的资源。