佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响

探讨了佛手叶挥发油对HeLa细胞形态与结构的影响.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,倒置显微镜、荧光显微镜和电子显微镜观察细胞形态与结构的变化,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜观察微管的分布.结果表明:佛手叶挥发油能够抑制HeLa癌细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;不同浓度的佛手叶挥发油处理HeLa癌细胞24 h后,低剂量(200μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞皱缩,染色质凝集,出现凋亡小体,微管解聚,表现为典型的凋亡特征;中、高剂量(400和800μg/mL)佛手叶挥发油使HeLa细胞膜裂解,内容物外泄,细胞碎片增多,表明细胞已坏死.     

佛手挥发油对B16细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响

为检测佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞增殖及其酪氨酸酶活性的影响,采用台盼蓝排斥法测定了细胞存活率、瑞-姬氏混染法观察了细胞形态变化、吖啶橙/溴化乙锭染色法检测了细胞的凋亡与坏死,用酶学方法测定了细胞中酪氨酸酶活性.结果表明:佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞增殖具有显著的抑制作用,呈剂量依赖性;62.50,125.00和250.00μg.mL-1佛手挥发油处理细胞6 h后,细胞核染色质凝聚于核膜内侧,呈固缩状或圆珠状,表现为典型的细胞凋亡特征;500.00μg.mL-1佛手挥发油处理细胞后,细胞膜破裂,出现细胞碎片,说明细胞已经坏死.酪氨酸酶活性检测结果显示:佛手挥发油对B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶活性具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性.     

酒精对PC12细胞凋亡的诱导作用

采用不同浓度酒精处理PC12细胞,观察酒精诱导细胞凋亡作用及其与线粒体凋亡途径的关系.结果显示,采用50、100、200、400和800mmol/L浓度的酒精处理去血清培养的PC12细胞24h后,细胞存活率分别是单纯去血清培养细胞存活率的85.66%、74.28%、62.47%、54.14%和50.35%,呈浓度依赖性,与对照组比较差异显著(P0.05).Hoechst 33342/PI染色法观察到典型凋亡现象,如核型固缩、染色质凝集等.DNA琼脂糖凝胶电泳可见100~400mmol/L浓度酒精处理组呈现凋亡细胞典型梯状DNA.酒精能使PC12细胞线粒体膜电位下降并呈浓度依赖性.酒精致PC12细胞凋亡过程中,凋亡关键蛋白Caspase-3、Caspase-9表达量升高.上述结果表明,酒精能够诱导PC12细胞凋亡,诱导作用随浓度升高而增强且酒精诱导PC12细胞凋亡与线粒体凋亡途径有关.     

野西瓜挥发油对人胃癌SGC-7901细胞的抑制

探讨野西瓜挥发油对人胃癌SGC-7901细胞生长的作用.采用MTT、SRB和肿瘤细胞集落形成能力实验观察野西瓜挥发油对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;激光共聚焦显微镜观察FITC-Annexin V和PI双染法检测野西瓜挥发油作用于SGC-7901细胞后细胞凋亡的形态特征.结果显示,野西瓜挥发油可抑制SGC-7901细胞的生长,MTT与SRB法测得其IC50为145.5μg/mL,GI50为121.32μg/mL,LC50为900.96μg/mL,TGI为240.55μg/mL;野西瓜挥发油对SGC-7901细胞集落形成的IC50为160.04μg/mL.Annexin V/PI双染激光共聚焦显微镜观察到75、150、300μg/mL的野西瓜挥发油可诱导SGC-7901细胞出现凋亡早、中、晚期的细胞形态.提示野西瓜挥发油具有明显的抗肿瘤作用,其抑瘤机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡.     

林下参花挥发油化学成分及其抗肿瘤细胞增殖活性研究

目的探讨林下参花挥发油化学组成及其对多种肿瘤细胞增殖活性的影响.方法通过水蒸气蒸馏法制备林下参花挥发油,应用GC-MS方法鉴定其化学成分,利用MTT法研究其对小鼠成纤维细胞NIH-3T3毒性及对人肺腺癌细胞A549、人宫颈癌细胞He La、人胃癌细胞SGC7901、小鼠黑色素瘤细胞B16和小鼠肾上腺皮质瘤细胞Y1增殖的影响.结果从林下参花挥发油鉴定出85种成分,包括脂肪族、萜类、芳香族等化合物,含量最高为棕榈酸、亚油酸、十三酸等;其在400μg/m L以下对于NIH-3T3细胞生长无毒性作用,且能够抑制Y1,He La,SGC-7901,B16细胞系增殖,对A549细胞系增殖无影响.结论林下参花挥发油化学成分含量较高的是脂肪族和萜类化合物,并且发现其对多种肿瘤细胞系具有抑制增殖活性.     

野西瓜挥发油抑制人肝癌HepG-2细胞增殖作用

探讨野西瓜挥发油对人肝癌HepG-2细胞生长的作用.采用MTT和SRB法观察野西瓜挥发油对HepG-2细胞增殖的抑制作用;FITC-Annexin V/PI双染流式细胞仪检测野西瓜挥发油作用于HepG-2细胞后细胞凋亡的形态特征.结果显示,野西瓜挥发油对HepG-2细胞生长具有明显的抑制作用,并且有剂量依赖性,MTT与SRB法测得其IC50为127.5μg/mL,GI50为131.98μg/mL,LC50为168.24μg/mL,TGI为301.91μg/mL;Annexin V/PI双染发现随着野西瓜挥发油剂量的增加,HepG-2细胞中活细胞数减少,早期凋亡细胞数增加,300μg/mL的挥发油作用于HepG-2细胞24 h后出现13.7%的早期凋亡细胞.提示野西瓜挥发油具有明显的抗肿瘤作用,其抑瘤机制可能为诱导肿瘤细胞凋亡.     

盐酸埃克替尼通过激活蛋白激酶C诱导Tca8113细胞表达iNOS和凋亡

体外培养Tca8113细胞,随机分为4组,(1)对照组;(2)埃克替尼处理组(20μmo1/L);(3)PKC抑制剂Ro31-8220(3μmol/L)处理组;(4)埃克替尼+Ro31-8220组(20μmo1/L Icotinib,3μmol/L Ro31-8220),不同干预因素处理细胞4h.Western blot检测不同处理组的胞膜内的PKC-α的表达水平,iNOS ELISA检测试剂盒测定细胞的iNOS含量,Griess方法测定Tca8113细胞产生的NO水平,用DNA fragmentation检测Tca8113细胞的凋亡情况.结果表明埃克替尼组DNA fragmentation细胞凋亡及上清液的iNOS,NO较对照组均明显升高;埃克替尼组细胞膜的PKC-α蛋白表达量明显增加.用埃克替尼与PKC的抑制剂Ro31-8220共同处理Tca8113细胞后,胞膜的PKC-α,iNOS的蛋白表达水平及产生的NO能被Ro31-8220显著抑制,且PKC抑制剂Ro31-8220能逆转埃克替尼引起的Tca8113细胞凋亡.埃克替尼能诱导Tca8113细胞iNOS表达和NO生成增加并能诱导Tca8113细胞凋亡;埃克替尼能促进细胞膜内的PKC-α表达增加;埃克替尼诱导的Tca8113细胞iNOS表达和凋亡与PKC有关.     

青风藤正丁醇萃取物对肝癌细胞增殖影响的研究

为验证青风藤正丁醇萃取物(BESA)体外抗肝癌活性,研究了BESA对人肝癌细胞株HepG2、SMMC-7721形态变化、细胞周期、细胞凋亡和细胞增殖的影响。结果显示BESA对HepG2、SMMC-7721肝癌细胞均有抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为18.23μg/m L,23.45μg/m L,且呈剂量效应关系;经BESA处理后,HepG2细胞形态变化很大,细胞出现核皱缩、贴壁性差、细胞裂解等现象,以20μg/m L的BESA处理HepG2细胞48 h后,流式细胞术检测到BESA对HepG2细胞周期的干预能力不强;但在诱发HepG2细胞发生凋亡方面效果明显,说明BESA能诱导HepG2细胞的凋亡达到抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

Exfoliazone通过诱导细胞凋亡抑制HepG2细胞体外增殖

探讨Exfoliazone对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响.采用细胞培养技术,用不同浓度的药物在一定的时间内处理细胞株,应用MTT比色法检测Exfoliazone对HepG2细胞体外生长的抑制作用;4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)荧光染料染色,显示凋亡细胞形态;用Western-Blotting检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白的表达;Annexin V/PI双染检测Exfoliazone对HepG2细胞凋亡的影响.Exfoliazone可抑制HepG2细胞的生长,并呈现剂量和时间的抑制,在药物处理24、48和72 h后,半数细胞抑制浓度(IC50)分别为35、16 和8 μmol/L.进一步研究表明,Exfoliazone可诱导PARP切割,细胞出现核质浓集和凋亡小体等典型的凋亡形态学特征,Annexin V/PI染色证实Exfoliazone能诱导HepG2细胞凋亡,并且以早期凋亡为主.Exfoliazone可能通过诱导HepG2细胞凋亡抑制癌细胞的生长.     

新制癌菌素诱导小鼠海马神经元细胞DNA损伤的作用研究

为了探索化学诱导物新制癌菌素(NCS)对小鼠海马神经元细胞株HT22 DNA损伤的影响,研究以9Gy X射线辐照为阳性对照组,通过CCK8试剂盒法检测绘制NCS作用下HT22细胞生长曲线以明确NCS处理细胞的最佳浓度,经Hoechst染色和TUNEL染色观察该剂量NCS对细胞DNA损伤及凋亡的影响,用免疫荧光染色结合Western blot分析HT22细胞核中DNA损伤反应酶PARP1的表达变化.结果显示,NCS作用的终质量浓度为1 000 ng/m L时,从48 h起对HT22细胞增殖表现出显著的抑制作用;Hoechst染色可见NCS作用下HT22细胞DNA损伤加剧,TUNEL染色提示NCS能够诱导细胞凋亡;免疫荧光染色和Western-blot实验显示NCS能够促进细胞核内PARP1的表达.说明化学诱导剂NCS能够引起HT22细胞DNA损伤及凋亡以及上调DNA损伤反应酶PARP1的表达,可以用于模拟大剂量射线对细胞的辐射损伤效应.     

Blf-ADT对HeLa细胞的抑制作用及其机制的研究

研究Blf-ADT(布洛芬硫化氢供体物)的抗肿瘤作用,并对其机制作初步探讨.通过形态学观察、噻唑蓝(MTT)比色实验、集落形成实验测定He La细胞的增殖能力;细胞划痕实验测定He La细胞的迁移能力;Annexin VFITC/PI双染流式细胞仪测定He La细胞的凋亡率;Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Erk、P38和Procaspase-3等)的表达.结果显示,Blf-ADT能呈浓度或时间依赖性抑制细胞增殖、减少细胞集落的形成,降低细胞的迁移能力,同时能显著提高He La细胞的凋亡率,影响细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax、Erk、P38和Procaspase-3等)的表达.Blf-ADT对人宫颈癌He La细胞的生长有显著的抑制作用,对治疗宫颈癌具有潜在的临床应用价值.     

茶多酚诱导卵巢癌COC1细胞凋亡的研究

卵巢癌是女性生殖系统恶性肿瘤之一,而茶多酚具有抗肿瘤和抗氧化的作用,作者研究茶多酚对体外培养的卵巢癌COC1细胞凋亡的影响.采用不同浓度茶多酚处理卵巢癌COC1细胞,24h后分别采用AO/PI双染法和琼脂糖凝胶电泳法(DNA Ladder),观察和分析茶多酚对COC1细胞凋亡的影响.结果显示,低浓度茶多酚(≤500μg/mL)处理24h后,出现早起凋亡现象;而高浓度的茶多酚(2 000μg/mL)后,出现了明显的晚期凋亡现象;过高浓度(4 000μg/mL)处理,细胞出现死亡现象.不同浓度的茶多酚处理后,细胞均可检测到DNA Ladder,且随着茶多酚浓度的增加,DNA裂解程度加深,电泳中DNA Ladder更明显.实验结果表明,不同浓度茶多酚处理均可以诱导卵巢癌细胞株COC1产生细胞凋亡,研究结果为筛选新型的抗癌药物提供参考.     

去甲斑蝥素抑制胃癌MGC-803细胞生长并诱导其凋亡

目的:探讨去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的抑制作用及其可能的作用机制。方法:噻唑蓝（MTT）法及克隆形成抑制实验观察去甲斑蝥素对胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用,碘化丙锭（propidium iodide,PI）单染色检测细胞周期改变,膜连蛋白-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC/PI）双染流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western blotting检测凋亡相关蛋白的表达。结果:去甲斑蝥素作用MGC-803细胞后,不同浓度的去甲斑蝥素对胃癌细胞的生长均有抑制作用,且呈剂量-效应关系（P<0.05）,去甲斑蝥素作用于胃癌MGC-803细胞48 h和72 h的IC₅₀浓度分别为69.92μmol/L和31.27μmol/L;与对照组相比随着去甲斑蝥素的浓度增加,细胞克隆逐渐减少;细胞周期检测结果显示,随着去甲斑蝥素浓度的增加,胃癌MGC-803细胞出现明显G2/M期阻滞;不同浓度去甲斑蝥素作用后,出现明显的凋亡细胞群;Western blotting检测结果显示,去甲斑蝥素处理组细胞的Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1表达明显降低,促凋亡蛋白Bax表达基本不变。Casepase-9、Caspase-3活化降解,PARP蛋白出现切割条带。结论:去甲斑蝥素能够抑制胃癌MGC-803细胞生长,使细胞周期抑制在G2/M期,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞发生凋亡。     

白杨素衍生物通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的神经细胞的损伤

研究白杨素衍生物对谷氨酸诱导的神经细胞损伤的保护作用.以谷氨酸构建体外培养SH-SY5Y神经细胞损伤的模型,选择噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率;使用酶标仪,对细胞培养液中过氧化氢酶的活性和超氧化物歧化酶的活性进行检测,并对丙二醛的含量及总抗氧化能力的高低进行检测;使用Annexin V/PI的方法染色,流式细胞术对细胞凋亡率进行检测.结果:不同浓度药物(50、100、200、400μmol/L)处理可显著提高细胞存活比例,药物浓度为200μmol/L时细胞存活比例最高,过氧化氢酶、超氧化物歧化酶的活性也最高,丙二醛的含量最低,总抗氧化达到最大水平.药物浓度为100、200μmol/L,其凋亡率降低到11.39％、5.02％,较模型组的凋亡率28.06％降低了2-5倍多.白杨素衍生物对谷氨酸诱导的SH-SY5 Y神经细胞拥有效果明显的保护作用,它的作用机制或是通过抑制细胞凋亡进而达到保护作用.     

TAT-Apoptin蛋白制备及其诱导BGC-823细胞的凋亡作用

为了制备单一组分TAT-Apoptin融合蛋白,检测其跨膜及凋亡活性.利用IPTG诱导目的质粒p GEX-6p-1-TAT-Apoptipn及对照质粒p GEX-6p-1-TAT-EGFP和p GEX-6p-1-TAT-Apoptin-EGFP可溶性表达,纯化蛋白并孵育BGC-823细胞,荧光显微镜、DNA ladder、流式细胞术检测融合蛋白跨膜及凋亡活性.结果表明,成功诱导融合蛋白表达,获得单一蛋白,荧光显微镜检测TAT将融合蛋白带入细胞内且不影响其活性,TAT-Apoptin融合蛋白处理BGC-823细胞36和48 h时后出现典型DNA Ladder条带,流式细胞术检测早期凋亡率48 h为61.5%,在24~48 h范围内凋亡率增加.结论为制备的TAT-Apoptin蛋白可跨膜诱导BGC-823细胞凋亡,且具有较高活性.     

表儿茶素没食子酸酯对人鼻咽癌C666-1细胞凋亡的影响

该文观察ECG在人鼻咽癌细胞株C666-1增殖与凋亡中的作用,并初步探讨其机制.人鼻咽癌C666-1细胞给予不同浓度ECG(0~100μmol/L)处理48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖水平,使用TUNEL法和流式细胞仪检测细胞凋亡率,利用Western blotting法检测Bax、Bcl-2、Caspase 3等凋亡相关蛋白的表达变化.结果表明,25μmol/L以上浓度的ECG可抑制C666-1细胞增殖,诱导细胞凋亡;并且ECG可浓度依赖性增加Bax/Bcl-2蛋白比值和剪切的Caspase 3蛋白水平.以上结果表明ECG可抑制人鼻咽癌细胞株C666-1增殖,并诱导细胞凋亡.ECG的作用与其增加Bax/Bcl-2相对蛋白比值进而激活caspase-3有关.     

汉防己甲素诱导口腔癌细胞Tca8113凋亡作用的研究

目的:研究汉防己甲素(TET)对口腔癌细胞Tca8113的影响及其诱导凋亡的作用.方法:应用CCK-8法检测TET对Tca8113细胞的影响,流式细胞术检测TET对Tca8113细胞周期及凋亡率的作用,Western blotting法检测TET对细胞凋亡相关蛋白PARP和Bcl-2表达的影响,Transwell小室法检测TET对Tca8113细胞迁移能力的影响.结果:CCK-8法结果表明随TET浓度增加,对Tca8113的抑制率增加.流式细胞术结果显示TEF浓度为32和64μmol/L实验组中,G0/G1期细胞分别为58%和60%,显著高于对照组(48%,P0.05);其对Tca8113细胞的凋亡率分别为25%和61%,显著高于对照组(13%,P0.05).Western blotting法结果表明,与对照组相比,实验组中cleaved PARP表达显著增加,Bcl-2表达显著减少.经Transwell小室检测,浓度为32和64μmol/L TET作用后穿膜的细胞平均数分别为78和45,显著低于对照组(90,P0.05).结论:TET能显著抑制口腔癌细胞Tca8113的生长和迁移,诱导细胞的凋亡.     

选择性COX-2抑制剂尼美舒利对白血病K562细胞增殖的影响

目的:观察选择性COX-2抑制剂尼美舒利对人类骨髓白血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法:分别以尼美舒利25、50、100μg.mL-1体外处理骨髓白血病K562细胞,采用MTT比色法、流式细胞仪分析技术及DNA片段凝胶电泳等方法,检测尼美舒利对K562细胞增殖和凋亡的影响。结果:尼美舒利剂量依赖性地抑制K562细胞增殖,其中等剂量组(50μg.mL-1)的抑制作用强于阿霉素组(25μg.mL-1);尼美舒利可诱导细胞凋亡,使细胞阻滞于G0/G1期,S期细胞明显减少,其诱导细胞凋亡的作用也呈剂量依赖性(剂量由低至高,凋亡率分别为(3.4±2.8)%,(16.8±1.8)%和(42.7±2.5)%;DNA条带分析也进一步证实了尼美舒利的促凋亡作用。结论:尼美舒利在体外可显著抑制K562细胞增殖,该作用可能与其干扰细胞周期、诱导细胞凋亡有关。     

莪术油对胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响

研究莪术油影响人胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的机制。采用台盼蓝拒染法检测不同剂量莪术油对胃癌细胞SGC-7901的生长抑制率;光学显微镜观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测细胞DNA片段化情况;流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的改变、细胞凋亡率以及细胞周期分布。实验结果表明：作用48h时,最佳浓度为110μg／mL,IC50值为104．958μg／mL。DNA电泳可见有梯状条带出现,流式细胞术法显示有凋亡峰出现。莪术油可诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡。     

脑特异性高表达蛋白TMEM59L诱导细胞凋亡的机制

TMEM59L为近年来新发现的脑特异性高表达蛋白,具有促凋亡效果,但其具体的凋亡机制还不清楚.构建了TMEM59L重组质粒,并在HEK293T细胞中过表达TMEM59L,用Annexin V-FITC/PI双染法确定了TMEM59L可以诱导细胞凋亡,之后用免疫印迹方法检测细胞内凋亡相关分子激活情况.结果显示,外源TMEM59L可以降低Bcl-2的蛋白表达水平,诱导细胞色素c从线粒体释放进入细胞质,并且激活caspase-9、caspase-7和caspase-3,但不激活caspase-8;活化的caspase-7和caspase-3进一步酶解死亡底物PARP,导致细胞凋亡;此外,用广谱caspase抑制剂Z-Val-Ala-Asp-FMK(Z-VAD-FMK)抑制caspase-7和caspase-3活性后,死亡底物PARP的酶解也基本被抑制.由此可见,TMEM59L是通过caspase依赖的线粒体途径诱导HEK293T细胞凋亡.