α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产中的应用研究

论述了α-乙酰乳酸脱羧酶在啤酒生产发酵过程中的形成机理及应用。实验表明：采用在发酵过程中添加α-乙酰乳酸脱羧酶控制双乙酰含量能收到较为明显的效果。     

地衣芽孢杆菌高α-乙酰乳酸脱羧酶活力菌株的筛选

以从土壤中分离出的9株地衣芽孢杆菌为源菌株,通过α-乙酰乳酸脱羧酶活力实验发现BL-4的产酶活性最好,通过UV和NTG对BL4进行复合诱变,获得了一株产酶活性比出发菌株BL-4高1.22倍的α-乙酰乳酸脱羧酶高产菌株,并研究了该菌株的最佳发酵产酶条件是培养温度30℃、发酵时间36 h、发酵液起始pH 6.5。     

地衣芽孢相菌高α—乙酰乳酸脱羧酶活力菌株的筛选

以从土壤中分离出的9株地衣芽孢杆菌为源菌株，通过α-乙酰乳酸脱羧酶活力实验发现BL-4的产酶活性最好，通过UV和NTG对BL-4进行复合诱变，获得了一株产酶活性比出发菌株BL-4高1.22倍的α- 乙酰乳酸脱羧酶高产菌株，并研究了该菌株的最佳发酵产酶条件是培养温度30℃，发酵时间36h，发酵液起始pH6.5。     

壳聚糖固定化α-乙酰乳酸脱羧酶的研究

采用壳聚糖作为载体，戊二醛作交联剂制备固定化α-乙酰乳酸脱羧酶（ALDC），优化了固定化条件。实验结果：活力1380U／g，蛋白载量98．30mg／g，比活力14．04U／mg，活性回收率37，l％，固定化α-乙酰乳酸脱羧酶最适温度30℃，最适pH5．5。     

含α-乙酰乳酸脱羧酶基因重组酿酒酵母的啤酒发酵

利用E .coli和酿酒酵母的穿梭质粒pYES2为载体 ,将地衣芽孢杆菌α 乙酰乳酸脱羧酶基因导入酿酒酵母中 ,构建了重组质粒pYEA ,实现了α 乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达 .α 乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达与菌体生长有关 .pYEA质粒在无选择压力的发酵条件下 ,仅能保持一定的稳定性 ,并具有降解α 乙酰乳酸的能力 ,但丢失率比较高 .     

广西科技成果转让推荐

1．项目名称：α-乙酰乳酸脱羧酶生产。项目内容：1)项目建设的必要性及市场分析。     

α-乙酰乳酸的合成及α-乙酰乳酸脱羧酶产生菌的筛选与鉴定

利用有机反应合成α-乙酰氧基-α-甲基-乙酰乙酸乙酯，后者经NaOH水解生成的α-乙酰乳酸，可以用作测定α-乙酰乳酸脱羧酶(简称ALDC)活力的底物．通过富集，从土壤和水体中分离出100株产芽孢的菌株，其中获得VP反应为阳性的37株芽孢杆菌，通过对ALDC活力的反复测定，得到7株有较高酶活性的菌株，并根据其生理生化的特征进行了初步的鉴定，为进一步开发和利用α-乙酰乳酸脱羧酶奠定了基础．     

离子注入选育α—乙酰乳酸脱羧酶菌株

采用离子注入技术对一株产α-乙酰乳酸脱羧酶的地衣芽孢杆菌(Bacillus     

ALDC产生菌BD-5菌株的发酵条件初探

本文主要以2#培养基为基础，对BD－5菌株的产酶发酵条件做了初步探讨。通过对其葡萄糖、酵母膏、pH值及金属离子等不同用量的研究使α-乙酰乳酸脱羧酶的酶活力提高4～5倍。     

含α—乙酰乳酸脱羧酶基因重组酿酒酵母的啤酒发酵

利用Ｅ．ｃｏｌｉ和酿酒酵母的穿梭质粒ｐＹＥＳ２为载体,将寻衣芽孢杆菌α－乙酰乳酸脱羧酶基因导入酿酒醇母中,构建了重组质粒ｐＹＥＡ,实现了α－乙酰乳酸脱羧酶基因在酵母菌中的表达。     

广西大学14项科技成果获2006年度广西科技进步奖

2006年度我校14项科技成果荣获广西科技进步奖,其中一等奖1项,二等奖4项,三等奖9项。具体项目如下:获一等奖项目:广西大学生命科学与技术学院黄日波教授主持的“高密度培养生产高活力α-乙酰乳酸脱羧酶”。获二等奖项目:(1)广西大学农学院卢美英教授主持的“促花、控梢、保果调     

地衣芽孢杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌（Bacillus licheni formis）AS10106α－乙酰乳酸脱酸酶经硫酸沉淀，聚乙二醇沉淀，DEAE－Sepharose Fast Flow离子交换，Gigapite K-100S柱层及SephadexG－100分子凝胶过滤柱等分离纯化步骤，得到SDS－PAGE电泳纯，α－乙酰乳酸脱羧酶的比活提高了53．5倍。对该酶性质的研究表明，酶单亚基分子量为32Kda，等电点为4．5；该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH为6．0，对热（40℃以上）敏感。在pH5．0－6．5之间稳定。酶活不需要金属阳离子，Cu^2 、Co^2 强烈抑制酶的活性。摇瓶实验表明，纯化的地衣芽孢杆菌α－乙酰乳酸脱羧酶能明显降低双乙酰的形成并缩短其还原时间。     

啤酒生产中的双乙酰控制

<正> 双乙酰是在啤酒发酵中酵母产生的代谢产物α-乙酰乳酸非酶氧化脱羧生成的,α-乙酰乳酸是酵母细胞生物合成氨基酸缬氨酸和异亮氨酸的副产物,也是影响啤酒风味的重要物质。因此双乙酰是啤酒发酵是否成熟的一个标志,啤酒厂主要也是根据双乙酰在啤酒中的含量是否低于国标0.15ppm 来决定啤酒是否可以     

产α-ALDC的枯草芽孢杆菌原生质体融合条件

通过双亲灭活原生质体融合技术对2株产α-乙酰乳酸脱羧酶的枯草芽孢杆菌3226-5和V-20进行原生质体融合.初步探讨了2菌株较适宜的融()条件.对获得的几百株融合子进行酶活比较,从中得到20株酶活比双亲高的菌株.     

高产光学纯(R)-乙偶姻工程菌株的构建与发酵工艺优化

本研究拟在大肠杆菌中构建光学纯(R)-乙偶姻的合成途径和利用辅酶工程调控NADH/NAD+氧化还原平衡,并对工程菌发酵(R)-乙偶姻进行优化。将来源于Enterobacter cloacae的α-乙酰乳酸合成酶基因budB、α-乙酰乳酸脱羧酶基因budA和来源于Lactobacillus brevis的NADH氧化酶基因noxE进行密码子优化后组成基因簇,构建表达质粒并导入大肠杆菌,进一步优化工程菌的培养基成分和发酵条件,提高(R)-乙偶姻的合成能力。结果表明:获得专一性合成高光学纯(R)-乙偶姻的大肠杆菌工程菌株GXASR,对其发酵条件进行系统优化后,摇瓶发酵的(R)-乙偶姻产量为36.82g/L,光学纯度达99.1%,发酵罐补料发酵的(R)-乙偶姻产量达到67.65g/L。在大肠杆菌细胞中过表达外源基因簇budB-budA-noxE能够高效合成光学纯(R)-乙偶姻,经发酵优化后,工程菌的(R)-乙偶姻产量、生产强度和得率均显著提高,为代谢工程改造大肠杆菌生产高光学纯(R)-乙偶姻提供了理论基础。     

α-乙酰乳酸脱羧酶产生菌的分离与筛选

从土壤中分离到４９８株细菌，经过不同培养基的反复筛选，得到两株产α－乙酰乳酸脱羧酶酶活性较高者，而且产酶水平比较稳定     

产气肠杆菌α-乙酰乳酸脱羧酶基因的克隆和表达

根据已知的α-乙酰乳酸脱羧酶（α-acetolactatedecarboxylase，ALDC，EC．4．1．1．5）基因序列，利用PCR方法从产气大肠杆菌（Enterobacter aerogenes）中克隆到0．8kb的DNA片段，经DNA序列分析表明该DNA片段为ALDC基因．将该片段插入到原核表达载体pBV220中，获得表达质粒pBVEDAD，转化大肠杆菌DH5α（Escherichia coli），经热诱导后，通过SDS-PAGE分析和酶活测定，结果表明ALDC获得了高效表达.重组细胞表达的ALDC酶活是出发菌产气肠杆菌（Eaerogenes）的1100倍．DH5α（pBVEDAD）在无选择压力下37℃连续培养60代，在42℃下热诱导5h未见质粒丢失．     

简讯

广西科学院获6项2006年度广西科技进步奖2006年度广西科技进步奖9月份评出结果,广西科学院共有6个项目获奖,其中获一等奖1项,获二等奖2项,获三等奖3项。广西科学院黄日波院长作为第一完成人的“高密度培养高活力α-乙酰乳酸脱羧酶”项目,获广西科技进步一等奖;广西科学院应用物理研究所于清武所长主持的“中重型汽车无石棉制动器衬片研究”项目,获广西科技进步二等奖;广西计算中心海蓝数据公司卿旭副总经理主持的“大规模图文资料数字化系统”项目,获广西科技进步二等奖;广西植物研究所李锋所长作为第二完成人的“罗汉果规范化种植研究”项…     

α-乙酰乳酸脱羧酶的提取条件与应用研究

从ＢＤ－５菌株中提取α－乙酰乳酸脱羧酶，为提高酶的得率，探讨了破壁方法、除杂蛋白、硫酸铵沉淀提取粗酶等的条件，以及提取过程中酶的损失情况和菌体存放时间对酶活力的影响等。结果表明：该菌株的菌体用超声波破壁、５０％饱和度硫酸铵除杂蛋白，８０％饱和度硫酸铵提取粗酶效果较好，菌体存放时间过长，酶活力明显降低。将用该菌株提取的酶应用于啤酒发酵中，证明有明显的降低双乙酰的效果。     

去乙酰真菌环氧乙酯发酵放大及其溶氧参数的控制

报道了拟茎点霉P2-139 (Phomopsis sp.P2-139 )在前期培养基质优化的基础上,进行的10,50和200 L发酵罐中培养条件和中试放大的研究结果.在10 L发酵罐中,P2-139菌株的最佳发酵培养基为:马铃薯240 g/L,葡萄糖75 g/L,陈海水20%(体积分数),pH自然.机械剪切力对去乙酰真菌环氧乙酯的产生和产量影响不大.临界氧浓度和KLa测定结果表明,P2-139菌株生长的溶氧浓度(DO)值应维持在20%～30%以上才能保证菌株的正常生长和代谢;200 L罐中试放大DO值的控制为:发酵初期(0～96 h)20%以上,发酵中期(96～216 h)28%以上,发酵后期30%～60%;发酵基质为:马铃薯180 g/L,葡萄糖60 g/L,陈海水20%(体积分数),pH自然;发酵后期流加葡萄糖使残糖质量浓度控制在10 g/L左右.在此条件下,去乙酰真菌环氧乙酯的产量可达120 mg/L以上.