脱氨加压素:先天性和获得性出血症的一种治疗方法

脱氨加压素(1—脱氨—8—D 精氨酸加压素缩写为 DDAVP)是 L—精氨酸抗利尿加压素的一种合成类似物。由于它能提高循环血液中Ⅷ因子的促凝血活性和遗传性假性血友病因子含量,并使出血延长的时间得以缩短,因此 DDAVP 被确定为适用于轻微的和中度血友病以及遗传性假性血友病的一种非输血治疗药物。近来,也有人认为 DDAVP 对于与尿毒症、肝硬化和各种病原学的血小板机能障碍同时出现的延长了的皮肤出血的缩短是有益     

四例血友病B患者基因治疗的临床试验

报道了对四例血友病Ｂ患者基因治疗的临床试验，取自四例血友病Ｂ患者的自体皮肤成纤维细胞，通过反转录病毒介导的基因转移，能高效地分泌人凝血因子Ⅸ。用胶原包埋经遗传修饰的自体皮肤成纤维细胞，再移植到血友病Ｂ患者皮下。四例患者经治疗后，自发出血症状得到了减轻，血浆中凝血因子Ⅸ蛋白浓度和凝血活性明显地增加，其中两例患者增加较大，达到正常值的４％￣５％。另外两例患者体内的凝血因子Ⅸ和凝血活性也有不同程度的提高     

血友病B基因治疗进展

血友病B是一种严重的凝血功能缺陷遗传病，由于现行的治疗方法对血友病B的治疗效果均不令人满意。因此，有必要开展血友病的基因治疗研究。本文介绍了血友病B的发病机理以及以反转录病毒载体为工具进行血友病B基因治疗的研究进展。     

双抗体夹心ELISA法测定人凝血因子IX蛋白

用双抗体夹心ELISA法测定人凝血因子IX蛋白。在转入了外源人凝血因子IX基因的CHO细胞和HSF细胞的培养液中均测得一定量的IX因子蛋白,其量相当于正常人血浆IX因子蛋白的0.89%～3.81%,而对照细胞均为阴性结果。对一例血友病B患者(IX:C<0.1%)的分析结果表明,其血浆中含有的IX因子蛋白量相当于正常人的52.3%,因而将此病例归属于血友病B~R型。本法灵敏度高、特异性强、重复性好,可与一期法相互补充,应用于临床血友病B的诊断、分类、家系分析及携带者的检出。     

氯化钙溶液抑制家兔血液凝固机理研究

体外实验,对家兔全血或血浆用8％(0.72M)CaCl_2溶液9∶1做抗凝剂,用常规实验测定了8％CaCl_2抗凝血的可逆性,样本放置不同时间后,37℃,用生理盐水1∶1、1∶1.5、1∶2稀释,测血样凝固时间;凝血酶原时间(PT一期法)实验测外源性凝血系统在样本中的凝血活性;白陶土非特异粘附实验测接触因子或血小板生理活性。结果证明:8％CaCl_2溶液可逆性抑制内源性和外源性凝血系统,对抗凝血系统无显著影响。     

RNA对基因表达调控作用的研究进展

RNA可以单独或者通过与其它蛋白因子的相互作用参与基因表达的调控。在转录前水平,RNA分子可以通过介导DNA的甲基化或异染色质的形成来调控基因表达;在转录水平,RNA分子通过直接与转录因子或RNA聚合酶相互作用来调控基因表达;在转录后水平,RNA利用由siRNA和microRNA介导的RNA干扰机制,通过降解目标mRNA或阻碍目标基因的翻译来沉默基因的表达。此外,mRNA还可以通过感知环境中代谢物的浓度,通过形成核糖开关（riboswitch）来调控基因的表达;反义RNA可以从复制、转录和翻译3个水平上调控基因的表达。     

枝管藻多糖的提取及其抗凝血活性的初步研究

探讨枝管藻多糖的提取方法，并对枝管藻多糖的抗凝血活性进行研究。采用酶解－热水浸提法提取的枝管藻多糖能够显延长小鼠全血凝血时间、大鼠体外凝血酶原时间和白陶土部分凝血活酶时间，且呈明显的量－效关系。提示枝管藻多糖具有较强的抗凝血作用。     

反义核酸技术对人血管内皮细胞的改造作用

为降低在血栓形成早期血管内皮细胞分泌的血管性血友病因子(vWF)对凝血级联反应的触发效应,利用反义核酸技术构建降低vWF表达量的血管内皮细胞.人工合成vWF部分反义核酸(pvWF),构建重组的真核表达载体pcDNA3.1( )/pvWF.测序正确后用脂质体介导的方法转染血管内皮细胞,硫酸新霉素加压筛选后扩大培养转基因细胞,RT-PCR法检测转基因细胞中vWF mRNA的表达水平.结果表明,构建的vWF反义核酸真核表达载体能有效抑制细胞中vWF mRNA的表达,为新型抗凝血材料的研究提供一种基因改造的内皮细胞.     

凝血和抗凝血机制及其临床意义

<正> 凝血和抗凝血是血液系统的一对矛盾的统一体,是生理性防御反应,对机体都有非常重要的保护作用。凝血反应是防止小血管损伤后的出血,从而避免失血。抗凝血反应是防止血液在血管内发生凝固,从而保证血流的通畅。在一般正常情况下,     

蚌蛙蛭抗凝血蛋自的分离及抗凝血特性(英文)

以超速离心和肝素琼脂糖亲和层析从蚌蛙蛭（Batracobdellakasmiana）的粗提取液中分离到2种抗凝血蛋白．抗凝血活性测定证明,这2种蛋白具有显著抑制凝血酶的活性而不具有抑制凝血因子Xa的活性．亲和层析的蛋白洗脱峰与抑制凝血酶的活力峰相吻合;因此,蚌蛙蛭的抗凝血蛋白是属于凝血酶特异性的抗凝血蛋白．这为进一步研究蚌蛙蛭抗凝血蛋白的抗凝血机理及其应用打下了基础．     

HCV全长cDNA细胞培养适应性突变体的构建及其体外转录制备感染性RNA的研究

运用重叠延伸PCR方法对HCV全长基因组cDNANS3和NS5A上的E1202G、T1280I和S2197P进行细胞培养适应性突变,构建含有细胞培养适应性突变的HCV全长基因组cDNA,体外转录制备RNA,脂质体法转染人肝癌细胞Huh-7,以RT-PCR检测HCV正、负链RNA,间接免疫荧光法和Western blot检测细胞内HCVNS3蛋白的表达。结果证明,转染后细胞内可间断检测到HCV正、负链RNA及HCVNS3蛋白的表达,且突变体RNA与未突变的HCVRNA相比,明显具有更高的复制效率和蛋白表达。该研究为后续HCV体外培养体系的研究提供了可在细胞内高效自主复制的HCV病毒模板。     

利用CRISPR/Cas9系统构建LMNA基因突变 AC16人心肌细胞系

LMNA基因突变引发核纤层蛋白(LaminA/C)及其互作蛋白表达异常，引起机体一系列生理学反应，导致核纤层蛋白病发生，目前其具体致病机制尚不清楚。本文利用CRISPR/Cas9技术，选取符合sgRNA筛选原则的致病突变位点，成功构建了携带LMNA突变Q517X的细胞系，并对突变细胞系与LaminA/C相连或互作的LaminB1、PCNA、P53、PKCα等基因的RNA表达水平与蛋白表达水平及突变细胞核膜骨架形态进行检测，发现：Q517X突变细胞的LaminB1、P53、PCNA基因mRNA表达量显著降低约70%;LaminA/C蛋白几乎不表达，PKCα、LaminB1、P53等蛋白的表达量分别降低75%、60%、80%。结果表明，Q517X突变通过改变AC16人心肌细胞LMNA相关基因的表达进而影响细胞核正常骨架结构与功能。     

桑叶多糖的分离纯化及其抗凝血活性的研究

为了研究桑叶多糖不同组分在体外的抗凝血活性,采用水提醇沉法提取桑叶粗多糖,聚酰胺进行脱色和脱蛋白。用DEAE sepharose CL-6B 和 sepharose CL-6B 对桑叶多糖进行纯化,得到5种水溶性多糖组分(MPS-1、MPS-2a、MPS-2b、MPS-2c和 MPS-3)。单糖检测结果表明：桑叶多糖主要是由半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖和甘露糖等组成。体外抗凝血活性检测显示5种桑叶多糖组分均能延长活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)和凝血酶时间(thrombin time,TT)、而对凝血酶原时间(prothrombin time,PT)影响不显著,说明它们是通过影响内源性途径或共同途径而发挥抗凝血作用;与对照相比,MPS-2b在试验浓度范围内对 APTT 和 TT 的效果达到极显著,表明 MPS-2b 有潜力开发成抗凝血活性物质。     

肝素共混丝素蛋白膜上AT-的固定化及其体外抗凝血性能

用抗凝血酶(antithrombin-Ⅲ,AT-Ⅲ)和肝素对生物材料进行表面改性,以提高其抗凝血性能.以低浓度肝素丝素共混蛋白膜为基质,利用等离子体处理辅助的共价交联方法对AT-Ⅲ进行固定化.用过剩法对固定化效果进行评价,固定化后的活性采用体外凝血时间进行检测,人血管内皮细胞在材料上的生长情况用MTT法测定.结果显示,通过该方法可以有效地将蛋白固定化,低浓度肝素丝素共混膜固定化AT-Ⅲ后,不仅其抗凝血性能有了一定的改善,而且与普通的肝素共混膜相比,细胞毒性也有所降低.该研究结果拓展了AT-Ⅲ蛋白的应用范围,同时为抗凝血材料的设计提供了一种新的思路.     

肝素共混丝素蛋白膜上AT-的固定化及其体外抗凝血性能

用抗凝血酶(antithrombin- ,AT- )和肝素对生物材料进行表面改性,以提高其抗凝血性能.以低浓度肝素丝素共混蛋白膜为基质,利用等离子体处理辅助的共价交联方法对AT- 进行固定化.用过剩法对固定化效果进行评价,固定化后的活性采用体外凝血时间进行检测,人血管内皮细胞在材料上的生长情况用MTT法测定.结果显示,通过该方法可以有效地将蛋白固定化,低浓度肝素丝素共混膜固定化AT- 后,不仅其抗凝血性能有了一定的改善,而且与普通的肝素共混膜相比,细胞毒性也有所降低.该研究结果拓展了AT- 蛋白的应用范围,同时为抗凝血材料的设计提供了一种新的思路.     

不同重组慢病毒介导人凝血因子Ⅸ cDNA在血友病B小鼠中表达的影响

血友病B是凝血因子Ⅸ(hFⅨ)缺乏所导致的严重凝血功能障碍、X-连锁隐性遗传性疾病,在男性中的发病率为三万分之一．目前没有理想的治疗措施,而基因治疗可能是根治该病的安全、有效方法．该实验构建了ubiquitin—c和ABP(肝特异性)启动子指导hFⅨ表达的载体FUXW、FAXW,利用磷酸钙法共转染三质粒制备高滴度的重组慢病毒．将不同剂量的重组FUXW、FAXW病毒,分别用尾静脉液压法和静脉缓注法注射入血友病B小鼠体内,各治疗组小鼠血浆均可持续检测到hFⅨ抗原,最高峰值为45ng／mL,表达持续超过60d．结果表明：hFⅨ蛋白的表达与病毒的剂量成正相关,重组FAXW病毒的hFⅨ表达量高于重组FUXW病毒,而尾静脉液压组和静脉缓注组在表达量、表达时间上没有显著差异．     

肿瘤基因治疗的临床应用

基因治疗方法是通过基因转导技术赋于靶细胞一种新的功能或改变靶细胞某些基因的表达状况。目前基因治疗的疾病主要包括遗传性疾病、免疫缺陷病、肿瘤等。1991年12月在复旦大学遗传学研究所进行了国际上首例血友病的基因治疗。两位由于凝血因子Ⅸ缺乏而患有血友病B的患者被重新植入了大量转移有正常Ⅸ因子基因的自身皮肤成纤维细胞,结果病人体内Ⅸ因子含量都成倍上升,取得较好疗效。1990年9月,美国国立卫生研究院(NIH)用基因疗法治疗了一位由于体内腺苷脱氨酶(ADA)缺乏而患者严重联合性免疫缺陷的病人,他们将转移有正常ADA基因的患者自身淋巴细胞体外培养后重新大量输回病人体内,实验结果令人鼓舞。目前基因治疗已应用于很多种疾病。 肿瘤的基因治疗始于九十年代。1990年美国NIH首次对一位晚期恶性黑色素瘤病人进行了基因转导的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)     

盐源山蛭抗凝血蛋白的分离及抗凝血特性分析

以肝素琼脂糖亲和层析和超速离心分离了盐源山蛭的抗凝血蛋白,抗凝血活性试验证明,该蛋白不抑制凝血因子Ｘａ的活性,而显著抑制凝血酶的活性,亲和层析的蛋白洗脱峰与抗凝血酶的活力峰相吻合,因此,盐源山蛭抗凝血蛋白属于凝血酶特异性的抗凝血蛋白。     

葛仙米多糖硫酸酯抗凝血活性研究

以取代度为0、0.51、1.01的葛仙米多糖硫酸酯为原料,探讨了各样品的抗凝血活性.结果表明:葛仙米多糖硫酸酯能显著延长人活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶时间(TT),且具有一定的剂量效应关系,但对凝血酶原时间(PT)的作用不明显.说明其主要是通过抑制内源性凝血过程及共同凝血途径发挥抗凝血作用,对外源凝血途径影响较弱.     

线粒体病的分子生物学机制

线粒体病是一种少见的能量代谢病,病情复杂多样,从单一组织损伤或无明显临床症状到多系统发病乃致患者早期死亡,在临床上容易误诊或漏诊,甚至延误治疗.由于线粒体的结构与功能受核基闪组(nDNA)与线粒体基冈组(mtDNA)双重调控,其中大多数线粒体酶、结构蛋白和各种蛋白因子由nDNA编码,因而多数原发性线粒体病是nDNA突变...