新疆石河子地区非小细胞肺癌EGFR基因突变分析

目的分析新疆石河子地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)基因突变检测情况及其与临床病理特征的关系。方法收集720例确诊为NSCLC患者(包括已行EGFR基因突变检测的239例)的完整病史资料,分析EGFR基因突变情况与病理特征的相关性。结果新疆石河子地区NSCLC患者EGFR突变检测率为38.1%。检出EGFR突变113例(47.3%);女性患者突变率(63.6%)高于男性(35.7%),两者之间差异有统计学意义(P=0.000);腺癌患者突变率(52.7%)明显高于非腺癌患者(12.5%),差异有统计学意义(P=0.000);19Del突变率为41.6%,21L858R突变率为37.2%;NSCLC患者中19Del突变在女性患者中较男性常见(P=0.001),L858R突变男女间差异无统计学意义(P=0.58);腺癌中男性19Del突变率(15.5%)低于女性(29.9%)(P=0.013),L858R突变男女差异无统计学意义(P=0.796)。结论新疆石河子地区NSCLC患者EGFR突变检测率偏低,有待提高;该地区EGFR突变主要见于腺癌,女性患者;突变类型主要为19Del及21L858R,其中女性患者19Del突变比男性多见。     

第一代EGFR-TKI治疗非小细胞肺癌的耐药机制

非小细胞肺癌(NSCLC)是全球肿瘤发病率及死亡人数最高的肿瘤.每年全球被诊断为NSCLC的患者超过100万.在我国肺癌的发病率和死亡率已居恶性肿瘤的首位,其中NSCLC占80%以上.作为治疗NSCLC的药物,表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)给EGFR基因敏感突变的患者带来了巨大的临床获益.随着临床和基础实验研究的逐步深入,EGFR-TKI已经越来越受到关注.晚期非小细胞肺癌治疗已取得了突破性进展,酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的代表药物为厄洛替尼和吉非替尼,这两种药物已在全球范围内得到广泛认可并被大量用于晚期非小细胞肺癌的治疗,尤其是关于EGFR阳性敏感突变者.然而在经过一段时间(一般为7～13个月)的治疗后,大部分患者会对EGFR-TKI产生耐药,其耐药机制主要包括原发性和获得性耐药.EGFR-TKI在改善晚期非小细胞肺癌患者无进展生存期和总生存期方面有着突出作用,因此EGFR-TKI耐药机制的探索已成为研究的热点,本文旨在对第一代EGFR-TKI药物的耐药机制进行综述.     

EGFR抑制剂耐药拮抗策略在非小细胞肺癌治疗中的进展

自噬即细胞自我"消化",不仅与肺癌的发生发展密切相关,还与癌细胞耐药的形成有关.细胞的自噬水平可由表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)等多种信号通路进行调控.靶向治疗药物表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitor,EGFR-TKI)可以有效阻断下游信号通路,并广泛应用于治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC). EGFR-TKI疗效肯定但容易产生耐药,而且还能诱导肿瘤细胞自噬活性.最新研究表明,使用自噬诱导剂或抑制剂调节自噬水平,可延缓EGFR-TKI的耐药性,提高其治疗非小细胞肺癌的效果.     

Cpf1 和 Cas9核酸酶靶向EGFR-L858R突变的研究

表皮生长因子受体(EGFR)单核苷酸突变(2573TG,L858R)占所有EGFR突变的90%.使突变的EGFR失活对有此突变的病人非常有利.这里,应用双荧光报告分析的方法分析规律成簇间隔短回文重复(CRISPR)系统中Cpf1和Cas9在靶向EGFR-L858R突变的编辑效率.在EGFR-L858R突变位点的附近,有两个Cpf1前间区序列邻近基序(PAMs)——TTTN.并且,2573TG突变形成了一个Cas9的PAM——NGG.因此本文通过构建两条AsCpf1的gRNAs(gRNA1和gRNA2)和一条SpCas9的gRNA(gRNA3)在体外通过双荧光蛋白分析系统去评估SpCas9和AsCpf1特异性靶向等位基因的能力.结果证实了AsCpf1和SpCas9都能够特异性的编辑突变的EGFR(2573TG).     

基于TCMSP抗肿瘤中药小分子EGFR-TKI的研究

目的研究分析中药小分子表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)的抗肿瘤情况。方法挖掘中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)中药小分子表皮生长因子受体抑制剂,利用反向分子对接服务器(DRAR-CPI)进行靶点验证。结果木犀草素、槲皮素、金雀异黄酮、表没食子儿茶素没食子酸酯、漆黄素5种中药小分子与表皮生长因子受体(EGFR)结合良好。结论中药小分子EGFR-TKI能从多个靶点、多种途径抑制肿瘤细胞的生长和扩散,利用中药小分子开发新一代多靶点EGFR-TKI具有广阔的前景。     

非小细胞肺癌EGFR-TKIs及其获得性耐药机制的研究进展

EGFR酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)目前已成为具有EGFR敏感突变的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者的首选一线治疗,然而获得性耐药仍然是其临床应用无法回避的瓶颈问题.本文首先回顾了获得性耐药机制,包括EGFR二次突变、MET基因扩增、IGF1R及HER2扩增,随后对EGFR-TKIs耐药后的治疗选择做了相关阐述,包括一代、二代、三代、四代EGFR-TKIs及联合治疗策略.     

治疗NSCLC的EGFR靶向性药物设计与筛选

计算了现有的治疗非小细胞肺癌(NSCLC)常见药物的相关参数,总结了以表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶为靶标的药物分子的药效团特征.在Gefitinib的基础上进行了药物分子的组合化学设计,通过虚拟筛选得到了分子对接得分较高的结构分子,并对其进行了预测和模拟.结果表明:新设计筛选出的2种分子在药代动力学和毒性方面...     

晚期非小细胞肺癌中EGFR基因突变及靶向药物治疗临床分析

目的探讨晚期非小细胞肺癌中EGFR基因突变及靶向药物治疗的临床疗效分析;方法对34例病例采用x TAG液相芯片技术进行基因检测,其中EGFR基因突变11例,其中EGFR E19基因突变6例,EGFR E21基因突变3例,EGFR E20/2基因突变2例,未检测到突变15例,对EGFRE19/21基因突变的9例患者采用吉非替尼250mg/天,口服,持续口服至进展;结果 3例完全缓解,2例部分缓解,1例疾病进展,3例疾病稳定;结论 EGFR基因突变患者应用靶向药物治疗可明显改善生活质量、提高疾病控制率与生存率。     

单克隆抗体靶向治疗大肠癌的研究进展

大肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一.已证实,大肠癌肿瘤细胞生长与血管内皮生长因子（VEGF）和表皮生长因子受体（EGFR）的过度表达均有密切的关系,作为VEGF和EGFR单克隆抗体,贝伐单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗通过阻断VEGF和EGFR的活性,发挥抗肿瘤的作用,为治疗大肠癌开辟了一条新途径.现就近年来单克隆抗体针对大肠癌的治疗作用的研究进展进行综述.     

自噬与肿瘤EGFR抑制剂耐药的研究进展

表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)这种酪氨酸激酶受体在许多类型实体肿瘤的发生及生长过程中起着主要作用,因而针对性地应用EGFR抑制剂已被批准作为多种类型肿瘤的治疗方法.然而,先天性或获得性耐药问题限制了这类药物的疗效.自噬作为细胞内废弃物降解的一种方式,被认为与肿瘤EGFR抑制剂耐药相关. EGFR抑制剂能诱导自噬,然而该作用是双向的.自噬既能减弱EGFR抑制剂的细胞毒性作用而介导肿瘤耐药,也会在过度自噬的情况下促进细胞死亡而逆转肿瘤耐药.因此,调节自噬水平有可能为克服肿瘤患者EGFR抑制剂耐药提供更多思路.     

非小细胞肺癌中转化生长因子βⅠ型受体基因的缺陷表达

转化生长因子β(TGF-β)信号转导通路的紊乱可使细胞逃避TGF-β介导的生长抑制效应,从而导致多种肿瘤的发生.本研究探讨了转化生长因子βⅠ型受体(TGFβRⅠ)在非小细胞肺癌(NSCLC)发生中的作用.采用免疫组化进行TGFβRⅠ基因的表达分析:采用单链构象多态性(SSCP)分析TGFβRⅠ基因结构的变异.结果发现37.2%NSCLC中TGFβRⅠ的表达下降,表明TGFβRⅠ在NSCLC发生中起着重要的作用.同时在TGFβRⅠ基因的第7号内含子中发现了一个单核苷酸多态性(SNP),该SNP与TGFβRⅠ的表达下降无显著关系(P>0.05).     

国产吉西他滨联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的临床观察

目的:观察国产吉西他滨(GEM,泽菲)联合顺铂(PDD)治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效及毒性反应.方法:34例NSCLC患者采用GP方案(GEM 1 000mg/m2,第1、8天静脉滴注,PDD40mg/m2,第8、9天静脉滴注),21d为1周期,全组病例均接受2个或2个周期以上治疗.结果:34例患者共化疗87个周期.总有效率(CR PR)44.1%(15/34).毒副作用以白细胞和血小板下降为常见,但均可耐受.结论:吉西他滨联合顺铂对晚期非小细胞肺癌有较好的疗效,且毒副反应可耐受,值得进一步研究及推广应用.     

僧帽牡蛎EGFR基因的原核表达及其在幼体附着变态过程中的表达特性

扩增僧帽牡蛎(Crassostrea gigas angulata)的表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)基因,并与pET32a(+)载体连接,构建pET32a(+)/EGFR重组质粒.将重组质粒导人大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),成功地表达并纯化了一个50 ku的重组蛋白.采用RT-PCR技术,检测了僧帽牡蛎幼体附着变态前后EGFR基因表达量的变化,结果表明,EGFR基因在附着变态前的浮游幼体阶段和附着变态24 h后的稚贝阶段低表达,附着后1～6 h强烈表达,这预示着EGFR基因在僧帽牡蛎幼体附着变态这一生物学过程中具有重要作用.     

培美曲塞二钠联合铂类二线治疗晚期非小细胞肺癌临床观察

目的：探讨培美曲塞二钠联合铂类方案二线治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效和不良反应.方法：16例既往化疗失败的晚期NSCLC患者接受培美曲塞二钠联合铂类方案化疗,其中培美曲塞二钠500 mg/m^2加入0.9%氯化钠注射液100 ml静脉滴注超过10 min,第1天;顺铂75 mg/m^2或卡铂剂量AUC=5第2天,静脉滴注.每21 d重复,2周期评价疗效.结果：16例患者中,无CR病例,PR 2例,SD 8例,PD 6例,RR12.6%,DCR为62.5%.主要的不良反应是骨髓抑制、消化道反应和口腔粘膜炎,多为I-Ⅱ度,经对症治疗后可以缓解,不影响继续用药.结论：培美曲塞二钠联合铂类方案二线治疗晚期NSCLC安全有效,耐受性好.     

人EGF受体胞外域cDNA克隆及其序列分析

目的：克隆编码人表皮生长因子受体(EGFR)胞外域的cDNA,构建可溶性EGFR(sEGFR)的哺乳动物细胞表达载体。方法：以RT—PCR方法从人胎盘中克隆编码EGFR胞外域的cDNA,测定其序列,构建sEGFR真核表达载体。结果：从人胎盘绒毛组织中成功克隆编码EGFR胞外域的cNDA,通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并添加终止密码,构建了sEGFR的真核表达载体。该基因编码的蛋白质包含信号肽以及L1、S1、12和S2等4个结构域。序列分析表明该基因有3个碱基与以往报道的基因不同,即1562G→A、1620G→C、1887T→A,前两个改变导致氨基酸Arg497Lys和Lys516Asn的改变,后一个为同义突变Thr605。结论：成功克隆编码EGFR胞外域的cDNA,并构建了sEGFR真核表达载体。     

iSEND免疫评分在晚期非小细胞肺癌免疫联合治疗中的临床意义

为研究iSEND 免疫评分与晚期非小细胞肺癌免疫联合治疗预后之间的关系，选择组织病理学诊断为晚期非小细胞肺癌，且接受免疫检查点抑制剂联合治疗的141 例患者作为研究对象. 根据患者性别、ECOG PS评分、基线NLR、DNLR 计算iSEND 免疫评分,按iSEND 免疫评分将患者分为两组，iSEND 免疫评分=0 分为优组，iSEND 免疫评分≥1 分为中/差组，分析iSEND 免疫评分与免疫联合治疗临床预后的相关性. 在141 例入组患者中，iSEND 免疫评分优组60 例，评分中/差组81 例,优组中位PFS 为10.4 个月，中/差组的中位PFS 只有6.0 个月. 按不同治疗方案分组，治疗方案为免疫治疗联合化疗组79 例，免疫治疗联合化疗和抗血管生成治疗组42 例，免疫治疗联合抗血管生成治疗组20 例. 各免疫联合治疗亚组中，评分优组中位PFS 均优于中/差组. 因此，iSEND免疫评分可作为预测晚期非小细胞肺癌免疫联合治疗疗效的指标.     

结肠直肠癌患者个性化治疗

今年早期美国临床肿瘤学会（ASCO）提出了一条作为“暂定临床意见”的声明,即“所有转移性结肠直肠癌患者应进行KRAS基因突变检测”（J. Clin. Oncol., 27[12]：2091-6, 2009）。其他一些类似的说法还有,对于野生型（非突变）KRAS肿瘤检测结果为阳性的结直肠癌患者,限制针对以表皮生长因子受体（EGFR）为靶位的治疗应该是“标准方案”（D．Z．Chang,et al．J.Hemat01．Oncol．,2：18,2009）。     

福建汉族人胰岛素样生长因子受体基因多态性与非小细胞肺癌易感性的研究

目的:探讨胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)基因多态性与福建汉族人非小细胞肺癌(NSCLC)易感性的关系.方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和DNA测序方法检测福建籍汉族NSCLC患者260例和健康人258例的IGF-1R+1013和IGF-2R+1619两个位点的等位基因分布,探讨不同基因型与NSCLC发病的关系.结果:IGF-1R+1013(G/A)基因型和各等位基因的频率在两组中分布有显著性差异(P＜0.05),与GG基因型者相比,GA、AA基因型者NSCLC患病风险均显著增加(P＜ 0.05),未发现IGF-2R+1619 (G/A)位点各基因型和等位基因的频率分布在两组中的差异有统计学意义(P＞0.05).根据病理类型分层分析发现,IGF-1R+1013 (G/A)变异等位基因A携带者(GA+AA)患肺鳞癌、腺癌、其他类型肺癌的风险增加2.20倍、0.55倍、0.96倍(P＜0.05).未发现IGF-1R+1013、IGF-2R+1619两基因多态性与临床分期、淋巴结转移、远处转移有关(P＞0.05).两基因多态性的联合分析显示,同时携带IGF-1R+1013 (G/A)和IGF-2R+1619(G/A)A等位基因者NSCLC的患病风险增加(P=0.003).结论:IGF-1R+1013 (G/A)中,变异等位基因A是肺癌发生的危险因素,IGF-1R+1013 (G/A)和IGF-2R+1619 (G/A)基因多态性对肺癌的易感性有协同作用.     

基于磁分选技术和间接免疫荧光技术的肺癌A549细胞的分离检测

采用磁分选技术及间接免疫荧光技术分离检测肺癌循环肿瘤细胞(CTCs).将表皮生长因子受体(EGFR)抗体连接到四氧化三铁(Fe3O4)磁珠表面构建免疫磁珠(MNPs-Anti-EGFR),通过EGFR抗体和肺癌A549细胞的表面抗原的特异性结合,将免疫磁珠与肺癌细胞结合.通过磁场作用,使肺癌细胞在磁场的作用下从混合细胞中分离富集.分离出的细胞利用间接荧光技术在其细胞表面连接结合PE荧光团的特异性抗体,并用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)对细胞核染色以定位细胞位置.通过倒置荧光显微镜的观察,从而实现对肿瘤细胞的定量计数检测.实验结果显示该方法对肺癌A549细胞具有较好的检测灵敏度和检测下限,检测下限可达3 cells/m L.     

anti-EGFR scFv-FTH1/AP1-FTH1纳米粒子的构建及其治疗哮喘小鼠的应用

采用基因工程方法分别将抗表皮生长因子受体（EGFR）的单链抗体（anti-EGFR scFv）和靶向白介素-4-受体（IL-4R）的AP1短肽分别修饰到铁蛋白重链亚基（FTH1）的N端，再通过蛋白表达、体外混合复性后成功制备了anti-EGFR scFv-FTH1/AP1-FTH1双靶向纳米粒子。结果表明：该纳米粒子能正确组装成铁蛋白的特征笼状结构，粒径为（13.2±1.3）nm。在哮喘小鼠模型中发现该纳米粒子能有效抑制哮喘多种症状，且在缓解气道高反应方面的效果优于单靶向anti-EGFR scFv-FTH1/FTH1纳米粒子。