Eph受体家族和Ephrin-A5在NSCLCs中上调表达及其临床意义(英)

采用荧光实时定量PCR的方法在48个非小细胞肺癌组织以及配对的正常肺组织中检测Eph/ephrin 基因的mRNA水平.发现肺癌组织中EphB4, EphB3 和 ephrin-A5的表达水平与配对的正常肺组织相比分别上调了60%，81%和65%,并具有显著的统计学差异. 而且，统计学分析发现ephrin-A5的表达水平与肿瘤分型、转移、性别、吸烟以及诊断年龄等临床病理学参数之间存在显著的相关性.此外，EphA2的表达水平与肿瘤大小、家族遗传史以及诊断年龄之间也存在显著的相关性.总之，这些结果提示EphB4, EphA2, EphB3 和ephrin-A5 在肺癌的发生和发展过程中可能以一种单独或者协同的形式发挥作用.这些蛋白有可能成为研究和诊断肺癌的重要靶向基因.     

EphB1在结直肠癌中的差异表达及其临床病理学意义

通过检测结肠癌细胞系和结直肠癌组织中EphB1表达及其与临床病理特征之间的关系和启动子区域CpG岛的甲基化情况,探讨EphB1在结直肠癌中的作用及其机制,为结直肠癌的基因治疗寻找新的靶基因.取5株结肠癌细胞系和61例配对液氮冻存及对应石蜡包埋组织,运用实时定量RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测EphB1 mRNA和蛋白质表达;同时对mRNA表达下调标本进行启动子区域CpG岛甲基化检测.结果显示,5株结肠癌细胞系中EphB1 mRNA均有表达,并且表达存在差异;61例结直肠癌组织与癌旁正常黏膜相比,EphB1 mRNA和蛋白质表达均存在差异.EphB1 mRNA在31.1%(19/61)的癌组织中下调,52.5%(32/61)上调,EphB1 mRNA低表达和组织分化差异有统计学意义(P=0.008).EphB1蛋白在正常肠黏膜和部分肿瘤细胞中呈阳性表达,下调表达62.3%(38/61),上调表达24.6%(15/61);EphB1蛋白的低表达和组织分化(P=0.033)、浸润深度(P=0.038)、性别(P=0.028)以及部位(P=0.039)间差异都有统计学意义.甲基化特异性PCR检测发现EphB1m...     

SPATA12基因在多种肿瘤中的组织芯片表达谱分析

为了检测生精相关基因SPATA12在多种肿瘤组织中的表达及其与临床病理特征的关系,采用数字虚拟Northern方法分析SPATA12在41种正常组织及其相应肿瘤组织中的表达丰度;利用组织芯片技术结合原位杂交的方法,对96例多器官肿瘤组织芯片和208例肺肿瘤组织芯片样本中SPATA12基因的表达情况进行检测.虚拟Northern结果显示,SPATA12主要表达于正常睾丸组织以及少部分肺癌组织中.组织芯片原位杂交结果显示,SPATA12在多种肿瘤组织中表达频率不一,主要在皮肤恶性黑色素瘤、前列腺癌及前列腺慢性炎症组织、胃癌、结肠癌、甲状腺乳头状癌等肿瘤组织中高表达;在肺肿瘤组织中,SPATA12主要表达于非小细胞肺癌,其中在腺癌、鳞癌、类癌和大细胞癌组织的阳性表达率分别为16.13%,29.17%,30%和100%.SPATA12的阳性表达率与肺癌不同病理类型相关(P<0.01),而与年龄、性别以及临床分级无关(P>0.05).SPATA12基因具有肿瘤-睾丸抗原的组织表达谱特点,其阳性表达与肺肿瘤组织的不同病理类型存在明显的相关性,对肺肿瘤的分子分型有一定的参考价值.     

C-met和COX-2在非小细胞肺癌中的表达与临床意义

目的探讨非小细胞肺癌中C-met和COX-2表达及其临床意义。方法收集2010年1月至2012年6月存档的NSCLC石蜡标本60例肺癌组织和20例相对应癌旁正常肺组织。采用免疫组化方法分别检测肺癌组织及癌旁正常肺组织中C-met和COX-2的表达情况。结果 C-met和COX-2在NSCLC中的表达显著高于癌旁正常组织;C-met和COX-2在NSCLC中的过表达和病理类型、有无淋巴结结转移以及TNM分期有密切相关性;C-met还与病理分级相关;C-met和COX-2两者在NSCLC中的表达呈正相关性。结论 C-met和COX-2可能在NSCLC的发生、发展过程中起了重要的作用,C-met和COX-2可能成为肺癌早期诊断、预后评估的生物标志物。两者的显著相关性提示C-met和COX-2两者在NSCLC的发生、发展中存在相互作用,为探讨非小细胞肺癌发病机制以及探寻非小细胞肺癌治疗新途径提供实验依据。     

KIF4A mRNA在肺癌组织中表达水平的研究

收集肺癌组织标本和正常肺组织标本,提取组织中的RNA,通过反转录PCR合成cDNA,进行实时定量PCR测定.结果表明:31例肺癌组织中有29例KIF4A mRNA的表达量高于正常组织,其中26例(83.87%)比正常组织高2倍以上,10例(32.30%)比正常组织高4倍以上;KIF4A mRNA的表达量与肿瘤淋巴结转移(TNM)分期的相关性具有统计学意义(F=0.565,P=0.029).由于肺癌组织中KIF4A mRNA的表达量升高与肿瘤的分期分型相关,因此可以作为判断肺癌分期及预后的新分子标志物,对于评估肺癌的发生与发展也可能具有重要意义.     

应用基因表达谱芯片研究人肺鳞癌相关基因

应用基因表达谱芯片检测人肺鳞癌与正常肺组织间差异表达基因,并对其进行初步分析。提取5例人肺鳞组织及其癌旁正常肺组织的RNA,混合后分别逆转录合成标记有荧光分子的cDNA探针,与联合基因BiostarH-1×1型基因芯片杂交。计算机分析扫描芯片荧光信号图像,比较两种组织中差异表达基因,对筛选的肿瘤相关基因进行初步分析。结果:两种组织间存在大量差异表达基因,其中113条基因在肺癌组织中较正常肺组织表达上调,112条基因在肺癌组织中较正常肺组织表达下调。分析这些差异表达基因发现,肺鳞组织及其癌旁正常肺组织的基因表达谱差异主要集中在原癌基因和抑癌基因、免疫相关基因、代谢相关基因、蛋白翻译合成相关基因、细胞信号和传递蛋白、细胞凋亡相关基因等方面;而在细胞周期蛋白、细胞骨架和运动、细胞受体、DNA合成和修复及结合和转录等方面则关联甚少。说明基因芯片在筛选疾病相关基因的改变时,具有快速、高效、高灵敏度等特点,人肺鳞癌基因差异表达谱的分析为阐明肺癌的发病分子机制提供了新线索。     

Pokemon在人贲门癌中的表达及其意义(英文)

Pokemon基因是一种转录抑制因子,它在癌症发生发展过程中起重要作用.目前已发现Pokemon在人淋巴瘤、乳胶癌、肺癌、结肠癌、前列癌以及膀胱癌中高表达.但是在贲门癌中表达水平未见报道.本研究采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和实时定量多聚酶链反应(real-timePCR)方法检测了56例贲门癌(EGJ)和10例正常人贲门组织标本的Pokemon基因mRNA表达水平.结果显示所有组织标本均表达Pokemon.但是肿瘤组织及其配对的远离肿瘤的瘤旁组织Pokemon基因的mRNA表达水平显著高于正常人的贲门组织(P=0.0002,P=0.0069).结果显示Pokemon基因可能对贲门癌的发生发展及致癌性转化有重要作用.     

FOXP3在人肺腺癌细胞中的表达意义

目的通过检测FOXP3在人肺腺癌细胞中的表达情况,探讨FOXP3在人肺腺癌发生、发展中的作用机制.方法收集临床肺腺癌患者术后石蜡包埋标本42例和正常肺组织10例,采用免疫组化SP法检测FOXP3蛋白的表达水平,分析其在肺癌细胞组与正常支气管黏膜组表达的差异,以及其在肺癌细胞的表达与临床病理指标的内在联系.结果 FOXP3在人肺腺癌细胞高表达,阳性率为64.3%;在正常肺组织低表达,阳性率为20.0%,两组比较差异具有统计学意义(P=0.011).FOXP3蛋白表达与有无淋巴结转移显著相关,有淋巴结转移组FOXP3的阳性表达率为83.3%,无淋巴结转移组FOXP3的阳性表达率为50.0%,两组比较差异具有统计学意义(P=0.026).FOXP3蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤的大小和分化程度均无明显相关性(P0.05).结论FOXP3参与人肺腺癌的发生、发展,可作为评判肺腺癌恶性生物学行为的指标之一.     

突变型P53和肿瘤易感基因101在肺癌组织中的表达及意义

探讨了P53基因突变对肺癌组织中TSG101基因的影响,结果是:TSG101在正常组织中呈强阳性表达100%(30/30),在高分化肺癌(包括肺鳞癌和肺腺癌)组织、低分化肺癌组织、淋巴结转移组织的表达分别为77.97%(92/118)、25.37%(17/67)、18.95%(18/95);P53的表达则相反,在正常组织、高分化肺癌组织、低分化肺癌组织、淋巴结转移组织的表达分别为6.67%(2/30)、67.80%(80/118)、86.57%(58/67)、94.63%(90/95);P53基因PCR-SSCP分析谱检测P53第5~8外显子阴性56例占30.27%,阳性129例占69.73%,总突变率为69.73%(127/180);P53与TSG101呈现负相关.这些结果提示P53和TSG101可能共同参与了肺癌的发生、发展和转移.     

肺癌患者血清P53抗体及肺癌组织P53表达对肺癌诊断价值的研究

目的探讨肺癌患者血清P53抗体水平及肺癌组织P53表达对肺癌诊断的价值.方法采用ELISA法检测肺癌患者血清P53抗体水平,并采用免疫组化法检测肺癌组织P53表达情况.结果肺癌患者血清P53抗体（17.84±8.73）ng/L水平比正常对照组（5.43±1.90）ng/L显著升高（P〈0.001）,肺癌患者血清P53抗体水平与肿瘤大小、淋巴转移、远端转移、TNM分期有关.肺癌患者癌组织P53表达的阳性率为61.5%（168/273）,肺癌患者癌组织P53阳性表达率与肿瘤大小、淋巴转移、远端转移、TNM分期、分化程度、病理类型有关.结论血清P53抗体水平与癌组织中的表达有着良好的平行关系,测定血清P53抗体水平或检查肺癌患者癌组织P53的表达可对肺癌的诊断、分期、治疗和预后提供重要依据.     

Ephrin signalling controls brain size by regulating apoptosis of neural progenitors

Mechanisms controlling brain size include the regulation of neural progenitor cell proliferation, differentiation, survival and migration. Here we show that ephrin-A/EphA receptor signalling plays a key role in controlling the size of the mouse cerebral cortex by regulating cortical progenitor cell apoptosis. In vivo gain of EphA receptor function, achieved through ectopic expression of ephrin-A5 in early cortical progenitors expressing EphA7, caused a transient wave of neural progenitor cell apoptosis, resulting in premature depletion of progenitors and a subsequent dramatic decrease in cortical size. In vitro treatment with soluble ephrin-A ligands similarly induced the rapid death of cultured dissociated cortical progenitors in a caspase-3-dependent manner, thereby confirming a direct effect of ephrin/Eph signalling on apoptotic cascades. Conversely, in vivo loss of EphA function, achieved through EphA7 gene disruption, caused a reduction in apoptosis occurring normally in forebrain neural progenitors, resulting in an increase in cortical size and, in extreme cases, exencephalic forebrain overgrowth. Together, these results identify ephrin/Eph signalling as a physiological trigger for apoptosis that can alter brain size and shape by regulating the number of neural progenitors.     

Neuropsin cleaves EphB2 in the amygdala to control anxiety

A minority of individuals experiencing traumatic events develop anxiety disorders. The reason for the lack of correspondence between the prevalence of exposure to psychological trauma and the development of anxiety is unknown. Extracellular proteolysis contributes to fear-associated responses by facilitating neuronal plasticity at the neuron-matrix interface. Here we show in mice that the serine protease neuropsin is critical for stress-related plasticity in the amygdala by regulating the dynamics of the EphB2-NMDA-receptor interaction, the expression of Fkbp5 and anxiety-like behaviour. Stress results in neuropsin-dependent cleavage of EphB2 in the amygdala causing dissociation of EphB2 from the NR1 subunit of the NMDA receptor and promoting membrane turnover of EphB2 receptors. Dynamic EphB2-NR1 interaction enhances NMDA receptor current, induces Fkbp5 gene expression and enhances behavioural signatures of anxiety. On stress, neuropsin-deficient mice do not show EphB2 cleavage and its dissociation from NR1 resulting in a static EphB2-NR1 interaction, attenuated induction of the Fkbp5 gene and low anxiety. The behavioural response to stress can be restored by intra-amygdala injection of neuropsin into neuropsin-deficient mice and disrupted by the injection of either anti-EphB2 antibodies or silencing the Fkbp5 gene in the amygdala of wild-type mice. Our findings establish a novel neuronal pathway linking stress-induced proteolysis of EphB2 in the amygdala to anxiety.     

Regulation of repulsion versus adhesion by different splice forms of an Eph receptor

Eph tyrosine kinase receptors and their membrane-bound ephrin ligands mediate cell interactions and participate in several developmental processes. Ligand binding to an Eph receptor results in tyrosine phosphorylation of the kinase domain, and repulsion of axonal growth cones and migrating cells. Here we report that a subpopulation of ephrin-A5 null mice display neural tube defects resembling anencephaly in man. This is caused by the failure of the neural folds to fuse in the dorsal midline, suggesting that ephrin-A5, in addition to its involvement in cell repulsion, can participate in cell adhesion. During neurulation, ephrin-A5 is co-expressed with its cognate receptor EphA7 in cells at the edges of the dorsal neural folds. Three different EphA7 splice variants, a full-length form and two truncated versions lacking kinase domains, are expressed in the neural folds. Co-expression of an endogenously expressed truncated form of EphA7 suppresses tyrosine phosphorylation of the full-length EphA7 receptor and shifts the cellular response from repulsion to adhesion in vitro. We conclude that alternative usage of different splice forms of a tyrosine kinase receptor can mediate cellular adhesion or repulsion during embryonic development.     

Reversing EphB2 depletion rescues cognitive functions in Alzheimer model

Amyloid-β oligomers may cause cognitive deficits in Alzheimer's disease by impairing neuronal NMDA-type glutamate receptors, whose function is regulated by the receptor tyrosine kinase EphB2. Here we show that amyloid-β oligomers bind to the fibronectin repeats domain of EphB2 and trigger EphB2 degradation in the proteasome. To determine the pathogenic importance of EphB2 depletions in Alzheimer's disease and related models, we used lentiviral constructs to reduce or increase neuronal expression of EphB2 in memory centres of the mouse brain. In nontransgenic mice, knockdown of EphB2 mediated by short hairpin RNA reduced NMDA receptor currents and impaired long-term potentiation in the dentate gyrus, which are important for memory formation. Increasing EphB2 expression in the dentate gyrus of human amyloid precursor protein transgenic mice reversed deficits in NMDA receptor-dependent long-term potentiation and memory impairments. Thus, depletion of EphB2 is critical in amyloid-β-induced neuronal dysfunction. Increasing EphB2 levels or function could be beneficial in Alzheimer's disease.     

肺癌组织中P~(53)和ras-P~(21)癌基因蛋白的免疫组织化学研究

目的：为探讨肺癌组织中P53和P21癌基因蛋白的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化方法（S－P法）检测69例肺癌组织标本中P53和P21癌基因蛋白表达,结果采用卡方检验。结果：P53和P21在肺癌组织中的阳性表达率分别为49.3％、68．1％;肺癌癌旁支气管粘膜和腺体中的阳性表达率分别为0和17.6％,与肿瘤区相比较差异均非常显著（P＜0．01）。P53蛋白表达与肺癌病人术后生存期有一定关系,P53阳性率越高,其存活期越短。P21蛋白表达肺腺癌高于肺鳞癌（P＞0．05）。P53和P21蛋白表达与肺癌病人性别、年龄、肿瘤分期和分化程度无关。结论：肺癌患者术后预后不良与P53蛋白积累有关,P53蛋白蓄积是判定肺癌预后的指标之一,ras基因突变是肺癌发生的早期事件,与肺腺癌发生更有密切关系。     

应用RT-nPCR检测石蜡包埋甲状腺癌中PTC癌基因的表达

为探讨ret原癌基因活化形式—PTC癌基因在甲状腺癌发病机制中的作用和判断其生物学行为,运用RT-nPCR技术检测16例甲状腺乳头状癌、4例滤泡癌、2例未分化癌、1例髓样癌PTC癌基因mRNA的表达,结果表明:16例甲状腺乳头状癌中有7例(43％)PTC基因表达为阳性,甲状腺滤泡癌、髓样癌及未分化癌均为阴性。在甲状腺乳头状癌中,PTC表达阳性组多伴有淋巴细胞浸润(57％),高于阴性组病侧(11％)(P<0.05),而与患者发病年龄、肿瘤大小及淋巴结转移无显著相关性。因此,我们认为ret原癌基因的活化与甲状腺乳头状癌的发生有关,其活化形式—PTC癌基因的表达仅限于乳头状癌,可作为甲状腺乳头状癌的诊断和鉴别诊断的有效参考指标。     

Cyclin B1、CDK1在肺癌中过表达及其意义

摘要：采用免疫组化ABC法检测12例肺癌组织、11例癌旁组织及3例正常肺组织中cyclin B1、CDK1蛋白的表达情况，以探讨细胞周期蛋白eyelin B1及细胞周期蛋白依赖性激酶CDK1在不同肺癌组织中的异常表达及其临床意义。结果显示cyclin B1在正常肺组织、癌旁组织、癌组织中阳性率分别为0％、9．1％和50．0％，CDK1的阳性率则为0％、18.2％和75.0％，cyclin B1、CDK1在小细胞肺癌和鳞癌中存在广泛的过表达，而在大细胞肺癌中没有表达，并且在不同肿瘤亚型中表达也有差异性．