一株冷凝油污降解菌的分离筛选与初步鉴定及其功能研究

从受到食堂排放的冷凝油污污染的土壤中获取土壤样本,从中分离筛选可以分解利用冷凝油污的细菌菌株.经过富集培养、初筛、复筛、扩大培养、酶活测定和表面活性测定,获得了一株既能产生脂肪酶又能产生生物表面活性剂的细菌菌株(BNUBIODQ).经形态学、部分生理特征及16SrDNA序列分析,将该菌株命名为Pseudomonas aeruginosa BNUBIODQ.该菌株可以产生具有较高表面活性和乳化性能的生物表面活性剂,同时还可产生可诱导的胞外脂肪酶.该菌株在降解冷凝油污和环境保护领域将具有潜在的应用价值.     

脂肪酶产生菌的筛选及基因的克隆表达

目的筛选出脂肪酶活性较高菌株,通过脂肪酶基因克隆技术获得高表达的脂肪酶,根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.方法采用透明圈法,以三丁酸甘油酯为底物筛选脂肪酶活性较高菌株;通过PCR扩增获得其脂肪酶基因Pseudomonas peli(PP)序列,构建pET-28 a表达载体,并在大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中进行异源表达;通过Ni柱将脂肪酶纯化,并根据酶活曲线确定该酶的最适温度和最适pH.结果筛选到一株脂肪酶活性较高的菌株,16S rRNA基因序列比对结果初步鉴定为Pseudomonas peli.PCR扩增得到的基因片段长度为801 bp,其序列与Pseudomonas peli中的脂肪酶基因序列相似性达到100%,PP基因在大肠杆菌中异源表达蛋白的分子量约29 KD,该蛋白在55℃、pH 7.0时活性最高.结论通过基因克隆表达后得到的脂肪酶Ni柱纯化后纯度达95%以上,且耐高温,为脂肪酶工业化应用奠定了基础.     

3株原油降解细菌鉴定及其降解和驱油特性研究

筛选可提高原油采收率的细菌,进而考察其降解、发酵及增油性质。以原油为唯一碳源,采用稀释平板法分离增油菌株;通过观察原油平板上的菌落生长状况、发酵瓶中原油性质变化筛选具有增油潜力的菌株;通过菌落与细胞形态、生理生化特性及16S r DNA序列分析鉴定菌株;利用气相色谱法、柱层析等方法分析菌株对原油化学组成的影响;并采用室内模拟试验研究供试菌株发酵液的驱油效果。结果表明:从分离自原油及油污土壤的17株细菌中筛选出3株有增油潜力的细菌,经鉴定分别为Dietzia cerrcidiphylli(X10)、Micrococcus yunnanensis(X19)及Pseudomonas aeruginosa(X22);3株细菌作用后原油化学成分产生了显著变化,X19对沥青的降解率高达到65.7%,X10对胶质、芳香烃的降解分别达到84.4%、32.15%,烷烃类成分均有不同程度的增加;X22可合成糖脂类表面活性物质;Pseudomonas aeruginosa发酵液在模拟试验中的驱油率较水驱提高了33.5%,且在低渗及非均质模拟介质中驱油效率较高;筛选得到的3株细菌中均有较好的增油潜力,其中Pseudomonas aeruginosa在室内模拟试验中驱油效果较好,适宜于微生物增油技术的研究和应用。     

苯酚降解菌的筛选及降解性能研究

从腐烂的树木枯枝和污染的淤泥中分离出苯酚的高效降解菌.通过对它们的形态和16S rDNA 分析,筛选到的新菌株分别命名为 Acinetobacter sp. SD1, Pseudomonas sp. SD2和 Rhodococcus sp. SD3.在筛选到的3株菌中, Rhodococcus sp. SD3的苯酚降解性能最好,该菌株在72 h 内几乎能将浓度为1.0 g/L 的苯酚完全降解     

一株苯胺蓝降解菌的分离鉴定及其降解特性

从河水中驯化、筛选、分离得到一株对染料苯胺蓝有降解能力的菌株WZR-B,该菌能以苯胺蓝为唯一碳源、能源生长.通过对菌株WZR-B的形态特征、生理生化,以及16Sr DNA序列分析,初步鉴定为铜绿假单孢菌(Pseudomonas aeruginosa).研究苯胺蓝的质量浓度、pH值和温度等因素对该菌株生长,以及对降解苯胺蓝的影响.结果表明,菌株生长和脱色的最适pH值为6.5,最适合温度为30℃,苯胺蓝的最适脱色质量浓度为200 mg·L-1.此外,总有机碳(TOC)残留量测定结果表明,该菌株对苯胺蓝的脱色率可达83%,TOC去除率为80%以上,不仅能对苯胺蓝脱色,而且还能进行矿化降解.     

丁硫克百威降解菌的筛选、鉴定及其降解产物初步分析

为了分离筛选丁硫克百威农药的高效降解菌并对其降解产物进行分析,本研究从石河子大学农学院试验站采集土样15份,采用富集培养的方法筛选丁硫克百威降解菌,通过生理生化和分子生物学试验鉴定降解菌,应用高效液相色谱和质谱法检测分析其降解产物。结果表明:筛选得到1株丁硫克百威降解菌ZJ-11,将该菌株鉴定为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)。此菌株可以在5 d内将浓度为500 mg/L的丁硫克百威降解53.72%。通过质谱分析确定其降解产物主要为克百威。     

一株产天然蓝色素细菌的分离鉴定

为了分离鉴定一株产天然蓝色素的细菌,本文以表面消毒法从牛大力Millettia specisoa Champ植物根中分离可产天然蓝色素的细菌,以通用引物27F/1492R对目标细菌的16SrDNA序列进行PCR扩增、序列对比分析、构建系统发育树,同时对目标细菌进行形态学观察,并采用GEN III MicroStation微生物自动鉴定系统对目标细菌进行Biolog鉴定。序列比对结果表明,目标细菌与Pseudomonas aeruginosa相近,相似率为99%;系统发育树显示,其与菌株Pseudomonas aeruginosa在同一条分支上;形态学鉴定为杆状革兰氏阴性;Biolog鉴定目标细菌为铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa。综合形态学、分子、Biolog鉴定结果,鉴定该细菌为铜绿假单胞菌,命名为2016NX1。     

导入脂肪酶基因提高荧光假单胞菌26-2的产酶效率

采用导入脂肪酶基因的方法对荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescence）26—2的产酶效率进行实验。实验以质粒ppic9k—lipA为模板,通过PCR的方式在26—2脂肪酶基因的两端引入BamHl和EcoR1的酶切位点,并将该基因与大肠杆菌荧光假单胞菌穿梭质粒pDSK 519连接,获得重组质粒pDSK519-lipA,再将重组质粒转入荧光假单胞菌26—2,获得工程菌株P．fluorescence 26—2—1。在相同的发酵条件下,工程菌株的发酵液酶活力比原始菌株的发酵液酶活力提高2倍,实现了荧光假单胞菌脂肪酶基因的同源性表达。     

高产脂肪酶菌株筛选

以实验室所提供的12株酵母菌菌株为试验对象,进行活化和扩大培养,通过初筛及复筛,筛选出高产脂肪酶菌株,并采用酸碱滴定法测定酶活力.经过选择培养基复筛选出6株透明圈较大的菌株,对其测定酶活.结果表明,菌株CC06具有较高的脂肪酶活性,脂肪酶活力为31.67 U/mL.     

一株铜绿假单胞菌的分离鉴定及其对VPAHPND拮抗效果的评价

近年来，急性肝胰腺坏死病(Acute hepatopancreatic necrosis disease, AHPND)造成了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)养殖业巨大的经济损失，其病原为一类含有致病基因PirAB的弧菌(Vibrio),主要为副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP_AHPND).本研究以VP_AHPND为受试菌株，从江苏海域捕获的黄姑鱼(Nibea albiflora)体内分离筛选对VP_AHPND具有抑制作用的拮抗菌株.通过形态学、生理生化及分子生物学方法进行鉴定，研究了其拮抗效果、拮抗活性物质，并对生物安全性和被动保护效果进行评估.结果表明，分离筛选出1株具有良好拮抗效果的菌株JSHY97,经鉴定该菌株为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa).该菌株对3株具有不同分型的VP_AHPND均具有良好的拮抗效果，其抑菌圈直径达19.25 mm～21.80 mm,初步判断其活性物质来源于胞外产物.口服JSHY97的凡纳滨对虾...     

α-亚麻酸特异性脂肪酶产生菌的复合诱变研究

将前期实验中经筛选、紫外诱变获得的α-亚麻酸特异性脂肪酶产生菌为诱变出发菌,通过紫外线、硫酸乙二酯和氯化锂的物理—化学复合诱变处理,经平板筛选和摇瓶发酵及发酵液中脂肪酶活性的测定,分离出具有产生更高活力α-亚麻酸特异性脂肪酶的菌株,测试结果显示,其酶活较单一紫外诱变菌种提高了31%.     

凝结芽胞杆菌产碱性脂肪酶的条件研究

本文对分离获得的产碱性脂肪酶的5株菌进行复筛,对产酶量大的一株菌F12进行鉴定,确定该菌株为凝结芽胞杆菌(BacillusCoagulans)。此菌产碱性脂肪酶的最适条件是:黄豆饼粉2.5,玉米浆1.5,可溶性淀粉0.5,K2HP40.5,NaNO30.5,起始pH9.0,培养温度28～30℃,培养周期22～26h。     

产碱假单胞菌碱性脂肪酶的克隆表达及酶学性质

【目的】为获得可应用于酯类水解及合成的脂肪酶资源,本研究通过筛选分离得到能够水解长链脂肪酸酯的脂肪酶产生菌,克隆表达其脂肪酶基因并研究脂肪酶的酶学性质。【方法】从环境中筛选分离出可水解三硬脂酸甘油酯的菌株,利用16SrDNA对其进行分子鉴定,并扩增其脂肪酶基因和脂肪酶分子伴侣基因。以pET-22b(+)为表达载体,构建共表达重组质粒,转化Escherichia coli BL21(DE3)进行异源表达,并对重组酶进行酶学性质研究。【结果】经16SrDNA鉴定该菌株为产碱假单胞菌Pseudomonas alcaligenes。通过PCR成功克隆到该菌的脂肪酶基因(lipPA-9A)和脂肪酶分子伴侣基因(lipPA-9B),并构建共表达重组质粒pET22b-lipPA-9A-9B,实现脂肪酶LIP-9A的活性表达。酶学性质研究表明LIP-9A的最适反应温度为35℃,最适反应pH值为10.5,最适反应底物为对硝基苯酚辛酸酯(pNPO);同时,LIP-9A还可以催化醇和羧酸发生酯化反应产生酯类物质。【结论】LIP-9A在碱性条件下具有较高活力,且可以催化酯化反应,在洗涤行业和酯合成领域具有一定的应用价值。     

Burkholderia cepacia XYU-6脂肪酶的克隆及其细胞表面展示

通过分析GenBank中Burkholderia cepacia脂肪酶的序列,设计简并引物,采用同源克隆的策略,成功地从B. cepacia XYU-6菌株中克隆到脂肪酶基因bcl,其大小为1095 bp,编码364个氨基酸（ GenBank登陆号KR233260）.将bcl基因与质粒pET-28b（＋）连接并转化大肠杆菌,使脂肪酶BCL的大肠杆菌胞内过表达,其活力是野生菌的12.9倍.通过将bcl基因克隆到细胞表面展示载体pZXL中,构建脂肪酶BCL的细胞表面展示工程菌,使BCL在Lpp-OmpA引导下定位于大肠杆菌细胞表面,其活力是野生菌的3.9倍.研究结果为脂肪酶BCL后续的分子改造和应用奠定基础.     

产脂肪酸菌种的筛选及部分酶学性质

从含油污泥中筛选出一株产脂肪酶活力较高的微球菌,此菌最适产酶条件：2％的蛋白胨为氮源,1％的橄榄油为碳源,pH8.0,28℃培养48h．酶学性质研究发现,在28℃和45℃脂肪酶有较高催化活力,其中28℃活力更高些,最佳反应pH为8．0,pH稳定范围在6．0～10．0之间,Ca2 和K 对酶有激活作用,Fe2 ,Cu2 和Mn2 等对酶有抑制作用．     

低温脂肪酶产生菌筛选与鉴定、产酶条件及酶学性质研究

 昆明东站一家屠宰厂冷库中筛选到14株产脂肪酶低温菌株.选取1株胞外低温脂肪酶高产菌,进行显微形态及生理生化特征、16S rRNA基因序列分析,将其初步鉴定为Yersinia enterocolitica的一株菌,命名为KM1.对该菌发酵产酶条件研究,发现其最佳产酶发酵条件为:培养温度13℃,pH7.2,摇瓶培养时间54h.在最佳产酶发酵条件下酶活由1.8U/mL提高到3.1U/mL,提高了72%.对该菌脂肪酶的酶学性质研究表明:在0℃时仍具有最高酶活的20%,最适反应温度37℃,最适反应pH为9.0.在25℃以下,pH7.2～10范围内均能保持良好的稳定性.该酶在有机溶剂中较稳定,即使在50%的甲醇中仍能保持60%以上的活性,该酶的最适底物为C₈的酯化物,且对C₄～C₁₂的酯化物均有较好的催化能力.     

碱性脂肪酶水解纸浆中的甘油三酸酯的研究

讨论了用龙马牌碱性脂肪酶处理以马尾松为主要原料的磨木浆（ＧＰ）树脂中所含ＴＧ的水解情况,用水解后生成的脂肪酸的量的大小,水解后纸浆滤液中分散树脂的状态和纸浆滤液的粘度变化趋势来评价纸浆中ＴＧ的水解程度,研究结果表明,在一定条件下,纸浆滤液中脂肪酸的量随脂肪酶用量的增加及反应时间的延长而增大,纸浆酶解后的滤液中树脂液滴由大变小,数量由多变少,纸浆中的ＴＧ水解后产生的脂肪酸和甘油对纸浆的粘度几乎没有佬     

产脂肪酶菌株的筛选、鉴定与产酶条件优化

以橄榄油为唯一碳源,采用平板变色圈法,从土壤中筛选到1株脂肪酶高产菌XYU-6,经生理生化试验鉴定及16S rDNA序列分析,XYU-6被鉴定为洋葱假单胞菌(Burkholderia cepacia).设计单因素试验,对其产酶条件进行优化,优化后的培养条件为:葡萄糖1.00;,蛋白胨2.00;,豆油1.00;,KH2 PO40.35;,K2 HPO4 0.15;,MgSO40.05;,初始pH值为7.0,培养温度30℃,培养48 h,酶活可达24.1U·mL-1,是优化前的1.65倍.     

对成都地区10株黏细菌菌株酶活性的初步研究

为了从黏细菌中分离各种酶类,通过各种选择培养基对成都地区10株黏细菌菌株的酶活性进行了检测.研究发现,菌株CX-1为高产纤维素酶菌株、菌株CL-7为高产淀粉酶菌株、菌株CC-1为高产蛋白酶菌株、菌株CL-1为高产壳聚糖酶及脂肪酸氧化分解酶类菌株、菌株CL-5为高产脂肪酶菌株.本研究为下一步从这些黏细菌中提取特定的酶类提供了实验依据.