结核分枝杆菌HSP65-hIL-2融合基因稳定转染细胞系的建立

建立可稳定表达结核分枝杆菌HSP65-hIL-2融合蛋白的稳定转染P815细胞系. 在阳离子脂质体作用下,将HSP65-hIL-2真核表达质粒转染与BALB/c 遗传背景一致的P815细胞(H-2d).G418筛选阳性克隆,RT-PCR和间接免疫荧光法检测目的蛋白的转录和表达. 阳性克隆细胞经RT-PCR检测到HSP65-hIL-2融合基因特异性的mRNA表达;用鼠抗人的IL-2 mAb进行间接免疫荧光检测,可在转染的P815细胞浆中观察到较强的绿色特异性荧光,而未转染细胞则为阴性.成功获得稳定表达HSP65-hIL-2融合蛋白的稳定转染细胞系,为其疫苗的CTL研究提供了合适的靶细胞.     

结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因疫苗的构建及表达

构建结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因疫苗,并对其在体外真核细胞中进行表达。用EcoRV和Hindm双酶切合HSP65-IL-2融合基因的pPaO-hsp65-IL-2载体,回收目的基因片断HSP65-IL-2,并将其亚克隆入同样双酶切的真核表达载体pcDNA3．1（-）中,重组质粒酶切鉴定正确后以脂质体瞬时转染COS-7细胞,并通过间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。重组真核表达质粒酶切后可获得约2067bp的融合基因HSP65-IL-2片段,间接免疫荧光检测重组质粒转染的COS-7细胞,可在细胞胞浆中看到特异性的绿色荧光。成功地构建了结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因的真核表达载体,且该重组载体可在体外真核细胞中获得特异性的表达。     

淬火加热温度对65Mn硬度的影响

对65Mn热处理试样进行不同加热温度的淬火处理,测试其硬度并采用金相显微镜分析其金相组织.结果表明,当加热温度为830℃时,硬度最高,其金相组织为比较细小的回火托氏体.     

小麦幼苗微管结合蛋白MAP65s体外对微管聚合影响的研究

微管结合蛋白与微管特异地结合在一起,参与调节微管的结构与功能,目前已成为植物细胞骨架研究的前沿领域。以"临优2018"小麦幼苗为材料,通过免疫印迹实验鉴定了小麦幼苗中微管结合蛋白MAP65s的存在并利用紫外吸收法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法初步探究了小麦幼苗MAP65s体外对微管聚合的影响,为进一步研究MAP65s蛋白的生理功能提供了重要的依据。     

转炉—精炼—连铸工艺生产65#钢质量控制

针对65#钢的技术难点,采用转炉-LF炉-连铸工艺生产65#高碳钢.采取以下措施:在转炉冶炼环节中控制入炉原料,改进装料制度,采用MURC多功能复吹,合理挡渣出钢渣洗;炉外精炼环节中,选择合适的精炼渣系,提高脱硫能力,控制钢中Al含量,稳定钢水成分和温度等;连铸环节中,选择合适浇注温度,改善二次冷却,全程保护浇注,使用结晶器电磁搅拌技术.结果表明:铸坯低倍组织控制良好;铸坯碳偏析指数控制在1.1以内,符合钢种要求;对改进后的产品质量取样分析,检验结果完全达到了相关产品标准的要求,达到了国内同类产品先进水平.     

胰岛自身抗原GAD65片段和胰岛素B链基因共表达DNA疫苗的构建与表达

构建两种胰岛自身抗原谷氨酸脱羧酶（ glutamic acid decarboxylase, GAD） 65片段与胰岛素B链基因共表达DNA疫苗,并检测其在体外COS-7细胞中的表达。PCR方法从GAD65质粒中扩增出GAD190-385和GAD490-570两个片段的cDNA,overlap法再分别与信号肽基因进行拼接,将拼接后的融合基因SGAD190-515和SGAD490-570分别与胰岛素B链基因依次克隆入双启动子真核表达载体pBudCFA．1中。重组质粒经酶切和测序鉴定后,脂质体体外转染COS-7细胞,Western blot方法检测目的基因在该细胞中的表达。结果表明核酸序列测定克隆的融合基因和胰岛素B链基因序列与报告序列一致,开放阅读框正确,Western blot显示转染了DNA疫苗的COS-7细胞中均可检测两个目的基因的表达。两种GAD65片段与胰岛素B链基因共表达DNA疫苗均成功构建,为自身免疫糖尿病的免疫干预研究奠定了实验基础。     

Ⅰ-65增强柔红霉素抗癌活性的研究

采用体外细胞培养技术,观察了钙离子阻断剂3、6-[=甲氨基]-=苯骈碘杂六环枸橼酸盐(I-65)单独和与柔红霉素(DNR)合用对L_(1210)细胞增殖的影响。结果:单独应用I-65时对细胞的增殖和集落形成抑制作用极小;与DNR合用,可显著增强DNR对细胞增殖的抑制作用。其ID_(50)为单用DNR的1/11。联合用药时细胞集落形成率较单用DNR(0.15μg/ml)下降14倍,证实I-65能显著增强DNR的抗癌活性,为广泛应用DNR,减轻心脏毒性,防止耐药提供新手段,为临床提供了一种新的抗癌药物增效剂。     

铌对65Cr4W3Mo2V钢显微组织及机械性能的影响

通过改变65Cr4W3Mo2V钢中Nb的含量,研究了Nb对不同温度淬火回火钢的显微组织和机械性能的影响.结果表明:当加热温度超过1100℃时,随加热温度升高和Nb含量的增加,Nb对晶粒的细化作用越明显;随着Nb含量的增加,钢的机械性能提高,当Nb含量为0.25%(质量百分数,下同)时,作用最明显.     

24LC系列EEPROM原理及应用

介绍了24LC系列EEPROM的结构、性能和应用技术及其在AT89C51单片机系统中的应用实例。该技术已经在环境监测系统的应用中取得显著效果。     

耐蚀黄铜带及其生产工艺研究

黄铜带以其本身的特点而深受用户青睐,但黄铜带产品在长时间的存放和使用过程中容易出现变色、腐蚀等现象,影响材料可靠性和使用寿命。以普通黄铜带为基础,通过添加第三种元素(Sn)来改变金相组织结构,采取先进的生产工艺,可以提高产品的抗腐蚀能力。     

现浇混凝土空心楼盖非线性分析

现浇混凝土空心楼盖是三维受力板柱体系,两方向截面抗弯刚度不等。本文通过介绍混凝土本构关系、材料非线性理论,运用国际通用分析软件ANSYS中SOLID65单元对此空心板进行非线性仿真分析,给出了空心楼盖在竖向均布荷载下最大Mises应力分布、第一批、第二批裂缝等值线图。     

基于查找表的AD2S65芯片软件算法实现

由于高性能DRC芯片的禁运,导致货源的紧缺和价格的上扬。为此提出了微处理器控制电路实现DRC芯片功能。介绍了DRC芯片AD2S65的功能特点及工作原理,提出了DRC芯片电路实现的方案——基于C8051F单片机的系统方案,并介绍了硬件结构及软件设计流程。在软件算法实现过程中,为提升数据处理速度,使用查找表的算法,使用最少的器件实现了原芯片的所有功能,并实现了产品模块化、小型化的目的。     

一种储粮检测系统RS—485通信网络的设计

介绍了基于RS－485芯片SN65LBC184设计的一种用于工业控制、储粮温检等系统中的网络。并介绍了SN65LBC184芯片的特性和工作原理。     

慢性噪音暴露诱发小鼠低焦虑样行为及其分子机制的研究

噪音日益严重地影响着人类的健康,为了探讨慢性噪音对小鼠情绪和注意力的影响及其分子机制.分别给予6周龄雄性小鼠以噪音刺激(75 dB,8 h/d),连续30 d后检测小鼠与情绪和注意力相关的行为表现.结果发现,噪音组小鼠在开场实验中心区域运动距离的百分比升高,在明暗箱实验中表现为在明箱中运动时间增多以及在强迫游泳实验中静...     

AVR单片机模拟I~2C总线数据的实现方法

介绍了I2C总线的概念、特点,提出了采用AVR单片机实现I2C总线数据传输的设计方法,并以通过I2C总线实现AT90S8515与24LC65之间数据传输为例,给出了实现该功能的硬件电路和软件程序。     

济钢X65管线钢板的开发与生产

介绍了济钢中厚板厂供国内某管道工程X65管线钢板开发生产情况,采用低C-高Nb—Mn—Ti的经济合金成分设计,配合洁净钢冶炼以及合理的板坯加热、轧制冷却工艺,生产出的X65管线钢板具有较高的强度,良好的低温韧性以及止裂性能。     

Ti含量对X65管线钢组织与力学性能的影响

利用光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察两组不同Ti含量的X65级别管线钢显微组织和析出物变化,并进行室温拉伸性能和0℃时CVN冲击功测试。结果表明,随着Ti含量增大,钢中析出物数量增多,多边形铁素体尺寸变细,珠光体形态退化,材料强韧性增大;Ti含量为0.11%时材料强韧性满足API Spec 5L—2007标准要求。     

义65井区高温低渗油藏储层伤害机理分析

义65井区沙三段九砂组油藏属中等水敏性和速敏性的地层,油藏为轻质油－稀油油藏,原油具有低密度、低黏度和高凝固点等特点,地层水总矿化度较高,一般为1100～19900mg/L,水型为NaHCO₃型。研究了义65井区高温低渗储层伤害机理,从地层特性、注入水水质、悬浮物堵塞、游离油和乳化油滴、结垢、细菌及以往增产措施等方面评价了可能对储层造成的损坏及损坏程度。义65井区地层的水敏性、速敏性和低渗透性是注水井损害的内在因素,注水井中悬浮固相颗粒、含油量和细菌严重超标,水质不合格是注水井损害的外在因素。     

"两次打击"急性肺损伤大鼠肺组织NF-kB p65 mRNA的表达

目的观察用油酸(OA)和脂多糖(LPS)两次打击急性肺损伤大鼠肺组织核因子———kB(NF_kB)p65 mRNA表达量的变化,探讨转录调节因子NF_kB p65与急性肺损伤的关系。方法用OA(0.2mL/kg)和LPS(2mg/kg)两次打击,建立两次打击急性肺损伤(ALI)模型,进行ALI大鼠血液白细胞(WBC)分类计数和肺指数测定、肺组织病理学检查,采用原位杂交检测肺组织中NF_kB p65 mRNA的表达。结果两次打击后的ALI大鼠血液中WBC和肺指数显著升高,WBC分类呈现淋巴细胞比率降低而中性粒细胞比例增高的变化,呈典型的急性炎症表现,肺脏病理改变严重。原位杂交检测显示,ALI大鼠肺组织细胞中NF_kB p65 mRNA的表达明显增强。结论在ALI大鼠肺组织细胞中NF_kB p65 mRNA的表达量增强,参与了急性肺损伤的发病作用。     

X65管线钢焊接接头抗开裂性能及止裂性能

为了研究X65管线钢焊接接头的抗开裂性能和母材的止裂性能，对接头的金相组织进行了观察，并且进行了接头各区域裂纹尖端张开位移(CTOD)试验和母材的落锤撕裂试验(DWTT)。试验结果表明：X65钢焊接接头焊缝和母材相比，组织粗大且不均匀，其冲击韧度和断裂韧度值均明显低于母材；X65钢管材对应剪切面积为40％的温度约为 -35℃，X65钢母材的抗开裂性能明显优于焊缝，且具有良好的止裂性能。