磁性琼酯糖亲和吸附剂的合成与应用

采用反相悬浮包埋技术合成了粒径在43-295μm之间的磁性琼脂糖微球。磁性琼脂糖微球经环氧氯丙烷活化后，分别键合6-氨基已酸、氨基乙酸和乙二胺为间隔臂，用水溶性碳二亚胺为缩合剂，分别偶联对氨基苯甲脒、l-精氨酸甲酯和胍基已酸，制备了3种磁性亲和吸附剂，并用于尿激酶粗品的分离纯化。测定了活性回收率和比活提高倍数，并与以磁性葡聚糖为基质的磁性亲和吸附剂对尿激酶的纯化效果进行了对比。     

β—环糊精衍生物构筑模拟酶水解青霉素生成6—APA

利用化学合成的β－环糊精衍生物构筑仿酶模型，模拟苄青霉素酰胺酶，将青霉素催化水解生成６－氨基青霉烷酸（６－ＡＰＡ）。     

人组织型纤溶酶原激活剂（t—PA）在大肠杆菌中的表达,…

人组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）ｃＤＮＡ重组在表达质粒ｐＤＲ７２０中。在Ｅ．ｃｏｌｉＣ６００中获得了表达，表达水平为２％。以醋酸锌显色ＰＡＧＥ凝胶回收ｔ－ＰＡ表达条带，进行复性处理。复性产物经Ｂｅｎｚａｍｉｄｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析，纯化得到ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染一条带纯度，比活为４，０００ｍｏｌ／ｓ·ｇ的人ｔ－ＰＡ。     

重组PAI—1在大肠杆菌中表达条件的研究及其对t—PA,u—PA…

带有表达质粒ｐＢＶ２２０／ＰＡＩ－１的大肠杆菌中，在菌体密度为Ａ６００ｎｍ＝０．３＝０．４时诱导，表达重组ＰＡＩ－１的效率最高。在诱导后的６ｈ以内，ｒＰＡＩ－１的百分含量持续升高。ｒ－ＰＡＩ－１经分离纯化并用盐酸胍激活后，能够与ｔ－ＰＡ及ｕ－ＰＡ反应，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和纤维蛋白自显影方法可以检测出它们所形成的复合物。     

N,N‘—二乙基二硫代氨基甲酸苄酯紫外光聚合的特性 …

合成了Ｎ，Ｎ’－二乙基二硫代氨基甲酸苄酯（ＢＤＣ）。在合成时，反应温度越高，反应时间越长，亲核取代反应越完全。以ＢＤＣ作为ｉｎｉｆｅｒｔｅｒ引发Ｓｔ、ＭＭＡ光聚合，单体Ｓｔ和ＭＭＡ的转化率随光照时间的增加而增加，但没有呈现出严格的线性关系。此外，反应温度温度高，单体转化率增加；ＰＳ和ＰＭＭＡ的粘均分子量则随光照时间和增加而呈线性增加的关系，所得聚合物的分子量分布较宽。ｉｎｉｆｅｒｔｅｒＢＤＣ可以进     

中国野生大豆胰蛋白酶抑制剂的初步研究

采用分离提取，电泳回收，ＰＡＧＥ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，亲和电泳和抑制活性测定等方法，对我国一年生和多年生野生大豆种子蛋白中的胰蛋白酶抑制剂进行了初步研究。在４５°Ｎ来源一的上生野生大豆中得到纯化的胰蛋白酶抑制剂。通过电泳迁移率，分子质量，末端分析和抑制活性等测定，证明中ＳＢＴｉ－Ａ２的Ｔｉ＾ｂ型。     

水溶性亲和超滤载体的制备和应用

用Ｄｅｘｔｒａｎ Ｔ２０００,经环氧氯丙烷交联并氧化产生部分羧基,偶联对氨基苯甲脒制得水溶性亲和载体巨配基。配基密度为７１．４μｍ ｏｌ／ｇ。截留分子量为１０ 万的超滤膜对所制亲和载体的截留率大于９９．５％ ,但尿激酶能自由通过。将比活为５００ＩＵ／Ａ２８０的尿激酶粗品经亲和超滤得到纯化的尿激酶,比活达６６ ３００ＩＵ／Ａ２８０,纯度提高１３３ 倍,回收率达８３．４％ 。     

共混复合胶乳及其胶膜性能的研究

用批量法合成了聚苯乙烯，聚甲基丙烯酸甲酯（ＰＭＭＡ）、聚丙烯酸丁酯（ＰＢＡ）均聚乳液，以及Ｐ（ＢＡ－Ｓｔ）和Ｐ（ＢＡ－ＭＭＡ）共聚乳液。实验发现极性相近的ＰＢＡ和ＰＭＭＡ乳液可以很好地混合，而极性相差较大的ＰＢＡ和ＰＳｔ乳液则必须在ＰＳｔ具液中补加乳化剂后方能混合均匀。     

大豆（G.max）胰蛋白酶抑制剂SBTi—A2新类型Ti^x的纯化及其…

用丙酮脱脂、稀酸处理、硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析等方法从大豆中分离纯化得一种新类型胰蛋白酶抑制剂Ｔｉ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉ＾ｘ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉ＾ｘ与已知的大豆蛋白酶抑制剂Ｔｉ＾ａ的相分对分子质量均为２１０００，且Ｎ－末端均为Ａｓｐ；亲和电泳分析显示Ｔｉ＾ｘ与Ｔｉ＾ａ；两者经ＣＮＢｒ裂解后电泳分析得到相同带型；纯化样品的氨基酸组成分析显示Ｔｉ＾ｘ比Ｔｉ＾ａ多了两个碱     

共混复合胶乳及其胶膜性能的研究

用批量法合成了聚苯乙烯（ＰＳｔ）、聚甲基丙烯酸甲酯（ＰＭＭＡ）、聚丙烯酸丁酯（ＰＢＡ）均聚乳液,以及Ｐ（ＢＡ－Ｓｔ）和Ｐ（ＢＡ－ＭＭＡ）共聚乳液．实验发现极性相近的ＰＢＡ和ＰＭＭＡ乳液可以很好地混合,而极性相差较大的ＰＢＡ和ＰＳｔ乳液则必须在ＰＳｔ乳液中补加乳化剂后方能混合均匀．对乳液最低成膜温度（ＭＦＴ）、胶膜硬度及耐水性的研究表明：质量比为１１的ＰＢＡ／ＰＭＭＡ共混胶膜和Ｐ（ＢＡ－ＭＭＡ）共聚胶膜的连续相组成相近;而对于同样组成的ＰＢＡ／ＰＳｔ共混胶膜,分散在连续相中的ＰＳｔ所占比例明显高于Ｐ（ＢＡ－Ｓｔ）共聚胶膜;ＰＢＡ／ＰＳｔ共混胶乳的使用性能不仅取决于其组成,还取决于成膜温度和使用温度     

Crystal structure of a complex between anthrax toxin and its host cell receptor

Anthrax toxin consists of the proteins protective antigen (PA), lethal factor (LF) and oedema factor (EF). The first step of toxin entry into host cells is the recognition by PA of a receptor on the surface of the target cell. Subsequent cleavage of receptor-bound PA enables EF and LF to bind and form a heptameric PA63 pre-pore, which triggers endocytosis. Upon acidification of the endosome, PA63 forms a pore that inserts into the membrane and translocates EF and LF into the cytosol. Two closely related host cell receptors, TEM8 and CMG2, have been identified. Both bind to PA with high affinity and are capable of mediating toxicity. Here, we report the crystal structure of the PA-CMG2 complex at 2.5 A resolution. The structure reveals an extensive receptor-pathogen interaction surface mimicking the non-pathogenic recognition of the extracellular matrix by integrins. The binding surface is closely conserved in the two receptors and across species, but is quite different in the integrin domains, explaining the specificity of the interaction. CMG2 engages two domains of PA, and modelling of the receptor-bound PA63 heptamer suggests that the receptor acts as a pH-sensitive brace to ensure accurate and timely membrane insertion. The structure provides new leads for the discovery of anthrax anti-toxins, and should aid the design of cancer therapeutics.     

蛋白纯化膨胀床内的流动特性

针对膨胀床内的亲和层析分离中的流动过程 ,基于一维两相流动模型提出一种宏观动量平衡模型。应用该模型导出速度 -液含率关系式 ,并解析膨胀床的床膨胀机理。结果表明 ,提出的关系式与Richardson-Zaki经验关系一致 ,预测值与文献中实测液含率相符良好 ,平均相对误差为 42% ;膨胀床内颗粒处于静定悬浮的机理是床中单颗粒实际受到的流体动力学曳力与经修正的颗粒有效重力平衡 ,相应给出了力平衡关系的有明确物理意义的表达式 ,讨论了影响分离效果的流体动力学因素。     

未澄清酵母均化液中 L-天门冬氨酸酶的分离——疏水膨胀床直接吸附法(英文)

研究了用疏水膨胀床直接从未澄清酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）均化液中分离Ｌ－天门冬氨酸酶的过程．吸附和冲洗采用膨胀床模式,而酶的洗提采用沉降床模式．在适当的疏水条件下,膨胀床中的疏水吸附剂（ＴｓｋｇｅｌＰｈｅｎｙｌ＿Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ６５０Ｃ）可从未澄清均化液中直接捕集分离Ｌ－天门冬氨酸酶．通过梯度洗提,一次膨胀床吸附过程中,酶活的洗脱率为９５％,均化液中酶的总回收率为６５％,洗脱液纯度为１３倍．本方法将膨胀床和疏水性吸附的特长有机地结合起来,是生物活性蛋白酶分离纯化的一个重要手段．     

重组Hepcidin融合蛋白的金属螯合亲和层析纯化

在大肠杆菌中表达的重组Hepcidin融合蛋白以包涵体形式存在,其N端带有6个组氨酸。以Ni²⁺-IDA-Sepharose Fast Flow为层析介质,在变性条件下以不同的咪唑和pH值洗脱方式对Hepcidin融合蛋白的纯化效果进行了比较,确定了该融合蛋白的金属螯合层析纯化条件。以60mmol/L咪唑洗脱杂蛋白,然后将pH值降至4.0洗脱融合蛋白,纯化后的融合蛋白纯度大于95%,而且不含咪唑,有利于下一步Hepcidin的制备。金属螯合层析中融合蛋白收率不低于90%。Ni²⁺-IDA-Sepharose Fast Flow对该融合蛋白的吸附量为30.4mg /mL。     

锥形床亲和层析过程的场协同分析

为了对亲和层析过程的强化提供理论依据,应用非平衡热力学唯象理论,分析了该过程中温度场、化学势场及重力场等各种场之间的协同关系,以及各自场内不同分量之间的协同关系.得到了亲和层析过程的总熵变表达式,多场协同条件下质量通量和热量通量的唯象表达式以及相应的传质和传热系数.分析结果表明:重力场的存在,维持了体系的非平衡状态、保证了锥形床的稳定操作,避免了柱子堵塞及压密化.上流锥形床亲和层析在多场协同下,其传质、传热以及吸附反应相互影响,过程的最终传递方向将取决于各场之间综合作用的结果.     

Silica-Based Solid Phase Extraction of DNA on a Microchip

Micro total analysis systems for chemical and biological analysis have attracted much attention. However, microchips for sample preparation and especially DNA purification are still underdeveloped. This work describes a solid phase extraction chip for purifying DNA from biological samples based on the adsorption of DNA on bare silica beads prepacked in a microchannel. The chip was fabricated with polydimethylsiloxane. The silica beads were packed in the channel on the chip with a tapered microchannel to form the packed bed. Fluorescence detection was used to evaluate the DNA adsorbing efficiency of the solid phase. The polymerase chain reaction was used to evaluate the quality of the purified DNA for further use. The extraction efficiency for the DNA extraction chip is approximately 50% with a 150-nL extraction volume, Successful amplification of DNA extracted from human whole blood indicates that this method is compatible with the polymerase chain reaction.     

红豆越橘总三萜的纯化及体外抗炎活性

【目的】为了综合开发利用红豆越橘果实,通过大孔吸附树脂-Sephadex LH-20纯化工艺获得纯度较高的红豆越橘总三萜化合物,并分析此三萜化合物的体外抗炎活性。【方法】以野生矮丛红豆越橘为原料,首先采用静态吸附-解析实验和动态吸附-解析实验筛选大孔吸附树脂,优化最佳工艺,确定最佳上样质量浓度、pH、上样体积、上样流速以及洗脱液浓度; 然后采用Sephadex LH-20羟丙基葡聚糖凝胶二次纯化,获得高纯度的红豆越橘总三萜; 采用对透明质酸酶和牛血清白蛋白的变性抑制率为抗炎评价指标,分析红豆越橘总三萜的抗炎活性。【结果】比较7种大孔树脂对红豆越橘总三萜的纯化效果,结果显示,X-5树脂最适合初级纯化,最佳纯化工艺优化结果为上样质量浓度1.5 mg/mL、样液pH 6、上样量为4/3 BV、上样流速1 BV/h、80%(体积分数)的乙醇进行洗脱,红豆越橘总三萜的纯度由原来的5.13%提高到29.46%。进一步采用Sephadex LH-20二次纯化获得纯度为(43.25±0.31)%的红豆越橘总三萜,抗炎活性结果显示,对透明质酸酶和牛血清白蛋白变性抑制率分别可达(81.5±1.37)%、(72.59 ±1.84)%。【结论】红豆越橘是一种营养丰富的浆果,通过二次纯化技术获得纯度较高的三萜类化合物,并初步证实红豆越橘总三萜具有一定的抗炎活性。     

重组人源性抗HBsAg单链抗体的纯化与性质鉴定

对大肠杆菌表达的人源性抗乙型肝炎表面抗原（HBsAg)单链抗体（scFv)进行了纯化研究，并对单链抗体活性及其结构进行了鉴定。大肠杆菌表达的单链抗体包涵体，用8mol/L尿素裂解，经过Ni离子螯合亲和层析和凝胶过滤两步纯化后，纯度（ω）达到97％以上，再通过透析复性除去尿素。经间接ELISA和竞争性ELISA证明，复性后的scFv具有与HBsAg结合的活性，而且对鼠源抗HBsAg单克隆抗体的抑制率可达40.3%，基质辅助激光解析飞行时间质谱（matrix assisted laser desorption ionization,MALDI-TOF-MS)的结果证明，重组的scFv分子量与理论值相符，肽质量图谱的结果证明重组单链抗体的一级结构与理论序列是完全相符的，并确定了scFv蛋白中二硫键的位置。     

高磁性壳聚糖微粒的制备与应用

采用壳聚糖包埋磁粉，经戊二醛修饰、环氧氯丙烷交联制得高磁性壳聚糖微料。此微粒共价结合卵清粘蛋白得到磁性亲和吸附剂，可应用于胰蛋白酶的亲和纯化。     

炭疽毒素及其克隆受体的研究进展

综述炭疽毒素研究的最新进展，炭疽毒素由3种蛋白组成：致死因子（L ethal factor,LF)，水肿因子(edema factor,EF)和保护性抗原（protective antigen,PA)，本文主要讲述了炭疽毒素的关键致病因子－致死因子（LF）的结构和功能，炭疽素受体（anthrax toxin receptor,ATR）的结构及其特征性功能基团，介绍了通过基因互补对ATR进行克隆的方法，并讨论了ATR和ATR的cDNA克隆在炭疽治疗的可能应用。