波尔山羊冷冻精液稀释液配方研究

实验采集三头波尔山羊种公羊精液,比较三种精液(A.葡萄糖-柠檬酸钠-卵黄;B.葡萄糖-柠檬酸钠-乙二胺四乙酸-卵黄;C.乳糖-卵黄)冷冻保存稀释液配方对颗粒冻精解冻效果,以及测定解冻后精子活力,结果表明:C稀释液解冻后精子的存活率平均为35.4%,优于A和B液呈现显著差异或极显著差异(P＜0.05,P＜0.01),而且C液的解冻后的存活时间为58.75h,高于A和B液,差异极显著(P＜0.01).结论:C的稀释液配方是最优的颗粒解冻配方.     

OEP、SDS与卵黄的相互作用时间及温度对犬冻融精子质量的影响

人工采取8只优质犬精液,以果糖-Tris-柠檬酸所组成的稀释液为基础,分别于试验前0.5 h和24 h将OEP,SDS和卵黄混合于基础稀释液中,并于5℃冰箱、22℃两个温度条件下保存,用时离心选取上清液作为稀释剂并制成细管冻精.利用流式细胞术和高倍显微镜对犬冻融精子活力、质膜完整率和顶体完整率等特性进行测定,目的在于比较不同温度条件下OEP,SDS和卵黄相互作用时间的长短对犬冻融精子质量的影响,以探讨OEP,SDS对冻融精子的保护作用机理.添加稀释液前24 h混合OEP和卵黄有利于维持冻融过程中质膜完整率(61.5%)和顶体完整率(66.8%),显著提高冻融精子的总活性比率(20.2%),对犬冻融精子的保护效果明显好于相互作用0.5 h实验组的保护效果(P<0.05);OEP,SDS与卵黄相互作用时的温度对犬冻融精子质量无显著影响(P>0.05),OEP对犬冻融精子的保护效果明显优于SDS.结果提示增加OEP,SDS与卵黄相互作用的时间可以提高犬冻融精子的质量.     

无卵黄型人类精液冷冻保护剂试验与临床初步应用

不含卵黄的“改良 Tyrode’s液—甘油”型冷冻保护剂(简称 T—G 保护剂)与含卵黄的“甘油—卵黄—柠檬酸钠”型冷冻保护剂的试验比较表明,两者的精子复苏率、膜低渗肿胀率、Kremer’s 精子宫颈粘液穿透试验、去透明带地鼠卵穿透试验没有显著性差异(P>0.05);T-G 保护剂的甘油浓度分别为15%、10%,6%时,精子复苏率没有显著性差异(P>0.05);应用 T-G 保护剂冷冻保护的精液,人工授精已使1名丈夫无精子症的妇女受孕,并足月分娩1男婴,生长发育正常,提示 T-G 保护剂能有效地保护精子的受精能力。此外,对“TES-Tris-甘油-卵黄”型冷冻保护剂去除卵黄后的效果观察,精子的复苏率显著低于对照组(P<0.01)。     

保存液及保存条件对中华绒螯蟹精子存活率的影响

以精子存活率和精子密度作为判据，研究了低温（4 ℃）条件下6种保存液体外保存中华绒螯蟹精子的效果.精子存活率采用伊红染色法检测，六种保存液分别为无钙离子人工海水I、无钙离子人工海水II、海水等渗NaCl溶液、无菌中华绒螯蟹生理盐水、海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液.结果显示，六种保存液中海水等渗KCl溶液和海水等渗葡萄糖溶液的保存效果最差，保存2 d后精子即全部死亡，而两种无钙离子人工海水的保存效果较好，其中以无钙离子人工海水II的效果尤佳，其保存6 d后的精子存活率达92.19%，精子密度亦保持较高水平；故无钙离子人工海水II是中华绒螯蟹精子短期体外保存的理想保存液.在此基础上以无钙离子人工海水II作保存液，研究了精子密度、保存液pH值和渗透压对保存效果的影响.结果显示，不同精子密度的保存效果差异显著，其中以106～107个/mL的保存密度效果最好，在保存2 d后精子存活率仍保持在95 ％以上；在7~10的范围内保存效果较好，保存15 d后精子存活率均在90%以上；在以NaCl配制的渗透压范围为500～1 000 mOsmol/kg H2O的10个梯度保存液中，渗透压在750～850 mOsmol/kg H2O的范围内保存效果最好，该条件下保存15 d后精子存活率仍在75 ％以上.以上结果证实，中华绒螯蟹精子适宜的保存条件为：精子密度为106～107个/mL，渗透压范围为750～850 mOsmol/kg H2O，pH值为pH 7~10.     

卵黄缓冲液4℃保存3种低品质精液后的穿卵率变化

临床上采用手术、药物或激素调节疗法，对相当一部分不育患者的精液质量改善不明显。国外人类生殖临床目前趋向于借助体外的方法，对低品质精液作优化精子功能处理，但国内有关报告尚少，对不同低品质精液类型的处理效果未见详细评价。本研究探讨3种低品质精液经卵黄缓冲液冷保存后，精子受精能力的变化。参照世界卫生组织精液分析手册的精子参数标准，实验标本分为3组：低精子活动率组（n＝13），低精子密度组（n＝7）和低正常精子形态组（n＝9）。标本与卵黄缓冲液以等体积比混匀，置冰箱4℃；冷水浴24－48h。用去透明带地鼠卵穿透试验检…     

维生素B_(12)对牛冷冻精液精子质量的影响

牛精液冷冻前于精液稀释液中添加ＶＢ１２为试验组，不添加ＶＢ１２的为对照组。冷冻结果表明：试验组冻精解冻后精子活力、顶体完整率分别比对照组提高１６．１１％（Ｐ＜０．０１），１５．９％（Ｐ＜０．０１）；精子畸形率与ＧＯＴ活性均明显下降；精子存活时间延长。说明ＶＢ１２在牛精液冷冻中对牛精子形态结构具有保护作用。     

矮脚黄羽肉鸡的精液冷冻研究

对矮脚黄羽肉鸡,运用采集精液进行研究,其方法为人工徒手按摩其背、以尾部可以采得精液．对其品质进行测试表明:采精量平均0．512±0．316 mL(变动范围0．3-0．8 mL);精液似浓稠的牛乳状,每毫升精液中精子数17-19亿个,活力9级以上,pH值6．5,微腥．采出的鲜精,用2号 (3％柠檬酸三钠-卵黄稀释液)、3号(11％蔗糖-卵黄稀释液)、5号(11％蔗糖-0．1％柠檬酸三钠-卵黄稀释液)稀释液稀释,精子活力都8-9级,以5号液最好．即11％蔗糖-0．1％柠檬酸三钠溶液 100 mL中,加6 mL甘油,加16 mL鲜卵黄．与原精液做1:1稀释后用水浴套或毛巾包裹,直接放入5℃冰箱中平衡1 h后装入0．25 mL塑料细管,吊入液氮(-196℃)中冻存．在50℃温水中解冻后,精子活力在9级以上．其冻精稀释液以5号最佳．精子活力达6-7级．8号液(5％葡萄糖溶液 77 mL中加入甘油6 mL,鲜卵黄17 mL),3号液(11％柠檬酸三钠溶液100 mL中加6 mL甘油,16 mL鲜卵黄)也较好,冻精复苏后,活力达5-6级．     

光唇鱼精子的活力观察

通过测定精子的激活率、运动时间及寿命,研究了几种因子对光唇鱼精子活力的影响。结果表明,光唇鱼精子激活与运动的适宜pH为6.5～8.0;pH 7.0时,精子激活率达（93.33&#177;2.89）%、运动时间达（30.33&#177;1.53）s。精子在0.4%g/L NaCl溶液中的激活率达（93.67&#177;1.15）%,运动时间及寿命分别达（36.00&#177;1.00）s及（44.67&#177;1.53）s。精子在0.7%g/L KCl溶液中的激活率、运动时间及寿命分别达（93.33&#177;2.89）%、（55.33&#177;1.53）s及（65.33&#177;2.31）s。精子在（0.1～1.0）%g/L的葡萄糖溶液和CaCl2溶液中均不能激活。精子在室温28～30℃下存放3 h后活力明显下降,在低温4℃下存放5 h后活力与鲜精相比无显著差异。CF-HBSS液及1.0%g/L NaCl溶液可作为精子保存用稀释液。     

异氟醚体外对人活力低下精子运动的影响

观察异氟醚体外对人活力低下精子运动的影响.实验选取确诊为正常和活力低下的精液各10份,每份精液再均分为12份(每份100μL),随机分为3组,每组4份,分别移入12个培养皿中,每组一个培养皿不加任何药物作为对照,其余三个分别加入5、102、0 L异氟醚(培养皿内异氟醚气态浓度依次为0%、1.4%、2.8%、5.6%),立即将3组培养皿密封,25℃室温下分别静置0.5 h、1 h、2 h,采用计算机辅助精液分析系统检测精子的活动率和活力.结果发现:①1.4%~5.6%异氟醚作用活力低下精子0.5 h1、h,其活动率和活力均显著高于对照组,而2 h时无显著差别;1.4%~5.6%异氟醚作用正常精子0.5 h、1 h2、h,其活动率和活力均显著高于对照组;②异氟醚作用活力低下精子0.5 h和1 h时,5.6%异氟醚作用的精子活动率和活力均显著高于1.4%和2.8%异氟醚作用的精子,而在2 h时各浓度异氟醚作用的精子其活动率和活力之间无显著差别;异氟醚作用正常精子0.5 h、1 h和2 h时,5.6%异氟醚作用的精子其活动率和活力均显著高于1.4%和2.8%异氟醚作用的精子;③活力低下精子在各浓度异氟醚作用下,1 h和2 h时其精子的运动参数均比前一时间点显著下降,但正常精子的运动参数在各时间点之间无显著差异;④5.6%异氟醚作用活力低下精子0.5 h,提高精子活动率和活力的程度比正常精子活动率和活力的程度更为明显,且这种提高程度的差异有显著性.异氟醚不仅可以显著提高正常精子和活力低下精子的活动率和活力,而且提高活力低下精子活动率和活力的程度比正常组活动率和活力的程度更为明显.     

皱纹盘鲍精子的激活及超低温保存研究

用不同浓度的氨海水激活解剖获得的皱纹盘鲍精子并进行激活率和受精率的测定.以自然海水作基础溶液,以二甲基亚砜(DMSO)和甘油(Gly)做保护剂,在不同降温程序下,将解剖获得和经诱导自然排放的皱纹盘鲍精子置于液氮罐中保存24 h,解冻后检测精子的成活率.结果表明,加入自然海水后有64.27%的解剖精子被激活,但不能受精,经氨海水处理后的精子在0.02‰浓度条件下激活率和受精率最高,分别为85.60%、67.42%.自然排放和解剖获得的精子在14%DMSO、4℃平衡15 min,-20℃时平衡5min,-80℃时平衡5 min条件下精子存活率最高,分别为48.15%和64.01%.     

大蒜(Allium sativum)水浸液灭螺实验研究

采用大蒜的新鲜根、鳞茎和叶的3种不同浓度水浸液处理钉螺，并用清水饲养钉螺作对照。结果表明，经过一定时间的处理，大蒜的水浸液对钉螺有明显毒杀作用：其中，根、茎的水浸液效果最为明显，百分比浓度大于0.5%的大蒜根、茎水浸液对钉螺具有10％－100％的毒杀致死作用，处理时间在120h的，其死螺率可达80％－100％,0.5％的大蒜根水浸液浸泡120h时，死螺率为90%，1％的水浸液浸泡120h时，死螺率为100％，当用同种水浸液浸泡时，钉螺死亡率随水浸液浓度增加而升高；浸泡时间延长时，钉螺死亡率也升高。     

猪精液稀释液中不同水质对精子活力的影响

通过对猪精液稀释液采用不同水质的试验研究,结果表明:无污染的高山矿泉水和质量好的蒸馏水作稀释用水的精子存活时间最长,而用天然河水作稀释用水的精子存活时间最短。     

乌苏里貉在电刺激采精条件下的精液品质

在四年中,检测了53只次乌苏里貉在电刺激条件下的精液品质．结果表明,采精量平均为2．12±0．88 mL,每毫升精液中精子数平均为5．58±2．01千万个;精子活力平均9．3±0．1 级,pH值平均6．67±0．41,偏酸性;精子畸形率平均10．23±3．40％．精子在5℃冰箱内存活 24-28 h．     

冷冻保存对人类附睾精子功能的影响

目的：了解人类附睾精子经历冷冻保存后的精子功能变化。方法：应用精子功能检测方法。结果：１１ 例先天性双侧输精管缺如患者附睾精子标本冷冻保存后,每例冷冻标本均见活动精子,但精子活动率显著降低,精子活动能力减弱。精子膜完整率显著下降,头膜损伤－ 尾膜完整的精子率（ Ⅲ型精子） 显著升高,精子体外存活时间显著缩短。精子顶体蛋白酶活性降低。去透明带地鼠卵穿透试验检验精子体外授精能力失败的标本,采用显微注射技术可使精子辅助授精。结论：（１） 冷冻保存对附睾精子功能有显著的影响,造成精子功能减弱;（２） 冷冻精子仅用单一尾膜肿胀试验筛选,有可能拾取到的是尾膜完整,但头膜损伤的精子;（３） 建立显微授精技术可有效地对冷冻附睾精子辅助受精。     

金黄地鼠卵母细胞4℃保存的研究

目前体外评价人类精子受精潜力是借助去透明带地鼠卵穿透试验（HOPT）。但实际应用中，动物超排获得的新鲜卵往往难与精子完成制备的时相一致。而且，精子所需获能时间也存在很大个体差异。故此，离体后卵子若能在一定时间内保持活性则可避免这些不足。本文以4℃作卵子冷保存的条件进行实验，以期为HOPf应用冷保存卵提供参考性资料。卵子冷保存基液为HamsF10生理液，加人牛血清白蛋白、乳酸钙、碳酸氢钠等。以0．2mL为液滴，放人卵子20－30个／滴，置冰箱4℃水浴中保存。结果表明，冷保存24h组卵子的穿透率与对照组比较没有显著性差异。…     

黄腹角雉精液的低温保存

1999— 2 0 0 3年从 17只笼养黄腹角雉 (Tragopancaboti)采集精液 ,稀释后分别保存于 4℃的冰箱和 - 196℃液氮中 .在 4℃条件下 ,保存于生理盐水、C 2液、Lake液、Beltsville液等不同稀释液中的精液 ,其精子存活状况相差很大 ,其中保存于Beltsville液中的精子存活率 (S)最高 ,4 8h后仍有 6 0 %以上的活精子 .在精液的冷冻保存方面 ,受降温过程中精子内外渗透压的变化和结晶的影响 ,且对于冷冻保护剂 (二甲基亚砜 ,DMSO)的体积分数 (φ)以及降温速度的选择非常重要 :DMSO的 φ过高 (如 10 % )或过低 (如 1% ) ,都会大幅降低冷冻后精子的S ,实验发现 φ为 4 %的DMSO最适于黄腹角雉精液的冷冻保存 ;以不同的速度降温 ,也显著地影响着精液的保存效果 (P <0 .0 5 ) .     

C57BL/6J超排小鼠取卵时间对体外受精效果的影响

目的 探讨雌性小鼠注射绒毛膜促性腺激素(HCG)后，取卵时间对体外受精率的影响。方法 选用3～4周龄的野生型C57BL/6J雌鼠，体质量10～13 g,通过腹腔注射血清促性腺激素(PMSG)和HCG联合使用^[1]做超排处理。我们将超排后雌鼠取卵时间分为6个时间段，分别为13、14、15、16、17、18 h后取卵母细胞与新鲜精子做体外受精。取3月龄雄性小鼠附睾里精子，在HTF液里获能1 h后，用于体外受精。实验共分3组，每组12只雌鼠用于超排处理，共得到2-细胞胚胎数分别为258、199和243枚；分别移植到当天见栓的假孕鼠输卵管内，得到出生仔鼠分别为98只、87只、95只；出生率分别为37.98%、43.72%和39.09%。结果 总取卵数和2-细胞发育率，超排后15 h取卵发育受精率最高，这说明小鼠卵母细胞超排后14 h少数成熟，15～16 h完全成熟，排卵17 h后则开始出现退化。结论 3组实验最高受精率比较：第1组15 h后取的卵母细胞团受精率最高为79.17%、第2组15 h后取的卵母细胞团受精率最高为75.68%、第3组16 h后取的卵母细胞团受精率最...     

Ionomycin诱导小鼠精子顶体反应的初步研究

目的:探讨Ionomycin诱导精子顶体反应的效果.方法:收集小鼠附睾尾精子,体外获能后用不同终浓度的Ionomycin处理相同时间,以及用相同浓度的Ionomycin处理不同时间.FITC-PNA染色观察并统计精子顶体反应率.结果:用终浓度为1、5、10、50μmol/L Ionomycin处理1 h的精子AR率分别为31.6%、52.2%、57.4%和64.0%.用终浓度为5μmol/L的Ionomycin处理10、30、45、60、120、180 min的精子AR率分别为17.2%、25.0%、41.2%、52.2%、54.0%和55.0%.结论:Ionomycin可以诱导小鼠精子的顶体反应,且顶体反应率随着浓度和诱导时间的变化而变化.     

甲醛对雄性小鼠生殖细胞毒作用的研究

研究了液态和气态甲醛对雄性小鼠生殖细胞的毒作用,选用SPF级昆明种纯系雄性小鼠作为研究对象,液态甲醛染毒剂量分别为0．20,2．00,20．00mg／kg体重,采用腹腔注射染毒7d,观察睾丸组织的病理改变,并计算脏器系数、精子存活率、活动率、精子数及畸形率．气态甲醛染毒剂量分别为0．5,1．0,3．0mg／m^3,连续动态染毒72h,于首次染毒后第15天观察睾丸细胞的微核率,结果表明,液态甲醛能引起睾丸组织病理损伤,脏器系数、精子存活率、活动率和精子数减少,畸形率升高;气态,甲醛能诱导早期精细胞微核率增加,均呈现一定的剂量反应关系,液态甲醛和气体甲醛均具有小鼠生殖细胞毒性。     

人类精子的冷冻生物学特性

人类精子的冷冻保存，精子要经历与冷冻保护剂孵育、降温冷冻、超低温贮存和解冻复温等过程，这过程的化学和物理效应直接作用于精子，精子功能不可避免地受到影响。本研究应用多种方法探讨人类精子的冷冻生物学特性。精子活动率和活力采用Malker精子计算器测定（n=150），精子膜完整性应用低渗膜肿胀试验（n＝60），精子体外存活用培养法观察（n＝8），精子ATP含量用LKB荧光测定仪检测（n＝55），精子穿透宫颈粘液能力采用Kremer试验评估（n＝42），精子受精能力借助去透明带地鼠卵穿透试验检测（n＝30）。精子冷冻采用程序控制生物冷…