怀牛膝毛状根诱导及培养体系的建立

以牛膝叶片为外植体,研究了不同发根农杆菌、培养基、乙酰丁香酮(AS)对毛状根诱导率及其生长的影响.结果表明,发根农杆菌不同菌种对牛膝叶片转化率有显著影响,3个供试菌种中ATCC15834菌株诱导率最高;在1/2MS无激素固体培养基上毛状根的诱导率及生长状况均优于MS培养基;100μmol·L-1 AS可以有效提高毛状根诱导率.毛状根从叶片形态学下端中脉切口处形成的愈伤组织上产生,能在无外源激素的培养基上自主生长.PCR扩增结果显示发根农杆菌Ri质粒的rolB基因已在牛膝毛状根基因组中插入、整合并得到表达.建立了牛膝毛状根诱导培养体系,为利用毛状根大规模生产药用成分奠定了基础.     

地黄毛状根的培养研究

发根农杆菌是一种革兰氏阴性菌,能侵染大多数的双子叶植物,诱发被感染植物的受伤部位长出毛状根.本实验用发根农杆菌感染地黄外植体诱导其产生毛状根,并加以培养,为今后选择合适的培养方式,大规模培养毛状根来生产地黄的次生物质奠定基础.     

盾叶薯蓣毛状根的诱导与薯蓣皂甙元的生产

报道盾叶薯蓣形成毛状根诱导的方法及不同毛状根系间生长速率与薯蓣皂甙元含量的差异．结果表明,盾叶薯蓣的幼叶和茎段难被R1601、A4和LBA9402等发根农杆菌菌株诱导出毛状根,但愈伤组织则比较容易;34%的被R1601菌株感染、并在添加200μmol／L乙酰丁香酮的共培养基上培养3d的愈伤可以在30d内形成毛状根;不同的毛状根系在生长速率与薯蓣皂甙元含量方面存在显著差异．     

发根农杆菌介导云南萝芙木的遗传转化

用发根农杆菌A4分别感染云南萝芙木幼嫩的真叶和茎段,诱导出毛状根,并对毛状根进行了离体培养, PCR检测转基因毛状根和HPLC检测毛状根中利血平的含量．结果表明:这两种外植体的转化频率及诱导出的毛状根差异极大,幼嫩的真叶叶片比茎段更适合作转化外植体用．PCR检测结果表明,诱导毛状根的基因rolB和 rolC整合到云南萝芙木基因组中,HPLC含量检测表明毛状根中利血平的含量比自然根中利血平的含量有显著的增加,因此可以作为利血平来源生产的有效途径之一．     

两株紫色红曲菌根癌农杆菌介导的T-DNA转化子的生物学特性

从根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的紫色红曲菌(Monascus purpureus)菌株S的转化子库中筛选出2株产红曲色素性能变化显著且遗传稳定的转化子S62和S158,分别对其菌落形态、显微结构、菌落生长速度、遗传稳定性、潮霉素抗性及其产色素和桔霉素的能力等进行了分析.结果表明,2株转化子的生物学特性均发生了显著变化,且发酵后红曲色素的色价和桔霉素的产量降低.其中:转化子S62液态发酵后色价为2.71 U/mL,仅为原始菌株S色价的0.04倍;转化子S158发酵后色价为17.62 U/mL.     

龙胆毛状根的诱导培养

发根农杆菌（Ａ．ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）Ｒ１５００感染龙胆茎段、叶片外植体，１５ｄ后可诱导出毛状根。茎段诱导率高于叶片，可达４２．３％。毛状根的诱导与温度和光照有关。转化根具有抗卡那霉素的特征，在不含激素的ＭＳ培养基上培养，筛选出了生长正常的毛状根系。     

应用毛状根转化技术获得植物次生代谢产物的研究 Ⅰ.萝芙木毛状根的诱导与培养

将萝芙木(Rauvolfia verticillata)的无菌苗被含有Ri-质粒的发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)感染后,诱导出毛状根(hairy root)。将毛状根分离,除菌后,在不含激素的MS琼脂培养基上培养。为进一步研究萝芙木毛状根的遗传表达以及次生代谢产物的定性定量分析奠定了基础。     

丹参毛状根诱导条件的优化

以发根农杆菌C58C1，A4，R1601为试验菌株，叶片、叶柄、茎段为外植体，研究了菌液浓度、共培养时间和乙酰丁香酮（AS）等因素对丹参毛状根转化频率的影响，并用PCR对诱导出的毛状根进行了阳性鉴定．试验结果表明：菌株和外植体类型对丹参毛状根诱导率存在着显著的差异；最佳共培养时间为3—4d，乙酰丁香酮（AS）浓度为400μmol／L有利于促进毛状根的产生．为进一步利用基因工程技术进行中药丹参的品质改良奠定了基础．     

根癌农杆菌法转化烟草的条件探索

 利用含有四环素阻遏蛋白,具有卡娜霉素抗性的烟草种子为实验材料,采用根癌农杆菌介导转化中的叶圆盘法,将外源基因导入烟草愈伤组织,建成可诱导表达细胞质和细胞核CaM/CaM结合多肽的转基因烟草体系.在获得转基因植物的过程中,通过比较影响根癌农杆菌转化频率的各种因素,表明植物材料的选择和培养,农杆菌的培养和稀释,植物材料与农杆菌共培养的程度及转基因植株的筛选条件是影响农杆菌转化效率的重要因素.     

长春花转化毛状根诱导及培养条件的优化

用A4和R10002种发根农杆菌菌株分别感染长春花的愈伤组织、真叶叶片、叶柄及根，诱导出毛状根。研究了不同外植体、不同菌株以及外植体预培养时间、与发根农杆菌共培养时间、乙酰丁香酮（As)等条件对转化频率的影响，其结果为：A4转化频率高于R1000，真叶叶片转化频率最高，最佳预培养时间为2-3d；最佳共培养时间2－3d；以100mg/mL的As同时加入共培养基中转化频率高达86．25％。不同种类的培养基以及碳源、氮源对毛状根生长也有较大的影响。     

发根农杆菌A4对荞麦的遗传转化

用发根农杆菌Ａ４对荞麦的下胚轴和子叶进行离体转化,得到ＲｉＴ－ＤＮＡ表达的发状根。不同的培养环境对发状根的和生长有一定的影响,表现为发状根在液体培养基上比在固体培养基上生长更为迅速,且在培养基中含一定浓度的Ｃｕ＾２＋有助于发状根的形成。     

银杏毛状根的诱导和培养

利用３个发根农杆菌菌株：Ｒ１５８３４,Ｒ１０００和Ａ４分别对银杏幼叶、幼芽和幼茎外植体进行成功的转化：除Ａ４外,均诱导获得了毛状根。通过对毛状根中冠瘿碱的检测,农杆菌Ｒｉ质粒的Ｔ－ＤＮＡ部分已整合到银杏细胞的基因组中。     

转乙肝病毒表面抗原基因烟草发根的获得

构建了乙肝病毒表面抗原基因（HBsAg）植物表达载体,通过冻融法将HBsAg 基因转入到发根农杆菌LBA1314中,采用叶盘法将HBsAg基因导入到烟草中,获得了转基因烟草发根.对转基因烟草发根的GUS检测结果表明：转HBsAg基因烟草发根可以染成蓝色,而非转基因烟草的根没有染色反应.这说明gus基因在转HBsAg基因烟草发根获得了表达.     

甘薯毛状根植株再生研究

用发根农杆菌Ｒ１０００菌株感梁甘薯（渝薯３４品种）,获得转化毛状根,从毛状根中选择出了５个无性系,当毛状根培养在含有２ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋１ｍｏｌ／Ｌ玉米素的ＭＳ培养基上诱导出了愈伤组织,当愈伤组织培养在含有１ｍｇ／ＬＫＴ＋１ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０．５ｍｇ／ＬＩＡＡ的培养基上,３周以后获得了再生植株,用随机及增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分子标记检测出了再生植株的多态笥。     

发根农杆菌A4转化黄瓜获得发状根再生植株

研究以黄瓜栽培品种津研四号为试材,比较了培养基中添激素对自然生根及发状根诱导的影响。无菌苗子叶及下胚轴经发根农杆菌Ａ４侵染后２周诱导出发状根,发状根在无激素的ＭＳ筛选培养基上能够自主生长,在附加ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的筛选分化培养基上分化出不定芽,ＧＵＳ染色表明转化植株呈阳性反应。     

发根农杆菌A4对骆驼刺的遗传转化

用野生型发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）Ａ４菌株感染骆驼刺（Ａｌｈａｇｉ ｐｓｅｕｄｏａｌｈａｇｉ）无菌苗的子叶和下胚轴,１５ｄ左右在感染部位诱导出发根。将发根切段放在附加２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ和０．５ｍｇ／Ｌ６ＢＡ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织,在３．０ｍｇ／Ｌ６ＢＡ的ＭＳ培养基上进一步分化形成完整植株,冠瘿碱检测结果表明,不仅在初生发根中,在次生发根、来源于发率的愈