豌豆中GPAT基因编码cDNA的克隆及分析

参照国外报道的豌豆ＧＰＡＴ基因ｃＤＮＡ序列，设计并合成一对寡核苷酸引物，通过ＲＴＰＣＲ技术，从云南地方栽种的豌豆品种中分离到了ＧＰＡＴ基因的编码ｃＤＮＡ片段，并将其纯化后直接克隆到ｐＧＥＭＴ载体系统中，经ＮｃｏⅠ和ＮｏｔⅠ双酶切鉴定，所得的重组质粒中含有１３８０ｂｐ左右的片段．采用ＰｓｔⅠ，ＨｉｎｄⅢ两种限制性内切酶进行酶切，酶切图谱分析表明所克隆的豌豆ＧＰＡＴ基因编码ｃＤＮＡ的酶切图谱与国外所报道的该基因ｃＤＮＡ的酶切图谱一致，暗示了该基因在进行上具有一定的保守性．     

黑曲霉（Aspergillus niger）三磷酸甘油醛脱氢酶基因（GPD …

ｐＡＮＧＰＤ是用构巢曲霉ＧＰＤ基因片段为探针,从黑曲霉基因组文库中筛选到的一个三磷酸甘油醛脱氢酶基因阳性克隆。作者对该阳性克隆进行了亚克隆和序列测定,结果表明,基因片面总长２４４１个核苷酸,其中５’－端非编码区９８１ｎ．ｔ,编码区（从起始密码子ＡＴＧ到终止密友子ＴＡＧ０长１４４６ｎ．ｔ．３‘－端非编码区长２４ｎ．ｔ,基因启动子区含有盒和ＣＴ－盒序列,但无明显的ＣＡＡＴ盒和ＴＡＴＡ盒序列。     

黑曲霉(Aspergillus niger)三磷酸甘油醛脱氢酶基因(GPD)的序列测定与同源性分析

ｐＡＮＧＰＤ是用构巢曲霉ＧＰＤ基因片段为探针,从黑曲霉基因组文库中筛选到的一个三磷酸甘油醛脱氢酶基因（ＧＰＤ）阳性克隆．作者对该阳性克隆进行了亚克隆和序列测定,结果表明,基因片段总长２４４１个核苷酸（ｎ．ｔ）,其中５’－端非编码区长９８１ｎ．ｔ,编码区（从起始密码子ＡＴＧ到终止密码子ＴＡＧ）长１４４６ｎ．ｔ,３’－端非编码区长２４ｎ．ｔ,基因启动子区含有ｇｐｄ－盒和ＣＴ－盒序列,但无明显的ＣＡＡＴ盒和ＴＡＴＡ盒序列．ＧＰＤ基因由７个外显子和７个内含子构成,外显子全长１００８ｎ．ｔ,编码的蛋白质长３３６个氨基酸残基．通过序列比较分析,发现该基因与构巢曲霉的ＧＰＤ基因有许多相似之处;它们的基因启动子序列都含有ｇｐｄ－盒和ＣＴ－盒,其同源性分别为９６％和６５％;推测的两个ＧＰＤ蛋白的氨基酸同源性高达９０％;两个基因所含内含子数目及位置相同．     

GHRP—scu—PA—32K突变体的构建,表达及纯化产物的部分性 …

在ｓｃｕ－ＰＡ３２Ｋ的ｃＤＮＡ分子基础上经定点突变,在Ｎ端紧接Ｌｅｕ＾１以前引入编码ＧＨＲＰ四肽的寡核苷酸序列（ＧＧＴＣＡＴＡＧＧＣＣＴ）,构建了ＧＨＲＰ－ｓｃｕ－ＰＡ－３２Ｋ的突变体ｃＤＮＡ。将它克隆到表达载体ｐＣＭ－β－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ＾－细胞。筛选到的稳定表达株在无 清培养基的表达量为５８０ＩＲ／（１０＾６细胞．２４ｈ）。经锌离子螯合亲和柱纯化的产物,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示为一蛋     

野蚕DHPBAN基因启动子的克隆及序列分析

为研究昆虫滞育激素性信息素合成激活肽基因在进化过程中的变化以及基因表达调控的异同,用ＰＣＲ方法克隆了野蚕的ＤＨＰＢＡＮ基因的启动子并测序,这是第二个被克隆的昆虫ＤＨＰＢＡＮ基因启动子．与家蚕相比,在核苷酸水平上同源性达９４％．野蚕ＤＨＰＢＡＮ基因启动子的ＴＡＴＡ框的保守序列为ＴＡＴＡＴＡＡＡ,位于－４７—－４０处;ＣＡＡＴ框是ＧＧＣＣＣＡＴＣＴ,位于－８３—－７５处;野蚕与家蚕一样具有ＴＡＡＴ保守序列,这段序列是一类调控蛋白的结合核心位点,家蚕的位于－１８５—－１７６,野蚕的位于－１７６—－１６７．在－６４—－５６部位,核苷酸序列表现出较大的不同．     

半套式PCR技术在植物基因克隆中的应用

常规ＰＣＲ方法在分离克隆已知序列的基因中发挥着重要的作用，但要求目的基因片段与引物间的同源性几乎是１００％，一旦引物序列与目的基因间存在有差异，便往往会导致扩增的特异性不强，扩增效率不高，给克隆带来很大的困难．在常规ＰＣＲ基础上，若所分离的基因在不同植物间存在保守序列，依据这一序列再合成一对引物，进行半套式ＰＣＲ则能大大提高扩增的特异性及扩增效率．对于较长的基因片段而言还能同时完成亚克隆．本文依据南瓜ＧＰＡＴ（甘油－３－磷酸酰基转移酶）基因ｃＤＮＡ序列及比较拟南芥菜、豌豆间在该基因内的保守区段序列合成相应引物来分离克隆黑子南瓜及西瓜ＧＰＡＴ基因的ｃＤＮＡ片段为例来说明半套式ＰＣＲ技术在植物基因克隆中的应用     

加工番茄多聚半乳糖醛酸酶(PG)基因的cDNA克隆

以加工番茄８７－５为材料,运用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）技术成功地将ＰＧ基因的ｃＤＮＡ序列克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体上,并利用酶切及ＰＣＲ进行了初步鉴定。     

研究聚ADP核糖基化作用与细胞恶变关系的双基因真核表达重…

本文将聚ＡＤＰ核糖聚合酶基因１．４ｋｂ部分序列反向插入真核表达载体ｐＭＡＭｎｅｏ和ｐＳＭＧ中，同时１２位密码子突变的活化ｒａｓ癌基因也一同克隆到上述载体中，从而获得具有不同真核基因筛选标记的双基因真核表达重组ｐＭＡＭｎｅｏ－Ｃｌ．４－Ｔ２４，ｐＭＡＭｎｅｏ－Ｃｌ．４－ａｒＴ２４，及ｐＳＭＧ－Ｃｌ．４－Ｔ２４，上述质粒的构建成功为研究聚ＡＤＰ核糖基化作用与细胞恶变的关系提供了一种新的分子模型。     

苏云金芽孢杆菌新分离株S11—11δ—内毒素基因在Btk.BE …

用对鳞翅目夜蛾科幼虫有很强毒杀作用的土壤新分离株Ｓ１１－１１为δ－内毒素基因的供体菌，以穿梭质粒ＰＨＴ３１０１为载体，用Ｐｓｔ Ｉ和ＥｏｏｒＩ分别对供体和载体ＤＮＡ作双酶切，并将酶切片段用Ｔ４ ＤＮＡ连接酶连接，用电激法将重组ＤＮＡ转入苏云金芽孢杆菌无晶体突变株Ｂｔｋ．ＢＥ２０中，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳及扫描电镜观察证明，δ－内毒素基因在Ｂｔｋ．ＢＥ２０中得到表达，并具有较高的表达量。生物测定     

解偶联蛋白-1基因3826A→G变异与2-型糖尿病的相关研究

为研究解偶联蛋白－１（ＵＣＰ－１）基因－３８２６Ａ→Ｇ变异与２－型糖尿病发生和发展的关系,应用降合酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法检测了８３例２－型糖尿病患者及７４例正常对照者的ＵＣＰ－１基因－３８２６Ａ→Ｇ变异,并测定体质量指数（ＢＭＩ）、空腹血糖血脂及胰岛素。结果：ＵＣＰ－１基因－３８２６变异型频率与糖尿病无相关性;糖尿病组突变等位基因（Ｇ）与ＢＭＩ呈正相关（Ｐ〈０．０５     

草酸诱导甜瓜对南瓜花叶病毒的系统抗性

用草酸涂抹甜瓜叶片后,显提高了甜瓜对南瓜花叶病毒（ＳｑＭＶ）的系统抗性。最后处理的草酸浓度为３０ｍｍｏｌ·Ｌ＾－１。挑战接种试验证明,草酸处理植株的感病症状显轻于对照植株,病毒的相对质量尝试仅为对照值株的４％,草酸处理植株的过氧化物酶活性为对照植株的６倍,且诱导出３种新的过氧化物酶同工酶;木质素相对质量浓度亦提高了８２．９％。结果表明,草酸对提高甜瓜过氧化酶活性和木质素相对质量浓度与诱导甜瓜对     

浅谈软式排球运动的技术特点

软式排球运动是一项新兴的体育项目，它的球体柔软，重量轻，气压小，活动形式多样，易操作，适合不同阶层的人参与，与硬式排球的共性多，在技术的运用上具有和硬式排球不同的技术特点。     

普洱茶泡腾片制备工艺研究

 采用一相混合湿法制粒制备普洱茶泡腾片;通过对比实验选取辅料,并以正交实验方法优化实验配方;根据药典对产品进行了相关的质量分析.研究制得的产品可基本保持普洱茶的汤色和口味,制粒、压片效果好,各项指标均符合相关规定.     

楔横轧空心件稳定轧制条件分析

引入塑性铰要领,用平面应变理论和能量法研究了楔横轧空心件的平均单位正压力和压扁条件,并推导出楔横轧空心件的稳定轧制条件。     

西葫芦种瓜发育及种子内主要营养物质变化规律的研究

西葫芦果实的发育高峰为授粉后7~14 d,而种子的发育高峰为2个,一个为授粉后的7~14 d,是种子大小的雏形建成期;另一个为21~28 d,为胚发育的充实期,这期间决定种子质量的优劣.西葫芦种子的发育过程中,可溶性糖和淀粉与脂肪和蛋白质存在明显的转化关系,这个转化的剧烈量变期就在种子发育的第3~4周以后,以脂肪、蛋白质的积累为主.     

中国黑子南瓜种质资源遗传多态性分析

用从100个10mers随机引物中筛选出的13个具有特异多态性引物对黑子南瓜种质资源遗传多态性进行了RAPD(Randomam plified polymorphic DNA)分析．结果表明,RAPD对中国南瓜种、印度南瓜种、美洲南瓜种及黑子南瓜种的分类与传统分类学的结果相符．我国现有栽培黑子南瓜在DNA水平上的同源性极高,种质资源的遗传变异度较小,多样性水平较低,不如其它三个南瓜种多态性丰富．     

河北省昌黎县夏、秋蔬菜Vc及硝酸盐含量分析与评价

对河北省昌黎县7个类别17个品种的夏秋蔬菜Vc营养及硝酸盐含量进行检测,结果表明,类别间Vc平均含量高低顺序为茄果类、白菜类、茎菜类、甘蓝类、葱蒜类、根菜类、瓜类;7个类别17个品种的蔬菜Vc含量,按标准要求,只有芹菜叶、蒜、油菜、西胡芦、茄子、洋葱达标,达标率为31.58%。类别间硝酸盐平均含量高低顺序为白菜类、根菜...     

半干旱区集雨型日光温室的C及N,P,K动态研究

探讨了半干旱区集雨型日光温室的C及N，P，K动态，结果表明：整个生长季节试验温室所固定的净生物量(干重)总量为143．86kg，折合能量1816．89MJ，其中用于经济产出(果实)的能量占总固定能量的40.77％；试验温室的净初级生产力为1．05％，与一般农田相当，温室中CO2浓度较低是造成这一结果的主要原因之一；西葫芦对土壤养分的消耗量明显高于黄瓜，尤其是对有效钾。     

鲤鱼卵母细胞早期发育的细胞学观察

处在配丝期的鲤鱼卵母细胞,划分细线、偶线、凝线、粗线和双线五个发育时相。本文重点阐明和分析了各时相卵母细胞的染色体行为,形态以及灯刷染色体的形成和弥散过程。