新城疫病毒TL1株P、NP、L蛋白基因表达载体的构建及鉴定

将新城疫病毒TL1株的P、NP、L基因通过RT-PCR方法从尿囊液中扩增后分别克隆进pGEM-Teasy载体,再分别亚克隆到真核表达载体pCI-neo上,命名为pCI-P、pCI-NP、pCI-L,通过酶切、PCR和测序验证克隆正确.纯化后的重组质粒单独转染BHK-21细胞,经间接免疫荧光试验检测到了P、NP、L蛋白的表达.新城疫病毒TL1株的P、NP、L基因的克隆成功,为即将进行的新城疫病毒的反向遗传操作奠定了基础.     

我国新城疫病毒疫苗通过重组影响病毒进化

许多商业新城疫活疫苗被广泛用来阻止我国新城疫病毒的感染.然而,疫苗在我国新城疫病毒群进化过程中所起的作用鲜为人知.为了确定在我国广泛应用的新城疫疫苗是否对该病毒进化进程产生影响,在本研究中,我们对在我国流行的新城疫病毒进行了系统发生和重组分析,获得了一系列NDV株间同源重组的证据.一些重组株的部分遗传物质被发现可能来自疫苗株,这些结果证实疫苗可能通过同源重组影响我国新城疫病毒的进程.由于疫苗与流行株之间的重组可能导致出现疫苗接种失败的后果,因此,在临床上应当尽可能避免疫苗与野生株之间的重组.故在NDV防治过程中,应该采用合适的免疫程序避免这种重组的发生.     

一株鸡副粘病毒的分子特性研究

应用RT-PCR技术对新城疫病毒(NDV) Y98株的F基因重要功能区片段扩增后进行序列测定,并与多株已报导的NDV参考株相应片段进行序列比较,经遗传基因进化树分析后,首次报道了基因Ⅶ型NDV分离株在中国大陆的存在.     

重组杆状病毒AcMNPV—BmK IT—vcath的构建及毒力分析

利用Bac-to-Bac载体系统,构建了含有东亚钳蝎Buthusmartensii Karsch昆虫特异性神经毒素基因(BmK IT)和杆状病毒组织蛋白酶基因(vcath)的重组杆状病毒AcMNPV-BmK IT-vcath,使这两个基因分别位于plO基因启动子(Pp10)和多角体基因启动子(Pph)的控制下高效表达.抗棉铃虫毒力分析表明,该重组病毒的LC50值为28 829.5 pfu/mL,比野生型病毒的LC50值(33114.5 pfu/mL)降低13%;重组病毒的LT50值为3.5d,而野生型的LT50值为4.1d,提高了14.6%,表明该重组病毒的活性比野生型病毒有明显的提高.     

使用病毒载体的罕见病基因疗法临床进展

 很大一部分的罕见病由遗传因素决定,难以用普通的小分子或大分子药物治愈,而基因治疗有望从根本上修正人体功能的缺失或异常,给罕见病患者带来改善生活质量的希望。目前许多基因疗法的临床试验正在开展,病毒载体是常用的基因递送方法,本文讨论了用于临床基因递送的多种病毒载体,包括腺相关病毒、逆转录病毒和慢病毒,重点列举了这些病毒在罕见病临床试验中的研究、应用和进展,评价了这些病毒的优缺点,并简述了基因疗法的研究方向及应用前景。     

AcMNPV bro基因的表达和作用研究

bro基因(baculovirus repeated orf)是杆状病毒编码的一个独特的基因家族,一些病毒的基因组中编码有多个该基因家族的成员.研究分析了苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)基因组仅有的一个bro基因,结果表明:AcMNPVbro基因(ac-bro)在感染后6h就开始转录,并在8h时检测到BRO表达;ac-bro基因敲除的重组病毒感染后子代病毒的效价略低于野生型病毒,且其DNA复制明显推迟.利用大肠杆菌中重组表达的Ac-BRO蛋白进行的体外实验提示其具有结合DNA的能力.这些结果提示ac-bro基因在病毒的复制中有一定的作用.     

CDV,CPV,CAV三联DNA疫苗的实验免疫研究

 犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)是引起犬传染病的主要病原体,严重危害犬的健康,基因疫苗具有安全和克服幼犬母源抗体对主动免疫干扰的优点.根据CDV的H基因、CPV的VP1基因、犬2型腺病毒(CAV-2)F基因的核苷酸序列,用PCR或RT-PCR方法扩增克隆目的基因,分别构建了pIRCDV-H,pIRESVP1和pcCAV-F 3个真核表达质粒并进行了序列验证,用3种免疫质粒经纯化后混合对15只犬进行免疫,所有接种混合基因疫苗的犬,2次免疫后即可产生较高的抗体水平,攻毒后大部分犬能抵抗3种强毒的攻击,对照犬发病严重,证明所构建的核酸疫苗在一定程度上可抵抗强毒的攻击.     

植物RNA病毒寄主因子基因的研究进展

文章综述了植物RNA病毒寄主因子基因的研究进展.     

NDV核心抗原重组杆状病毒转移载体的构建

F和HN蛋白是新城疫病毒(NDV)中两种具有抗原性的表面糖蛋白．对NDV中国强毒株F48E8的F和HN基因进行了全长核苷酸序列分析．F基因的长度为1662bp，编码553个氨基酸，糖基化位点与已知的其他株系的位点相同；HN基因全长1904bp，编码571个氨基酸，其中第5个糖基化位点(第500～502个氨基酸)由NPT突变成NPV．为了便于在杆状病毒中表达，将F和HN基因的核心抗原区通过PCR扩增，并成功地克隆进杆状病毒转移栽体中，为利用杆状病毒表达系统生产抗新城疫病毒的基因工程疫苗打下基础．     

汉滩病毒嵌合基因G2S0.7重组腺病毒免疫学特性研究

对汉滩病毒糖蛋白 (GP)和核蛋白 (NP)的嵌合基因G2S0 .7重组腺病毒的免疫学特性进行研究。将汉滩病毒含有G2S0 .7嵌合基因的重组腺病毒直接免疫Balb/c小鼠 ,用ELISA、微量细胞培养中和实验及淋巴细胞增殖实验检测免疫应答效果 ,以研究嵌合基因的免疫效果。结果用该重组腺病毒免疫的小鼠 ,可诱导产生抗汉滩病毒NP及GP特异性的抗体 ,抗体效价分别为 1 :1 6 0及 1 :2 0。同时重组腺病毒还可刺激机体产生低水平的中和抗体和明确的淋巴细胞增殖反应。说明汉滩病毒嵌合基因G2S0 .7重组腺病毒 ,既可刺激机体产生特异性的抗汉滩病毒体液免疫应答 ,也可刺激机体产生特异性的细胞免疫应答 ,本研究为汉滩病毒基因工程疫苗的研究奠定了实验基础     

微量血凝抑制试验监测技术在鸡新城疫防治中的应用

本文介绍了用微量血凝抑制试验方法监测鸡血清中鸡新城疫（ND）抗体效价在防治该病中三个方面的应用，为临床合理免疫、科学预防提供了依据。     

鸡新城疫水－油－水型活性复乳的研制和免疫研究

水－油－水（Ｗ／Ｏ／Ｗ）型活性复乳是将油包水初乳（Ｗ／Ｏ）进一步分散在水相中经过二次乳化，使用时并配以新城疫弱毒疫苗联合制成。采用透析法测定复乳的形成率分别为９５．０％，８９．３％，８８．０％和８４．４％，雏鸡免疫后４ｄＨＩ抗体即明显升高，井持续２个月以上；对育成鸡的加强免疫持续期达１４个月，滴鼻或肌注攻毒全保护，证实新城疫Ｗ／Ｏ／Ｗ活性复乳已达到实用要求。     

鸡新城疫水-油-水型活性复乳的研制和免疫研究

水－油－水（Ｗ／Ｏ／Ｗ）型活性复乳是将油包水初乳（Ｗ／Ｏ）进一步分散在水相中经过二次乳化，使用时并佤以新城疫弱疫苗联合制成，有杉透析法测定复乳的形成率分别为９５．０％，８９．３％，８８．０％和８４．４％，雏鸡免疫后４天ＨＩ抗体即明显升高，并持续２个月以上，对育成鸡的加强免疫持续期达１４个月，滴鼻或肌注攻毒全保护，实新城疫Ｗ／Ｏ／Ｗ活性复乳已达到实用要求。     

ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC对α9α10乙酰胆碱受体的活性研究

分析和检测了ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC对α9α10乙酰胆碱受体(nAChR)的结合活性,并用重组表达在非洲爪蟾卵母细胞膜上的大鼠α9α10 nAChR受体,分别评价了2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC在常规的ND96灌流液和不含钙离子的钡离子ND96灌流液(Ba2+ND96)中对该受体的阻断活性.研究表明,2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC在Ba2+ND96灌流液中对α9α10 nAChR没有抑制作用,而它们在常规的ND96灌流液中却表现出微弱的抑制活性,这应是受钙离子激活产生的氯离子电流影响的结果.因此,2个ω-芋螺毒素MVIIA和MVIIC并不是α9α10 nAChR的有效阻断剂,其作用机理与α-芋螺毒素Vc1.1和Rg IA完全不同.本研究阐明了芋螺毒素抑制α9α10 nAChR和钙离子通道的机理,这对研发新型的芋螺毒素镇痛药和更好地治疗顽固性疼痛具有很重要的科学意义.     

半胱胺对鸡十二指肠中肥大细胞数量的影响

84只1日龄小公鸡,分为四组,分别为对照组、新城疫弱毒疫苗免疫组(ND组)、饲喂半胱胺的试验组(CS组)以及饲喂半胱胺后,再用新城疫弱毒疫苗进行消化道粘膜的试验组(CN组).应用甲苯胺蓝染色技术研究了十二指肠中肥大细胞数量的变化.结果显示:新城疫疫苗首免后第三周,CN组十二指肠中肥大细胞数量比ND组明显增加(P0.01);首免后第五周,各试验组十二指肠中肥大细胞的数量均比对照组多,尤其是CN组,可能因为个体差异较大,各组间并无显著差异.本试验的结果提示,肥大细胞的数量可能反映了消化道粘膜的免疫水平.     

线粒体基因种属鉴定复合扩增体系

针对cyt b基因和ND6基因序列,设计两对引物,以14种常见动物（包括人）生物性检材为对象进行PCR扩增,产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、硝酸银染色进行分析。结果证明,两条电泳条带者为人样本,分别是cyt b基因片段（358 bp）和ND6基因片段（181 bp）;一条电泳条带者为动物来源,是358 bp cyt b基因片段。在37.5μL PCR反应体系中最小检出模板量为0.25 pg基因组DNA。检材在4℃、室温和37℃温度下,经过4个月后均可获得正确的种属区分。高度潮湿环境中放置50 d的检材、形成于水泥地面、墙面、泥土等基质上的血痕,本方法可得到正确区分。由此建立的种属鉴定的线粒体基因复合扩增体系,其检测片段短、灵敏度高、操作简易,适合法医学上微量、降解、陈旧检材的种属判定。     

鸡脾转移因子对传染性法氏囊疫苗的作用

中等偏弱毒力的传染性法氏囊病毒(IBDV)疫苗免疫鸡不产生免疫抑制而中等毒力以上的传染性IBDV疫苗免疫时会导致鸡不同程度的免疫抑制,给养禽业造成很大的经济损失,为了试验转移因子(TF)拮抗这种免疫抑制的作用,将180只试验AA肉鸡10日龄雏鸡分为6组,每组30只,其中第6组为对照组.第1组免疫中等偏弱Bj836株IBDV疫苗,第2、3、4、5组鸡在10日龄时免疫中等毒力B87株IBDV疫苗,其中第3、4、5组使用不同剂量的TF.免疫24h后,6组鸡均免疫新城疫(ND)疫苗.在鸡17日龄、24日龄、31日龄时,各组随机抽取鸡检测免疫器官指数和ND抗体水平.试验结果显示:第3、4、5组鸡免疫器官指数及ND抗体水平明显高于第2组,且分别稍低、接近、高于健康鸡第6组.表明了TF可拮抗IBDV免疫时引起的免疫抑制,效果显著.     

复方中草药添加剂对银香鸡生长性能及免疫功能的影响

选用黄芪、党参、当归、枸杞子、刺五加、山楂和甘草7种补益类中草药作饲料添加剂,添加到银香雏鸡日粮中进行饲养试验,以研究复方中草药添加剂对银香鸡生长性能和免疫机能的影响。试验各组基础日粮相同,试验组添加1%中草药,抗生素对照组添加50mg/kg杆菌肽梓,空白对照组只是基础日粮。试验测定试验鸡体重、增重及免疫器官相对重,于3周龄时接种新城疫疫苗检测血清抗新城疫抗体效价评价中草药添加剂的免疫促进作用。结果表明,6周龄试验组鸡体重和增重与抗生素对照组体重和增重相比差异不显著(P0.05),与空白对照组体重和增重相比差异显著(P0.05),复方中草药添加剂与抗生素具有同样的促生长作用;试验组脾脏和法氏囊相对重,血清抗新城疫抗体效价都显著高于对照组,复方中草药饲料添加剂对银香鸡有免疫促进作用。     

鸡新城疫病毒ND-xx08株F基因的克隆及分析

新城疫病毒（NDV）ND-xx08毒株经10 d龄SPF鸡胚增殖后,提取其基因组RNA并反转录成cDNA,用NDV F基因特异性引物,经PCR扩增后获得与F基因预期大小一致的DNA片段。将NDV F基因片段克隆到pMD18-T载体上,并进行EcoR I和Hind III双酶切鉴定和测序鉴定。结果显示,ND-xx08毒株F基因片段的长度为1 662 bp,共编码554个氨基酸,F蛋白的裂解位点为112R-R-Q-K-R-F117,是典型强毒株氨基酸序列结构。将NDV ND-xx08株F基因的47 bp到420 bp序列与新城疫病毒基因型I至基因型Ⅸ毒株的相同序列绘制病毒基因进化树,显示ND-xx08分离株属于基因Ⅶe型。将NDV ND-xx08株F全基因与国内外发表的23株NDV F基因核苷酸序列和氨基酸序列的同源性比较分析,结果表明,其核苷酸序列的同源性在82.7%~97.8%之间,氨基酸同源性在87.5%~97.7%之间。