三尖杉酯碱诱导HeLa细胞凋亡的研究

报道了三尖杉酯碱 (harringtonine ,HT)可以诱导HeLa细胞凋亡 .采用Heochst33342荧光染色、琼脂糖凝胶电泳及流式细胞光度术 (FCM)的方法 ,研究了HT对HeLa细胞凋亡的影响 .利用细胞同步化技术和斑点杂交法研究发现 ,HT影响了HeLa细胞c myc和bcl 2基因的表达并且与细胞周期密切相关 .初步探讨其凋亡诱导的机制 ,认为HT通过在G1和G2 期下调细胞凋亡抑制基因bcl 2的诱导凋亡 ,以及下调c myc癌基因阻滞细胞增殖 ,并延迟凋亡发生 .这些结果对于了解HT的药物作用机制和提高临床化疗疗效具有重要意义 .     

电磁脉冲各参数对HeLa细胞可逆穿孔影响的研究

通过对HeLa细胞进行电磁脉冲处理,可以看到细胞膜电穿孔.穿孔的几率及深度与脉冲的各参数有关.细胞膜表面的微绒毛受到一定程度的损伤,还可见到火山形的喷口和喷出物.经实验研究,得到了在离体条件下HeLa细胞电穿孔的最佳电脉冲参数.     

3-羟基丁酸对HeLa癌细胞生长与凋亡的影响

研究3-羟基丁酸对HeLa癌细胞生长与凋亡的影响.采用四唑盐(MTT)比色法测定细胞活力;AO/EB荧光染色观察细胞凋亡与坏死的形态学变化;单细胞凝胶电泳检测细胞DNA的损伤;流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测凋亡蛋白的表达.结果表明:3-羟基丁酸能够抑制HeLa癌细胞增殖;使HeLa癌细胞DNA受到损伤;通过caspase依赖性细胞凋亡途径诱导HeLa癌细胞凋亡;在HeLa癌细胞与人脐带正常细胞共培养条件下,3-羟基丁酸诱导HeLa癌细胞先于人脐带正常细胞凋亡.实验为肿瘤的生酮饮食疗法和酮体疗法提供了理论依据.     

电磁脉冲各参数对LeLa细胞可逆穿孔影响的研究

通过对HeLa细胞进行电磁脉冲处理,可以看到细胞膜电穿孔。穿孔的几率及深度与脉冲的各参数有关。细胞膜表面的微绒毛受到一定程度的损伤,还可见到火山形的喷口和喷出物。经实验研究,得到了在离体条件下HeLa细胞电穿孔的最佳电脉冲参数。     

紫杉醇诱导HeLa细胞凋亡的研究

目的：探讨紫杉醇抑制HeLa细胞生长的机制。方法：经荧光染色、电镜观察细胞形态,DNALadder及流式细胞仪检测凋亡细胞。结果：紫杉醇作用24h经荧光染色细胞呈不均一亮蓝色,作用48h细胞被染成红色,电镜观察可见细胞变小,染色质浓缩并产生凋亡小体,DNALadder未见明显的梯形条带,流式细胞仪检测紫杉醇作用24h细胞凋亡。结论：紫杉醇可诱导细胞凋亡,也可直接杀伤HeLa细胞,而且以后者为主。     

SAHA对HeLa细胞增殖、凋亡、衰老以及迁移的影响

为研究HDAC抑制剂SAHA对宫颈癌HeLa细胞肿瘤生物学特性的影响,使用SAHA处理HeLa细胞后,在显微镜下观察细胞形态,台盼蓝染色法检测细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡,β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老,划痕实验和小室迁移实验检测细胞迁移能力,实时荧光定量PCR(Real-timePCR)和免疫印迹(Westernblot)检测基因表达.结果显示:SAHA处理HeLa细胞后,细胞增殖能力下降,发生衰老,同时在分子水平上促进p21基因表达;抑制细胞迁移,在分子水平上迁移相关基因MYL9表达水平下降;SAHA处理的细胞没有表现出明显凋亡现象.本研究结果提示SAHA可能通过促进p21和MYL9基因表达发挥抑制细胞增殖、促进细胞衰老和降低细胞迁移能力的作用.     

快速诱导细胞凋亡方法探讨

[目的]利用流式细胞仪检测细胞凋亡在基础研究、疾病诊断及预后预测及评价中具有重要的应用价值.补偿调节所需的单阳染色管的制备,是流式细胞术检测凋亡过程的一个重要步骤.探讨了快速诱导不同细胞系和原代细胞凋亡的方法,优化用于检测细胞凋亡的流式单阳染色管快速制备.[方法](1)分别用100μmol/L H_2O_2、体积分数4%多聚甲醛、75%乙醇和反复冻融的方法处理293T细胞15 min、30 min、1 h, Annexin V-PE/7-AAD双标记流式检测293T细胞凋亡率.(2)体积分数1%乙醇、5%乙醇、10%乙醇和20%乙醇处理293T细胞、RAW264.7细胞、HeLa细胞、T细胞和B细胞1 min,流式细胞仪检测细胞凋亡情况.[结果](1)293T细胞经100μmol/L H_2O_2、体积分数4%多聚甲醛、75%乙醇和反复冻融法处理后,几乎所有细胞均处于凋亡状态.(2)293T细胞、RAW264.7细胞、T细胞和B细胞用1%乙醇处理1 min, HeLa细胞用20%乙醇处理1 min,可出现较明显的凋亡现象.[结论]细胞凋亡实验时,根据细胞的生长特性,可选择体积分数1%～20%的乙醇诱导1 min,作为制备单阳染色管的最佳方案.     

云芝子实体多糖对人宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的影响研究

研究云芝多糖(Coriolus versicolor polysaccharides,CVP)对宫颈癌HeLa细胞系生长和凋亡的影响及可能的通路。采用MTT方法测定了CVP对HeLa细胞体外生长抑制的作用,结果表明当CVP浓度在0~0.625μg/mL的范围内,随着CVP浓度的增加,HeLa细胞的存活率逐渐减少.流式细胞仪检测凋亡细胞的结果显示,使用0.5μg/mL CVP处理HeLa细胞,作用24h和48h后细胞凋亡率分别为26.36%和63.81%;实时荧光定量PCR检测结果显示CVP处理细胞后Bcl-2基因的表达量显著下降(P0.05).该研究证明CVP能抑制HeLa细胞的生长、诱导细胞的凋亡,其作用机制与影响Bcl-2基因的表达下调有关.     

虾青素抑制H2O2诱导的HeLa细胞凋亡

为了阐明虾青素的抗氧化作用与细胞凋亡的关系,探究虾青素预处理对H_2O_2诱导HeLa细胞氧化应激的影响.通过CCK-8、活性氧探针染色、流式细胞术、蛋白质免疫印迹、实时荧光定量pcr等,分别检测细胞存活率和活性氧的积累、细胞凋亡、蛋白含量、基因相对表达量改变.结果表明虾青素预处理组细胞活力较对照组提高了29.54%以上且其可以将H_2O_2诱导的活性氧降低至对照水平,同时提高Nrf2蛋白表达量3倍之多,过氧化氢酶基因相对表达量1.5倍.说明虾青素可以有效缓解H_2O_2诱导的HeLa细胞氧化应激,从而抑制细胞凋亡.     

葡萄糖饥饿对HeLa细胞形态与结构的影响

为了探究葡萄糖饥饿对HeLa细胞形态与结构的影响,采用噻唑蓝法检测了细胞活力;用倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察了细胞形态与结构的变化;采用激光共聚焦免疫荧光技术观察了细胞微丝与微管的分布.结果表明:葡萄糖饥饿能够抑制HeLa细胞增殖,破坏细胞骨架,改变细胞形态;使细胞皱缩、染色质凝集,出现凋亡小体,微丝微管解聚,表现出典型的凋亡特征,且细胞凋亡程度呈葡萄糖浓度依赖性和处理时间依赖性.总之,葡萄糖饥饿能抑制HeLa细胞活性,改变细胞形态,诱导细胞凋亡.     

凋亡素融合蛋白在HeLa细胞中的转导及体外活性分析

研究胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)的肝素结合域(HBD)在HeLa细胞中的转导活性,并证实HBD具有运载药物蛋白(凋亡素)进入细胞并诱导肿瘤细胞凋亡的能力。通过克隆表达的HBD-EGFP融合蛋白经Ni2+-NTA纯化后,观察其转导活性;并利用HBD-凋亡素融合蛋白表达纯化后,用噻唑蓝(MTT法)检测肿瘤细胞的凋亡。结果表明:用荧光显微镜可观察到HeLa细胞内有绿色荧光;MTT法检测表明凋亡素融合蛋白能诱导HeLa细胞的凋亡;HBD具有转导活性,能携带药物蛋白(凋亡素)进入细胞并能诱导HeLa细胞的凋亡。     

佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响

探讨了佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态与结构的变化,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察微管的分布.结果表明:佛手叶挥发油能够抑制HeLa癌细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;不同浓度的佛手叶挥发油处理HeLa癌细胞24 h后,低剂量(200μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞皱缩,染色质凝集,出现凋亡小体,微管解聚,表现为典型的凋亡特征;中、高剂量(400和800μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞膜裂解,内容物外泄,细胞碎片增多,表明细胞已坏死.     

固定化IFN-γ和TNF-α对HeLa细胞凋亡的长效诱导活性

采用光化学固定化方法将干扰素（IFN-）、肿瘤坏死因子（TNF-）共固定化在12孔聚苯乙烯培养板(PSt)上．无血清培养子宫颈癌（HeLa）细胞，通过动态细胞计数跟踪、倒置显微镜观察、磷脂酰丝氨酸外翻分析方法，研究细胞因子药物对HeLa细胞凋亡诱导作用的长效活性．结果表明，20ng/well的共固定化IFN-和TNF-能显著诱导HeLa细胞凋亡，在18天内，细胞发生了典型的凋亡，最高抑制活性可达94.12%，未见细胞有重新生长的现象．磷脂酰丝氨酸法分析也显示第3天和第6天的凋亡率为76.6%和88.7%．     

云芝多糖影响人宫颈癌HeLa细胞的增殖和凋亡的研究

研究云芝多糖(CVP)对宫颈癌HeLa细胞系的增殖、凋亡及产生途径。采用MTT法测定了CVP对HeLa细胞增殖的体外抑制作用,流式细胞仪检测凋亡细胞的比例,qRT-PCR检测P53、Bcl-2和Fas基因在细胞处理前后表达量的变化。结果显示：CVP以时间和剂量依赖的方式抑制HeLa细胞的生长。作用时间在24 h,48 h和72 h时对细胞抑制的抑制率分别为92%、95%和98%;当CVP浓度达到1.25 mg/L时,作用24 h、48 h和72 h时的IC50值分别为0.2507±0.01 mg/L、0.2720±0.04 mg/L和0.2736±0.03 mg/L;当CVP浓度为0.5 mg/L时,作用24 h和48 h后细胞凋亡率分别为26.36% 和63.81%;CVP处理HeLa细胞24 h后,Bcl-2基因的表达被显著下调。研究表明：CVP促进HeLa细胞凋亡,其作用机制与Bcl-2基因的表达下调有关,推测是通过Bcl-2介导的途径促进细胞凋亡。图4表1参30     

近场光学显微术对凋亡HeLa细胞成像的探索

用扫描近场光学显微镜对凋亡的HeLa细胞进行了近场光学成像,得到优于光学衍射极限的光学分辨率.由于近场光学显微镜同时测量细胞表面形貌信息和透射光强信息,可以将细胞表面及其内部的物质结构特性和光学特性与空间位置相结合,获得凋亡细胞的结构信息与光学细节信息的对应关系.运用近场光谱方法在不同波长进行透射光谱成像时,不同波长的光在细胞内的传播与吸收所造成的光强分布存在显著差别,这种特性可以用于对细胞内不同组分的超高空间分辨率成像.结合近场光学成像和光谱成像结果,表明凋亡HeLa细胞内部为非均匀结构,并且其物质分布也极不均匀.研究表明,运用近场光学显微镜和近场光谱成像技术,不但提供优于衍射极限的高分辨本领,还可以提供生物细胞精细结构的更深层次的光学信息.     

利用电穿孔提高抗肿瘤药物细胞毒性的初步研究

作者运用电磁脉冲使细胞电穿孔并结合抗肿瘤药物观察细胞的毒性 ,比较了电穿孔组与对照组细胞的抗肿瘤药物胞质毒性的差异 ,发现电穿孔组比对照组的胞质毒性显著提高 .结果说明 ,利用电穿孔可提高抗肿瘤药物的细胞毒性 ,为治疗肿瘤提供了新的途径 .     

碳源饥饿对癌细胞和正常细胞增殖的影响

研究了共培养条件下碳源饥饿对癌细胞和正常细胞形态、生长和凋亡的影响.采用细胞体外共培养的方法,实验分4组:对照组(25 mmol/L葡萄糖)及5,1和0 mmol/L葡萄糖组,分别处理共培养条件下的HeLa癌细胞和人脐带正常细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态与生长,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)双重荧光染色检测凋亡细胞的形态及数量.结果表明:对照组HeLa癌细胞和人脐带正常细胞都分布均匀,贴壁性好,形态饱满,多呈规则的梭形或多角形,折光性好,AO/EB双染绿色荧光分布均匀;实验组糖浓度越低,细胞存活时间越短,细胞收缩变圆并逐渐凋亡,AO/EB双染细胞由绿色荧光逐渐变为橙黄色荧光;相同糖浓度条件下人脐带正常细胞比HeLa癌细胞存活时间更长.说明碳源饥饿使癌细胞先于正常细胞死亡.     

苏尼替尼对HeLa细胞中的CDK4的影响

以不同浓度的Sutent作用于HeLa细胞,采用MTT法检测Sutent对HeLa细胞增殖的影响.流式细胞术检测Sutent对HeLa细胞周期的影响;Western免疫印迹检测不同浓度的Sutent对HeLa细胞中CDK4蛋白表达的变化;探讨苏尼替尼(Sutent)对HeLa细胞中CDK4的影响.结果表明Sutent能够抑制HeLa细胞的增殖,引起HeLa细胞发生G2期周期阻滞,并且呈浓度依赖性降低HeLa细胞中CDK4蛋白表达量.显示了Sutent作为多靶点药物在药物研发中具有潜在的重要的研究价值.     

沙蚕活性物质的分离提取及对HeLa细胞的毒性分析

将采集于中国福建海岸的海洋环节动物沙蚕(Nereis virens)冷冻干燥后用不同极性的有机溶剂进行提取,提取物A2经硅胶柱梯度洗脱分离,发现石油醚/乙酸乙酯(体积分数1∶1)的洗脱组分B3有抗肿瘤活性.采用葡聚糖柱Sephadex LH-20对B3进一步等度洗脱分离,发现洗脱的组分C2有较高抗肿瘤活性.采用噻唑蓝(MTT)法测定组分C2对HeLa细胞的毒性,结果显示:该组分具显著的体外抗HeLa细胞活性,其IC50(48 h)达47.30μg·mL-1;AO/EB染色法观察细胞凋亡,结果显示药物处理48 h后细胞明显出现凋亡现象;流式细胞术探讨其抗癌机制,结果提示组分C2可能是通过诱导HeLa细胞发生G0/G1期和(或)S期阻滞而诱导细胞凋亡的.     

葡萄籽提取物诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡的实验研究

该文研究葡萄籽提取物(GSE)对前列腺癌PC-3细胞的生长抑制及凋亡作用,分析GSE诱导PC-3细胞凋亡的途径.采用四唑盐(MTT)比色法测定GSE对PC-3细胞的毒性作用;利用倒置显微镜、透射电镜观察GSE对PC-3细胞引起的形态学改变;碘化丙啶(PI)、吖啶橙(AO)/溴化乙锭(EB)双染法观察GSE诱导PC-3细胞凋亡的作用;Western blot探索细胞凋亡途径.结果表明,MTT法测定GSE能显著抑制PC-3细胞生长.倒置显微镜、透射电镜下可见细胞形态改变.PI染色显示,GSE将PC-3细胞周期阻滞在G0/G1期;GSE诱导PC-3细胞凋亡,AO/EB染色,荧光显微镜下可明显看到凋亡细胞、死亡细胞.Western blot显示GSE通过caspase途径诱导细胞凋亡.从细胞和亚细胞水平研究证实了GSE对人雄激素非依赖性PCaPC-3细胞具有毒性作用,GSE可通过线粒体途径诱导PC-3细胞凋亡和坏死,抑制细胞生长.