腺梗豨莶提取物对脂多糖活化巨噬细胞释放一氧化氮的抑制作用

用脂多糖（LPS）诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264．7释放一氧化氮（NO）,Griess法测定培养上清中NO释放量并计算抑制率,MTT法测定细胞存活率评价药物的细胞毒性,以检测腺梗豨莶不同溶剂萃取部位对活化巨噬细胞释放炎症介质NO的抑制作用．结果表明,石油醚及乙酸乙酯部位对活化巨噬细胞释放NO的抑制作用明显强于正丁醇部位及水层,即石油醚及乙酸乙酯部位为腺梗豨莶抑制活化巨噬细胞释放NO的主要活性部位,半数抑制浓度（IC50）值分别为6．0和6．5μg·mL^-1,其作用强度优于该植物的主要活性成分奇壬醇（IC50为37．5μg·mL^-1）,推断该活性部位中应含有奇壬醇以外的其他活性化合物．以上结果为进一步阐明腺梗豨莶的抗炎作用物质基础提供了一定的理论基础．     

阿奇霉素-苦木注射液联用对炎症细胞因子释放影响的体外研究

实验研究阿奇霉素与苦木注射液体外联合用药对前炎症因子NO、TNF-α抑制作用的影响.采用脂多糖(LPS)体外刺激小鼠单核巨噬细胞RAW264. 7,刺激细胞释放TNF-α、NO前炎性因子.采用MTT法评价细胞毒性; Griess法检测培养液上清中NO含量;ELISA试剂盒法检测TNF-α含量;金正均法计算Q值进行药效联用评价.结果表明阿奇霉素联合苦木注射液在10～200μg/m L浓度范围内可明显抑制LPS诱导巨噬细胞RAW264. 7释放的炎性因子TNF-α、NO,并呈现良好的剂量依赖关系.阿奇霉素联合苦木注射液对炎症因子NO具相加抑制作用,对炎症因子TNF-α具协同抑制作用.     

紫花地丁提取物对LPS诱导RAW 264.7细胞的体外抗炎作用

观察紫花地丁提取物对脂多糖诱导的RAW 264.7巨噬细胞的抗炎作用并探讨其机制.采用脂多糖(1μg/mL)诱导RAW 264.7巨噬细胞建立体外炎症模型,格里斯试剂法和酶联免疫吸附法分别检测细胞上清液中的NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的浓度,凝胶成像法检测细胞中iNOS、COX-2蛋白水平.结果显示,紫花地丁水提物、醇提物剂量依赖地降低脂多糖刺激巨噬细胞分泌NO、TNF-α、IL-6、IL-1β以及其iNOS、COX-2蛋白水平.相同剂量(100μg/mL)的紫花地丁醇提物抗炎活性优于水提物.结果表明,紫花地丁水提物、醇提物可抑制脂多糖刺激的RAW 264.7细胞炎症,其机制可能与抑制iNOS、COX-2蛋白表达,减少NO、TNF-α、IL-6、IL-1β等炎性因子的分泌有关.     

温莪术油中新莪术二酮的分离分析及稳定性研究

对温莪术油中新莪术二酮的分离分析及稳定性进行研究.采用柱色谱、制备薄层、溶剂重结晶法等分离提取,经1H NMR、13C NMR、MS等波谱技术鉴定结构,并初步考察了新莪术二酮的稳定性.结果表明新莪术二酮在加热条件下不稳定,在Lewis acid催化下可异构化为莪术醇.新莪术二酮为含氧倍半烯萜类化合物,属于热敏性物质.本研究为温莪术油质量控制提供了有效数据.     

维药野西瓜醇提物的镇痛作用研究

目的:研究野西瓜的镇痛作用,并探讨其作用机制.方法:体内建立福尔马林致小鼠神经性和炎症性双相疼痛、小鼠热板致痛、冰醋酸致小鼠扭体反应动物模型,观察不同实验组效果.体外以RAW264.7细胞为研究对象,探讨野西瓜醇提物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞释放一氧化氮(NO)的影响.结果:野西瓜醇提物对福尔马林所致小鼠双相疼痛反应呈剂量依赖性的抑制作用,使小鼠局部炎症组织前列腺素E2(PGE2)含量降低,延长小鼠热板痛阈值,减少醋酸致小鼠扭体次数,抑制RAW264.7细胞内NO的产生.结论:野西瓜醇提物有很好的抗炎镇痛效果,其作用机制之一可能是通过降低PGE2含量来发挥作用.     

雪上一枝蒿醇提物体外抗炎作用的研究

为探讨雪上一枝蒿醇提物(EABD)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞活性和细胞凋亡,分泌的一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)的影响,经LPS诱导后以不同浓度雪上一枝蒿醇提物作用于小鼠腹腔巨噬细胞,用MTT法检测细胞活性,Hoechst33258荧光染色检测细胞凋亡,荧光探针DCFH-DA测定活性氧(ROS),Griess法检测NO.结果表明:EABD可显著抑制LPS造成的小鼠巨噬细胞损伤和细胞凋亡,20,100μg/mL EABD干预后使小鼠腹腔巨噬细胞内ROS水平降低,剂量依赖性减少NO表达(P<0.05),说明雪上一枝蒿通过抗氧化途径发挥体外抗炎作用.     

呋喃二烯的体内外抗肿瘤作用研究

探讨了呋喃二烯的体内外抗肿瘤作用及作用机理．采用MTT法检测呋喃二烯对10种人肿瘤细胞的体外增殖抑制作用,研究发现呋喃二烯对体外培养的多种肿瘤细胞具有很强的抑制和杀伤效应,其IC50在0．98-4．81μg/mL．并对敏感的白血病细胞HL-60进行初步的作用机制研究,其形态学和流式细胞分析试验均表明它能有效诱导细胞调亡．整体动物试验结果可证实呋喃二烯乳注射液能明显延长荷腹水癌S180小鼠的生存期,生命延长率分别为80mg／kg（91．2％）,30mg／kg（82．4％）,10mg／kg（70．59％）．     

小白菊内酯对RAW264.7炎症细胞因子表达的抑制

目的:研究小白菊内酯对细菌脂多糖诱导炎症反应的抑制作用.方法:选用小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用实时定量多聚酶链式反应及酶联免疫吸附法,检测不同浓度小白菊内酯(0.1、1、10、50μmol/L)和细菌脂多糖(10μmol/L)作用后,细胞因子的mRNA(IL-6、TNF-α、Ptgs2、IL-1β、IL-10、MMP13与CXCL1)及蛋白(IL-6、TNF-α、IL-1β与IL-10)表达水平的改变.实验同时设立4个对照组,包括DMSO组、脂多糖组、DMSO+脂多糖组及阳性药Bay 11-7082+脂多糖组.结果:浓度分别为10和50μmol/L小白菊内酯稳定有效地抑制脂多糖诱导小鼠巨噬细胞产生细胞因子.在mRNA水平上,IL-6、TNF-α、Ptgs2、IL-1β、IL-10与MMP13的mRNA表达水平明显下降,差异有显著性,CXCL1 mRNA表达水平改变无统计学差异;在蛋白水平上,IL-6、TNF-α、IL-1β与IL-10的表达亦显著性下降,有统计学差异.结论:小白菊内酯有效抑制了细菌脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞中炎症细胞因子的表达.     

轮环藤碱对小胶质细胞活化的抑制作用研究

考察了轮环藤碱对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞过度活化的抑制作用.培养BV2小鼠小胶质细胞系,以脂多糖(1μg/mL)激活小胶质细胞,同时给予不同浓度的轮环藤碱(0.1～10μmol/L)处理细胞,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞存活率,Griess法测定细胞释放一氧化氮(NO)水平,酶联免疫吸附分析实验(ELISA)检测细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)和白介素-6(IL-6)的水平.进一步在无细胞体系中考察了轮环藤碱对NO的直接清除能力;以及对DPPH、羟自由基(·OH)、过氧亚硝酸根离子自由基(ONOO~-)和超氧阴离子(·O_2~-)自由基的清除作用.结果表明,轮环藤碱可显著抑制LPS激活的小胶质细胞释放NO及三种炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α),且对细胞存活率无明显影响;此外,轮环藤碱对NO、DPPH、·OH、ONOO~-和·O_2~-自由基均具有显著清除能力.综上,轮环藤碱可能对小胶质细胞过度激活引起的神经炎性相关疾病具有潜在的防治作用.     

贵州土荆芥挥发油化学成分研究

采用水蒸气蒸馏法提取土荆芥全草挥发性成分，用气相色谱／质谱进行分离测定，结果计算机检索技术对分离的化合物进行结构鉴定，鉴定出48个化学成分，主要成分为单萜烯类、倍半萜烯类及其含氧衍生物等，主要有吉巴烯D、β－石竹烯、吉马烯B、β－榄香烯、莪术烯、β－侧柏烯和α－杜松醇。应用色谱峰面积归一化法测定各成分的相对百分含量。     

开口箭均一多糖 TCP-C1-1的结构分析及其生物活性

该文从开口箭根茎部位提取分离开口箭多糖TCP-C1-1，确定其结构并对其生物活性进行研究.实验采用水提醇沉法从开口箭根茎部分离提取多糖，通过Sevage法对80%醇沉部位TCP-C进行纯化，采用DEAE-52 纤维素离子交换树脂和葡聚糖凝胶Sephadex G-200 从TCP-C中进行分离纯化得到多糖TCP-C1-1，采用高效凝胶色谱，TLC薄层层析，红外光谱核磁共振氢谱碳谱等技术对多糖TCP-C1-1结构进行分析.结果分析，从开口箭中分离纯化得到 TCP-C1-1 多糖为果糖组成的均一多糖，连接方式其为β-(2→1)连接，相对分子质量为1.52×104.TCP-C1-1具有良好的生物活性，在浓度为2 mg·mL－1时，其自由基清除率可以达到63.3%.在浓度为6.5 mg·mL－1时，其对α-糖苷酶的抑制率可以达到78.6%.在浓度为1.5 μg·mL－1时，其可以明显促进小鼠单核巨噬细胞 RAW 264.7 的增殖(p＜0.05)，并能明显抑制LPS诱导小鼠单核巨噬细胞 RAW 264.7细胞释放出的 NO.TCP-C1-1为首次从开口箭中分离得到的天然来源的菊粉类果聚糖，为初步研究为开口箭多糖成分的开发提供了一定参考.     

助剂对石油污染土壤生物修复的强化作用

在添加高效降解菌剂的基础上,研究了营养物质的种类、添加量以及不同表面活性剂对石油污染土壤修复效果的影响。结果表明,营养物质种类对修复过程的影响显著,添加N、P含量较高的硝基磷酸铵以及自行配制的NH4NO3:NH4H2PO4=5:1混合肥料的处理石油降解率比对照分别提高15.1%以及17.2%,当土壤中C:N的比例控制在100:7.05~100:9.4之间时,修复效果较好,且肥料的添加宜采用少量多次的原则;添加表面活性剂的处理中,鼠李糖脂的处理效果最好,石油降解率比对照提高8%,优于其他化学表面活性剂处理。     

野漆树苷对LPS诱导的RAW264.7细胞的抗炎作用及机制探究

目的:探究野漆树苷(Rhoifolin,RHO)对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞炎症模型释放炎性因子的影响,并探讨其作用机制.方法:用脂多糖(0.5μg·mL~(-1))刺激体外生长良好的RAW264.7细胞24h建立体外细胞炎症模型,以MTT法测定不同浓度RHO对RAW264.7细胞的毒性作用,用Griess试剂法检测一氧化氮(Nitric Oxide NO)的含量,RT-PCR法检测细胞中肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor,TNF-α),白介素1β(Interleukin-1β,IL~(-1)β),白介素6(Interleukin,IL-6)的含量,采用Western Blot法检测MAPK信号通路中相关蛋白的含量.结果:与空白对照组相比,在LPS诱导下,RAW264.7细胞分泌致炎因子NO,TNF-α,IL~(-1)β,IL-6(P0.01);与模型组相比,25~100μmol·L~(-1)的RHO可明显下调LPS诱导的RAW264.7细胞释放炎症因子NO,TNF-α,IL~(-1)β和IL-6(P0.05,P0.01),并呈现良好的剂量依赖关系;野漆树苷还不同程度的抑制了Erk和JNK激酶的磷酸化.结论:RHO可以抑制LPS所致的RAW264.7细胞炎症反应,减少炎症因子NO分泌,抑制TNF-α,IL~(-1)β和IL-6mRNA的合成,抑制JNK/SAPK及Erk信号通路可能是其抗炎作用机制之一.     

钩藤中钩藤碱对肿瘤坏死因子-α诱导人星型胶质细胞炎症模型作用机制研究

目的研究钩藤中钩藤碱对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导人星型胶质细胞(Human Astrocytes,HA)的炎症模型的作用机制.方法:体外培养HA,用TNF-α诱导HA造模,将细胞分为正常组、模型组、钩藤碱组、依达拉奉组.采用噻唑蓝(MTT)法检测钩藤碱对HA增殖能力的影响,用逆转录PCR法(RT-PCR)检测一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)mRNA、白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)mRNA、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)mRNA的表达,用分光光度法检测一氧化氮(nitric oxide,NO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)的表达,用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测p-mTOR,mTOR,p-Stat3和Stat3的蛋白表达.结果与正常组比较,32ng·mL-1的TNF-α对星形胶质细胞有明显抑制作用(P0.001);400μmol·L~(-1)的钩藤碱对星形胶质细胞活力有明显抑制作用(P0.001).与模型组相比,200μmol·L~(-1)的钩藤碱对模型细胞有明显的增殖作用(P0.01);钩藤碱组和依达拉奉组NOS mRNA,NO和SOD都显著上升(P0.001),IL-23mRNA,IL-6mRNA和MDA都显著下降(P0.001);钩藤碱组p-mTOR/mTOR和p-Stat3/Stat3都显著下降(P0.01).结论钩藤有效成分钩藤碱具有抑制TNF-α诱导HA炎症的损伤作用,可能是通过下调mTOR/STAT3信号通路增加氧化相关因子NOS,NO,SOD的表达,减少氧化相关因子MDA以及炎症相关因子IL-23和IL-6的表达.     

柿叶黄酮的降血压作用及其作用机制研究

用一氧化氮合酶抑制剂N^G-硝基-L-精氨酸甲酯（N^G-nitro-L-arginine-methlester,L-NAME）复制高血压大鼠模型研究柿叶黄酮对高血压大鼠的降血压作用。试验分为正常对照组、模型对照组,柿叶黄酮低、中、高剂量组（20mg·kg^-1·d^-1,40mg·kg^-1·d^-1,80mg·kg^-1·d^-1）、卡托普利组（10mg·kg^-1·d^-1）。每周测大鼠尾动脉压,给药4周后处死大鼠,测定血清中一氧化氮（N0）、血浆内皮素（ET）和血管紧张素（Ang）Ⅱ的含量。结果显示,柿叶黄酮能明显降低L—NAME诱导的高血压大鼠的血压（P〈0．05）,并在剂量范围内呈剂量依赖性;与模型对照组相比,血清N0含量上升[（77．15±15．14）μmol·L^-1vs（30．77±10．62）μmol·L^-1,P〈0．01],血浆ET含量降低[（56．21±9．23）pg·ml^-1vs（87．28±11．75）pg·ml^-1,P〈0．01],血浆AngⅡ含量降低[（503．4±33．40）pg·ml^-1vs（666．62±33．45）pg·ml^-1,P〈0．01]。柿叶黄酮可能是通过增加内源性舒血管活性物质的释放和减少内源性收缩血管活性物质的释放来调节两者之间的平衡而发挥其抗高血压作用。     

一氧化氮对莲雾果实采后生理及品质的影响

以台湾"黑珍珠"莲雾为材料,研究了不同浓度(10μL·L-1和20μL·L-1)NO熏蒸处理对莲雾采后生理及品质的影响,结果表明:10μL·L-1和20μL·L-1NO处理能显著抑制贮藏过程中莲雾果实的呼吸速率,延缓其硬度的下降和失重率的增加,保持果实较高的可溶性固形物和可滴定酸水平,同时能有效控制果实中丙二醛含量和果实膜相对透性的上升,说明NO处理能够延缓莲雾果实采后的成熟与衰老过程.     

Regulation of endothelium-derived nitric oxide production by the protein kinase Akt.

Endothelial nitric oxide synthase (eNOS) is the nitric oxide synthase isoform responsible for maintaining systemic blood pressure, vascular remodelling and angiogenesis. eNOS is phosphorylated in response to various forms of cellular stimulation, but the role of phosphorylation in the regulation of nitric oxide (NO) production and the kinase(s) responsible are not known. Here we show that the serine/threonine protein kinase Akt (protein kinase B) can directly phosphorylate eNOS on serine 1179 and activate the enzyme, leading to NO production, whereas mutant eNOS (S1179A) is resistant to phosphorylation and activation by Akt. Moreover, using adenovirus-mediated gene transfer, activated Akt increases basal NO release from endothelial cells, and activation-deficient Akt attenuates NO production stimulated by vascular endothelial growth factor. Thus, eNOS is a newly described Akt substrate linking signal transduction by Akt to the release of the gaseous second messenger NO.     

浅水型水库活性区沉积物氮磷释放特征

为了了解浅型水库活性反应区底泥中氮磷的释放特征,对某小型水库活性区0-30cm沉积物柱芯分层进行氮、磷快速释放试验研究。研究结果表明:在厌氧条件下,可溶性无机磷(PO4-P)的释放速率显著比好氧状态下的高,最大释放速率为75.52μg/(h·g);在不同沉积深度的垂直剖面上,PO4-P释放量由大至小依次为中层(ML,14～16cm)、表层(SL,0～2cm)和底层(BL,28～30cm),较高的水温环境可促进可溶性磷释放;水库沉积物聚集了大量NH4-N在好氧条件下,沉积物释放的NH4-N质量浓度逐渐降低,同时伴随着NO3-N质量浓度大幅度增加;在厌氧条件下,NO3-N和NO2-N质量浓度无明显变化;不同沉积深度底泥层硝化作用存在显著差异,表层沉积底泥NO3-N转化速度最大;可通过曝气措施削减水库水中氮磷含量,抑制藻类过度繁殖,进而改善水库水环境质量和出水水质。     

高效液相色谱法测定火锅油、辣椒油中的苏丹红

建立高效液相色谱法测定火锅油、辣椒油中的苏丹红的含量。样品经提取、纯化、浓缩后,采用高性能的Kinetextm色谱柱进行分析,极大地缩短了分析时间,苏丹红Ⅰ～Ⅳ在5min内达到基线分离;在0～2.5mg·L-1浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数均为1.000);加样回收率在84.2%～96.7%,相对标准偏差在1.15%～3.25%之间;苏丹红Ⅰ～Ⅳ的检出限分别为7μg·kg-1,10μg·kg-1,4μg·kg-1和3μg·kg-1。