液体悬浮培养诱导金钗石斛原球茎增殖的研究

以金钗石斛原球茎为实验材料,通过液体悬浮培养,研究金钗石斛原球茎的增殖和多糖成份积累进行了研究。结果表明:金钗石斛在B5培养基+1.0mg.L-1NAA,蔗糖浓度为3%,10%香蕉提取物上清液的液体培养基中增殖最佳,可溶性多糖成分累积相对较高。     

金钗石斛转基因体系的建立

以金钗石斛种子为外植体建立组织培养体系,在含1.5 mg/L 6-BA MS培养基中添加0.5 mg/L NAA和2%蔗糖有效地诱导原球茎,诱导率达91.67%;添加0.25 mg/L NAA和3%蔗糖则更适于原球茎分化形成不定芽;添加0.1 mg/L NAA和2%蔗糖适宜于不定根的诱导. 同时建立了根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)转化金钗石斛的方法和体系:使用根癌农杆菌EHA105侵染30 min,共培养3 d时,金钗石斛根段、根尖和组培幼苗的转化率最高,而含腋芽的茎节则需要共培养5 d. 本文所建立的组培体系与转基因体系将为探讨金钗石斛的基因功能和调控机制等生物学问题,及建立稳定转化的再生植株提供技术手段.     

细茎石斛组织培养研究

以细茎石斛(Dendrobium moniliforme(L)sw.)的种子进行离体培养,获得无菌苗.截取无菌苗的茎段作为外植体,进行组织培养.结果表明:最适宜诱导细茎石斛原球茎生成的培养为MS 0.5 mg/L6-BA 2 mg/L NAA 10%CM;最适宜细茎石斛原球茎增殖及幼苗分化的培养基为MS 4 mg/L6-BA 1 mg/L KT 1 mg/L NAA 10%马铃薯浸汁;最适宜细茎石斛壮苗生根的培养基为MS 2 mg/L NAA 10%香蕉汁;最适宜细茎石斛瓶苗移栽的基质为纯苔藓.     

金钗石斛VRN1-like基因的克隆及其表达分析

用20mg/L的噻重氮苯基脲（thidiazuron,TDZ）处理金钗石斛（Dendrobium nobile）成株叶片,观测其对开花的影响;以金钗石斛类原球茎为材料,通过同源克隆分离其VRN1-like同源基因,利用半定量RT-PCR分析细胞分裂素对该基因在腋芽和类原球茎中表达的影响. 结果表明,喷施TDZ可以代替低温处理诱导金钗石斛开花;通过同源克隆得到了金钗石斛VRN1-like基因DnVRNA的全长cDNA. 该cDNA编码的蛋白与高羊茅（Festuca arundinacea）和小麦（Triticum monococcum）中VRN1蛋白的氨基酸序列一致性分别为63%和62%. 半定量RT-PCR结果表明,DnVRNA在腋芽中的表达受TDZ的促进,而在类原球茎中,其表达也受到细胞分裂素和低温的诱导,暗示该基因可能参与细胞分裂素替代低温诱导金钗石斛成花的生物学过程.     

迷你石斛离体快繁技术研究

本文报道了迷你石斛兰侧芽培养的研究结果.试验表明迷你石斛侧芽在MS+NAA1.0mg/L+KT0.5mg/L+CW15%培养基上离体培养45d可形成原球茎;适宜的KT浓度可使原球茎增殖率提高;CW可以减少原球茎褐死现象和促进原球茎的增殖;壮苗以附加NAA0.3mg/L+10%香蕉汁的效果较佳,移栽基质以碎砖块炭=21较佳,成活率为86.4%.     

不同培养条件对金钗石斛悬浮培养细胞生长的影响

研究了培养温度、培养时间、初始p H、摇床转速对金钗石斛液体悬浮培养的影响。结果表明,在培养条件分别为培养温度为25℃、培养天数为30d、初始p H为6、摇床转速为120r/min时,金钗石斛原球茎增殖量最大,石斛碱的积累量也相对最高。     

金钗石斛兰组培苗的生根培养和移栽

以1/2MS为基本培养基,添加不同浓度的NAA、IBA和6-BA,配置16种培养基进行试验,筛选最适宜于金钗石斛兰生根的培养基.结果显示:1/2MS+0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA及1/2MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.2 mg/L IBA培养基最适宜于金钗石斛兰生根,生根率达100%,而且根系生长健壮.将金钗石斛兰生根组培苗移栽于6种不同的基质中,结果表明,以棕榈外壳作为移栽基质最佳,移栽成活率达100%,且幼苗生长良好.     

激素和添加物对蝴蝶兰组培快繁的影响

以蝴蝶兰人工授粉的果荚种胚和组培苗的叶片、茎尖为外植体,进行组织培养快速繁殖研究.结果表明,果荚种胚是最好的外植体材料,1个果荚可培育出上万个原球茎.种胚诱导原球茎最佳激素组合为:6-BA 0.3mg/L+NAA 0.2 mg/L;原球茎增殖最佳激素组合为:6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L;2%蔗糖和10%香蕉泥可以显著促进原球茎增殖;原球茎分化最佳激素组合为:6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L;诱导生根IBA 0.5mg/L最佳;炼苗后移栽苗成活率达95%以上.优化后的蝴蝶兰组织培养条件,可为蝴蝶兰快速繁殖工厂化生产提供参考.     

硒对铁皮石斛拟原球茎生长及抗氧化系统的影响

通过在培养基中添加Na2SeO3研究不同浓度硒对铁皮石斛组织培养拟原球茎的生长及抗氧化系统的影响.结果表明:适量加硒(≤0.2 mg/L)促进了拟原球茎的增殖生长,而高浓度硒(0.2 mg/L)则抑制了增殖,并且发现拟原球茎生长的最佳硒浓度为0.05 mg/L.低浓度硒(≤0.05 mg/L)显著增强了拟原球茎SOD、CAT、GSH-PX活性,而使POD活性降低、O2-产生速率变小,MDA含量明显下降;硒浓度过高(0.1 mg/L),SOD、CAT、GSH-PX活性被抑制,POD活性升高,O2-产生速率变大,MDA含量大幅上升.总之,适量加硒可增加产量,提高机体抗氧化能力.     

影响霍山石斛原球茎生长的若干因素

以霍山石斛原球茎为材料,研究了培养天数、不同生理状态、接种密度以及迭层培养方法对其生长的影响.实验结果表明:颜色翠绿形态饱满、组织致密的原球茎增殖和增重迅速;相同生理状态的原球茎在15～45d内增殖和增重最为显著;8个原球茎为一组的接种方式有利于原球茎的增殖和增重;迭层培养对上层原球茎增殖和增重具有明显效果.     

匙唇兰次生培养研究

研究了匙唇兰的类原生质体次生培养.建立了其原球茎次生培养的可行性方法,选择营养液中细胞分裂素与生长素的种类与含量.匙唇兰幼苗的侧芽与顶芽在改良MS(1949)培养基中离体培养6到10周即可形成类原生质体.检测不同的细胞分裂素与生长素配比对匙唇兰原球茎次生培养的效果.用Minitab14.12统计分析软件做方差分析.其结果表明,细胞分裂素6-BA与生长素NAA双因素的效应以及交互效应都显著.细胞分裂素6-BA有利于原球茎的次生扩繁与增殖,生长素NAA刺激生根,有利于幼苗的形成.新鲜椰乳对原球茎的增殖以及幼苗生根都有特殊的良好效果,其对照试验结果明显优于其它没有添加新鲜椰乳的配方.最佳增殖配方是细胞分裂素6-BA 2.0 mg.L-1和生长素NAA0.5 mg.L-1.诱导幼苗形成的最佳配方是细胞分裂素6-BA 2.0 mg.L-1和NAA1.0 mg.L-1.     

蒜头果组织培养再生系统的初步研究

以蒜头果（Malania oleifera）种子萌发获得的无菌苗进行离体培养的初步研究．结果表明：MS＋6-BA1．5mg／L＋NAA0．1mg/L激素组合能够较好地诱导芽的初始分化和增殖；适宜的继代增殖培养基为MS＋6-BA1．0mg/L＋NAA0．2mg/L；采用1／2MS＋IBA0．5mg/L为生根培养基，生根率为45．0％；移栽到河沙的生根苗成活率为52．5％．     

米邦塔食用仙人掌组培快繁技术研究

探索了米邦塔食用仙人掌组培快繁技术。得出不定芽诱导使用培养基MS＋6-BA3．0mg／L＋NAA0．1mg/L，外植体分化率达77．3％；继代增殖使用培养基MS＋6-BA1mg／L＋KT0．5mg／L＋NAA0．3mg/L，试管苗平均增殖倍数达10.19，结合反复利用原外植体的方法，增殖效率可进一步提高；生根培养基使用1／2 MS＋NAA0．1mg／L＋IBA0．1mg／L，生根率达100％，且根系发育优良；驯化及试管苗入地后，以保湿为主要管理措施，可保证移栽成活率在95％左右。     

厚荚相思组织培养与快速繁殖

以5年生厚荚相思(Acacia crassicarpa)的萌芽茎段为外植体进行了组织培养的初步研究，结果表明：改良的MS 6-BA2．0mg／L NAA0．2mg／L培养基能够较好地诱导芽的分化和增殖；适宜的继代增殖培养基为改良MS 6-BA1．5mg／L NAA0．2mg／L；较为想的生根培养基为1／2MS IBA0．5mg／L，生根率达95．0％；生根苗的移栽基质以黄心土的移栽效果最好，移栽成活率达90．0％。     

香石竹试管苗增殖培养的研究

本文探讨了香石竹试管苗增殖过程中,不同的生长调节剂、碳源、水质对增殖效果的影响。研究结果表明：在ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ和６－ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ的生长调节剂组合下,试管苗增殖效果好、苗壮,增殖率达４．７。用４０ｇ／Ｌ的市售白糖代替３０ｇ／Ｌ化学纯蔗糖作为培养基的碳源是可行的,既降低了配制培养基的成本,又不影响苗的增殖和质量;但以自来水代替蒸馏水作培养基的水质,则不利于苗的生长和增殖。     

金线莲丛生芽的增殖和壮苗生根

通过对不同培养基的培养效果进行对比分析后筛选出适宜金线莲的生长的培养基分别是：丛生芽增殖最佳培养基为MS＋6-BA3mg/L＋NAA0.8mg/L,两个月的增殖系数达到4.5;壮苗最佳培养基为MS＋NAA2mg/L＋6-BA1mg/L＋香蕉汁20%;生根最佳培养基为1/2MS＋IBA1mg/L＋NAA1mg/L＋香蕉汁20%＋Ac0.8g/L,生根率达100%.     

食用百合卷丹离体培养再生体系的建立

选取食用百合卷丹的鳞片作为外植体,以MS为基本培养基,添加6-BA和NAA的不同植物激素组合,分组进行不定芽诱导、继代增殖和诱导生根培养。结果表明,鳞茎的中层鳞片具有较强的不定芽分化能力,6-BA 0.5mg/L＋NAA 0.1mg/L的激素组合适宜于鳞片的不定芽分化和继代增殖,而最利于诱导生根的激素组合为NAA 1.0mg/L＋6-BA 0.1mg/L。组培苗经过60天左右培养可在培养基中直接产生小鳞茎。     

741杨离体快繁和叶片再生体系的建立

选用741杨的茎段和生根组培苗叶片为外植体,采用不同浓度组合的BA和NAA对741杨的离体快繁和叶片再生体系进行了研究。结果表明：741杨芽增值的最佳培养基为MS＋6-BA 0．5mg／L＋NAA 0．1mg／L;最佳生根培养基为MS＋IBA 0．3mg／L;741杨叶片不定芽诱导的最佳培养基为MS＋6-BA 1．0mg／L＋NAA 0．1mg/L。试验还研究了不同着生位置的叶片以及叶片在培养基上的放置方式对741杨叶片再生的影响。     

益母草愈伤组织分化及无性系建立的研究

以益母草根颈为材料,进行了愈伤组织诱导、增殖与分化,分化芽生根,试管苗移栽、定植的研究.结果表明：MS＋6-BA 0.5mg·L-1＋NAA 0.6mg·L-1＋2,4-D1.2mg·L-1是愈伤组织诱导培养的理想培养基;MS＋6-BA0.5mg·L-1＋NAA0.1mg·L-1＋2,4-D 1.5mg·L-1是愈伤组织继代增殖培养的理想培养基;1/2MS＋6-BA 0.2mg·L-1＋NAA 0.1mg·L-1是愈伤组织分化培养和分化芽继代分化增殖培养的理想培养基;N6＋IAA0.2mg·L-1培养基是益母草分化芽生根培养的理想培养基.移栽成活率为94.4%;定植成活率为99.1%;定植成活的试管苗保持野生益母草的所有植物学性状.     

观赏与食用两用型羽衣甘蓝的组培快繁试验

研究了观赏与食用型羽衣甘蓝的组培快繁技术,结果表明:适宜的起始分化培养基为MS BA0.7mg/L NAA0.1mg/L 30g/L蔗糖,25d可分化出小苗,分化率达93%;适宜的增殖培养基为MS BA2mg/L NAA0.02mg/L 30g/L蔗糖,繁殖系数为4.5;适宜的生根培养基为MS NAA0.2mg/L IBA0.8mg/L 20g/L蔗糖,10d左右可长出3~4条新根,生根率90%,移栽成活率达90%以上。