骨髓间充质干细胞对损伤卵巢的修复作用

目的:探讨骨髓间充质干细胞移植对损伤卵巢的修复作用。方法:通过贴壁筛选法培养、纯化GFP转基因小鼠MSCs。将健康的雌性ICR小鼠(6 w)随机分为4组:正常对照组(A组,n=6)、MSCs移植组(B组,n=6)、MSCs治疗组(C组,n=6)、损伤组(D组,n=6)。B组腹腔移植MSCs,C、D组小鼠卵巢在无菌条件下,用体积分数为10%H2O2损伤卵巢建立损伤模型,24 h后C组腹腔移植MSCs,D组注射等体积的PBS。各组每周取卵巢,采用外观拍照、PCR检测GFP基因和病理切片观察MSCs是否对损伤卵巢有修复作用。结果:PCR结果表明MSCs经腹腔移植可到达正常卵巢,也可到达受损伤卵巢;C组移植MSCs后小鼠卵巢恢复的比D组快。结论:MSCs通过腹腔移植可到达卵巢,并可促进损伤卵巢的修复。     

小鼠高脂血症性脂肪肝的动态研究

目的:建立小鼠高脂血症及脂肪肝模型,观察高脂血症性脂肪肝程度和时间的动态关系.方法:采用昆明种小鼠60只,随机分为对照组(n1=30),高脂组(n2=30),对照组喂普通饲料,高脂组喂高脂饲料,分别检测2～4周小鼠血清TG、TC、HDL-C、LDL-C、和肝组织TG、TC含量变化;并观察肝指数,根据肝脏病理切片HE染色和冰冻切片苏丹Ⅲ染色分析肝脏脂变情况.结果:在喂高脂饲料2周后,小鼠血清TC、HDL-C、LDL-C、TC/HDL-c出现明显升高,肝脏TG、TC含量也显著高于对照组,随后的3～4周血脂及肝脂水平保持稳定上升;肝指数持续增大,有肝细胞脂肪变性,肝脏组织细胞脂变程度随喂高脂饲料时间的延长逐渐加重.结论:高脂饲料喂养的小鼠4周内可形成不同脂变程度的脂肪肝,为抗脂肪肝药物的研究提供了实验依据.     

D-半乳糖肝脏损伤动物模型的建立及其检测

目的探讨应用D-半乳糖(D-gal)建立小鼠肝脏损伤模型的方法.方法将20只小鼠随机分为两组,正常对照组应用生理盐水20 m L/(κg·d-1)皮下注射,模型组应用D-半乳糖按500 mg/(κg·d-1)皮下注射.造模完成后采用比色法测定血清AST,ALT及GST;放免法测定血浆PGE2,TNF及IL-6;Western blot方法检测肝组织COX-2表达.通过光镜观察肝组织病理变化.结果血浆ALT,AST及GST模型组与正常对照组比较有明显升高(P0.01);模型组与正常对照组比较血浆PGE2,TNF及IL-6升高明显,差异具有统计学意义(P0.01);病理切片显示肝脏结构呈现病理改变.结论应用D-半乳糖可以成功制作小鼠肝脏损伤模型.     

脑缺血/再灌注损伤小鼠生物学特性及稳定性

建立稳定的脑缺血/再灌注损伤小鼠模型,对于研究缺血性脑病具有至关重要的意义.为了建立一种易操作、成功率高、稳定性好的脑缺血再灌注损伤小鼠模型,使用70只无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级健康雄性C57小鼠,随机分成假手术组(n=10)、颈总动脉(common carotid artery,CCA)进线组(n=30)及颈外动脉(external carotid artery,ECA)进线组(n=30),参照Zea Longa法,在线栓的选取、血管分离及处理、线栓插入方式等方面进行探讨,通过神经功能缺损评分、TTC染色检查脑梗死体积及苏木素/伊红染色观察脑组织形态学上的病理改变来分析确证模型成功率及稳定性.结果 表明:ECA进线组神经功能缺损评分在2～3分比率占70.0％,CCA进线组占43.3％;ECA组和CCA组术后存活率分别为90％和66.7％,两组之间存在显著性差异(P＜0.05);脑梗死体积和组织病理学,ECA进线组与CCA进线组之间均无差异(P＞0.05).采用颈外动脉进线方式与颈总动脉进线相比,脑梗死体积同样稳定且存活率更高.     

淫羊藿黄酮治疗骨质疏松的动物实验研究

研究了淫羊藿黄酮(EF)对去卵巢小鼠血清雌二醇(E2)、子宫内膜及骨密度(BMD)的影响.选取36只4月龄的C57雌性小鼠分3组:对照组(假手术组)、模型组(切除双侧卵巢后给予安慰剂)、观察组(切除双侧卵巢后给予EF).于术后4周抽血测雌激素含量,处死后经定量CT测第一腰椎BMD,并切除子宫制备病理切片测量子宫内膜厚度.指标显示:观察组BMD较对照组轻度下降,而模型组BMD较对照组显著下降;模型组及观察组血清E2浓度均较对照组显著下降;子宫内膜厚度两组均较对照组低,但两组间无明显差异.EF可对小鼠卵巢切除后引起的骨质疏松起到有效的预防和治疗作用,但不改变血清E2浓度,不作用于子宫内膜.     

番茄红素改善H2O2诱导的成骨细胞损伤

目的:在H2O2胁迫下,研究番茄红素增强成骨细胞抗自由基损伤的作用.方法:用H2O2作用MC3T3-E1成骨细胞,建立自由基损伤细胞模型.培养的成骨细胞分为对照组、模型组、番茄红素低剂量组(1×10-8mol/L)、番茄红素中剂量组(1×10-7mol/L)和番茄红素高剂量组(1×10-6mol/L).测定不同处理组细胞活力、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性自由氧(reactive oxygen species,ROS)含量、脂质过氧化物(1ipid oxygen,LPO)含量,同时利用荧光偏振法测定细胞膜流动性.结果:模型组细胞活力、SOD活性、细胞膜流动性均比不同番茄红素组有显著降低(P<0.01),而ROS含量、LPO含量均比不同番茄红素组有显著升高(P<0.01).结论:H2O2摄入会导致大鼠成骨细胞的氧化损伤,而番茄红素可以预防或降低此类损伤对细胞的影响.     

过氧化氢体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞氧化损伤模型的构建和分析

为给抗氧化损伤药物的开发利用和抗氧化损伤机制的研究提供理论依据和实验基础,本方法构建了过氧化氢(H2O2)体外诱导小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)经典的氧化应激损伤模型.应用贴壁细胞培养法培养NIH-3T3细胞,采用不同浓度的H2O2处理NIH-3T3细胞不同时间模拟氧化损伤模型,通过CCK-8法观察H2O2引起N...     

A2780-cp卵巢癌细胞株NOD scid小鼠原位成瘤模型的建立

目的:建立A2780-cp卵巢癌细胞株的NOD scid小鼠原位成瘤模型,为卵巢癌的进一步研究提供参考载体.方法:体外培养A2780-cp卵巢癌细胞,制成细胞密度为5×10~6/m L的单细胞悬液,原位种植:取20μL注入小鼠卵巢皮下;皮下种植:癌细胞悬液0.1 m L注入小鼠右侧腋下皮下.肉眼观察并通过核磁共振成像(MRI)测量小鼠成瘤情况,切片光镜观察瘤体组织结构.结果:NOD scid小鼠原位及皮下均能成瘤,MRI及组织病理切片结果均提示种瘤成功.结论:经卵巢原位注射A2780-cp细胞能有效地建立小鼠卵巢癌原位成瘤模型.MRI能无创性检测小鼠卵巢癌成瘤情况.     

C57BL/6小鼠急性放射性肠炎模型的建立

目的 用不同剂量的X射线照射C57BL/6小鼠,以建立急性放射性肠炎小鼠模型,为进一步探索急性放射性肠炎的发生和作用机制奠定基础。方法 取SPF级雄性6-8周龄C57BL/6小鼠23只,随机分为对照组(n=3)和6、12、15和18Gy(n=5)不同剂量照射实验组,观察小鼠15d存活率和体重变化情况。另取60只小鼠,随机分为对照组和6Gy、12Gy、15Gy(n=15)不同剂量照射实验组,分别在第1、3、7d颈椎脱臼处死各5只小鼠,取末端回肠组织做病理切片,进行HE染色、Masson染色,采用RT-qPCR方法检测肠组织中促炎细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和促纤维化生长因子TGF-β1的mRNA相对表达量变化。结果 辐照后第3d,照射组6Gy、12Gy、15Gy较对照组促炎细胞因子IL-1β、IL6、TNF-α和促纤维化生长因子TGF-β1有显著性变化,15Gy较对照组照射组小鼠回肠绒毛高度降低,隐窝数目减少、深度变浅,隐窝腔变大,肠纤维化更明显,而6Gy及12Gy相应表型不明显。结论 X射线一次性腹部照射,大体观察和病理切片表明15Gy和18Gy照射组具有临床急性放射性肠炎...     

胃乃安胶囊对乙醇致小鼠胃黏膜损伤的保护作用及机制

目的:观察胃乃安胶囊对乙醇致小鼠胃黏膜损伤的保护作用及探讨其机制探讨。方法:将小鼠随机分为正常对照组、模型组、胃乃安低剂量组、胃乃安高剂量组,采用乙醇诱导小鼠急性胃黏膜损伤1 h后,分别测定各组小鼠的胃黏膜损伤指数,并用光学显微镜观察胃黏膜的病理改变。结果:胃乃安胶囊高、低剂量组的损伤指数较模型组显著降低,胃黏膜损伤程度明显减轻。结论:胃乃安胶囊对小鼠急性胃黏膜损伤有一定的保护作用。     

谷胱甘肽过氧化物酶模拟物6-CySeCD对过氧化氢诱导小鼠成纤维细胞损伤的保护作用

考察不同剂量的H2O2作用于小鼠成纤维细胞(NIH3T3)后,细胞脂质过氧化、存活率、DNA片段化的变化情况,并研究谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)的模拟物6A,6B-环己胺-6A′,6B′-硒桥联-β-CD(6-CySeCD)抗H2O2诱导小鼠成纤维细胞损伤的能力.结果表明:H2O2对NIH3T3细胞有严重损伤;6-CySeCD能有效保护细胞,防止紫外线引起的损伤.     

羊耳菊水提物对CCl4、D-GaLN致小鼠急性肝损伤的保护作用

为研究羊耳菊水提物对CCl_4、D-GalN致小鼠急性肝损伤的保护作用。通过腹腔注射0. 08%CCl_4花生油溶液建立小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量,肝匀浆中总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)活力,以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)的含量; HE染色肝切片,显微镜观察肝组织病理改变;腹腔注射D-GalN(500 mg/kg)花生油溶液建立小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中AST、ALT含量。结果表明:羊耳菊水提液可降低CCl_4所致小鼠急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST含量(P 0. 01),升高肝匀浆中SOD、GSH-Px活力(P 0. 01或P 0. 05)及降低TNF-α、IL-1的含量(P 0. 05);病理切片显示,羊耳菊三个剂量组动物肝细胞坏死、变性,细胞浆聚集及炎症细胞的浸润程度均较模型组减轻。羊耳菊水提液也可降低D-GalN所致小鼠急性肝损伤小鼠血清ALT、AST含量(P 0. 01或P 0. 05)。可见羊耳菊水提物对CCl_4、D-GalN所诱导的小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。     

脂肪干细胞经两种方法移植后在多囊卵巢综合征大鼠体内分布的比较

目的:比较观察脂肪来源间充质干细胞(ADSCs)分别经静脉和卵巢原位移植后在多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢的归巢及其它器官的分布情况.方法:用携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体感染ADSCs,获得表达GFP的ADSCs.利用皮下注射脱氢表雄酮的方法制备PCOS大鼠模型,随机分为PCOS组(A组,n=8)、尾静脉注射组(B组,n=8)、卵巢原位注射组(C组,n=8),另选同批次正常大鼠8只设为空白对照组(D组,n=8).B、C组分别通过尾静脉和卵巢原位注射移植标记GFP的ADSCs,移植1周和1月取各组大鼠卵巢、子宫、肝、肾及肺,观察卵巢外观,各组织行冰冻切片在荧光显微镜下观察荧光分布情况.结果:慢病毒转染ADSCs48 h后,可见明显GFP表达,随着时间的推移,GFP的表达逐渐增多.B组卵巢表面未见囊肿,ADSCs散在分布于卵巢间质,子宫、肾、肝也可见ADSCs分布,但以卵巢最为多见,肺部未见明显荧光.C组卵巢注射部位可见囊性肿物,ADSCs局限分布于卵巢间质,除卵巢及部分子宫可见荧光外,其它组织未见明显荧光.两移植组移植1月及1周卵巢均可见绿色荧光标记的ADSCs.结论:移植的ADSCs可在PCOS大鼠体内存活并向卵巢归巢.通过尾静脉移植的ADSCs具有广泛分布的特点,而卵巢原位注射主要局限在卵巢局部.     

血液稀释治疗鲩鱼胆汁中毒的实验研究

新鲜鲩鱼胆汁给动物灌胃可引起多器官损伤,严重者致多器官功能衰竭,死亡率高.本文观察血液稀释(HD)对致死性鲩鱼胆汁中毒的治疗作用.实验采用 SD 大鼠53只.随机分为中毒组(n=25),稀释治疗组(n=21),正常对照组(n=7).实验结果表明,稀释治疗组动物的谷丙转氨酶(SGPT),黄疽指数(Ⅱ).尿素氮(BUN),升高幅度低于中毒组,肺、肝、肾病理组织学损伤轻于中毒组,24小时内死亡率中毒组高于治疗组,提示 HD 对致死性鲩鱼胆汁中毒可能有保护作用.     

骨髓间充质干细胞与内皮祖细胞对大鼠大部分肝切除合并缺血再灌注后损伤影响

目的通过制造大鼠肝脏缺血再灌注损伤合并大范围肝切除模型,探讨将骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)与骨髓内皮前体细胞(BM-EPCs)分别经门静脉移植入模型肝内,观察其对于鼠肝脏缺血再灌注肝损伤修复和肝脏再生中的作用,以及将两种细胞联合移植观察两种细胞是否存在协同作用促进肝脏缺血再灌注损伤修复和肝脏再生。方法通过细胞贴壁法从骨髓液中获得BM-MSCs和BM-EPCs。利用慢病毒携带绿色荧光蛋白(GFP)及红色荧光蛋白(RFP)分别对BM-MSCs及BM-EPCs进行细胞标记,为下一步将细胞移植入动物体内观察细胞的分布情况做准备。制作SD大鼠70%肝缺血再灌注损伤合并大范围肝切除手术模型,将SD大鼠随机分为四组:单独注射BMMSCs(n=12)、单独BM-EPCs(n=12)、联合注射BM-MSCs+BM-EPCs组(n=12)、单独注射PBS空白对照组(n=12),按不同分组进行细胞移植,分别经大鼠门静脉注射GFP标记的BM-MSCs/200μL、RFP标记的BM-EPCs/200μL、BM-MSCs+BM-EPCs(BM-MSCs∶BM-EPCs=1∶1)/200μL、对照组注射PBS/200μL。以上四组分别在不同的时间段:术后第1天(n=4),第2天(n=4),第3天(n=4)各取腔静脉血检测血清AST、ALT及TNF-ɑ水平指标。肝脏组织做冰冻切片后利用免疫荧光方法动态观察BM-MSCs和BM-EPCs在肝脏内的分布。各组肝脏组织行常规病理切片观察肝脏病理损害及恢复的程度。最后各组取第3天的肝组织使用Tunnel法检测肝内细胞凋亡情况。结果与对照组比较,BM-MSCs组、BM-EPCs组、BM-MSCs+BM-EPCs组在肝缺血再灌注损伤合并大部分肝切除术后第1天、第2天、第3天大鼠血清AST及ALT、TNF-ɑ水平均明显下降(P0. 05),其中BM-MSCs组大鼠血清AST及ALT、TNF-ɑ水平均最低(P0. 05)。通过免疫荧光方法观察BM-MSCs及BM-EPCs可以特异性分布至肝脏损伤部位促进肝脏组织修复再生。肝组织HE染色病理及评分显示与对照组比较,BM-MSCs组、BM-EPCs组及BMMSCs+BM-EPCs组肝内细胞损伤程度明显降低,然而与BM-MSCs+BM-EPCs组相比较,BM-MSCs组和BM-EPCs组肝内细胞损伤程度明显降低(P0. 05),BM-MSCs组与BM-EPCs组相比较肝内细胞损伤程度无统计学意义。与对照组比较BM-MSCs组、BM-EPCs组及BM-MSCs+BM-EPCs混合组均能降低肝内细胞的凋亡数量,但BM-MSCs组肝内凋亡细胞数量最少(P0. 05)。结论单独细胞移植组与联合移植组均对肝脏大部分切除合并缺血再灌注损伤起保护作用。但在本实验中联合移植组对肝功能以及肝内细胞的保护并未体现出协同作用。BM-MSCs和BM-EPCs可能通过降低血清TNF-ɑ水平抑制炎症反应从而在大部分肝切除合并肝缺血再灌注损伤后保护肝内细胞。     

红花山楂橘皮茶对小鼠脂肪肝的作用研究

目的研究红花山楂橘皮茶对于小鼠脂肪肝的作用效果。方法以红花山楂橘皮茶作为研究药物,将小鼠随机分为高剂量组(n=12,8g/kg灌胃,2次/d,共14d),低剂量组(n=12,4g/kg灌胃,2次/d,共14 d),阴性对照组,模型组,进行了对乙硫氨酸致小鼠脂肪肝作用影响的实验研究。结果红花山楂橘皮茶能降低小鼠肝脏中脂质的含量,并能降低脂肪肝的发生率,模型组血清及肝组织中总胆固醇(TC)甘油三酯(TG)高于阴性对照组(P0.05),红花山楂橘皮茶高剂量组血清及肝组织TC、TG低于模型组(P0.05)。结论红花山楂橘皮茶能降低小鼠肝组织中的TC含量,预防小鼠的脂肪肝发生。     

FGF21改善STZ诱导的1型糖尿病小鼠心肌纤维化的实验研究

目的探讨FGF21对STZ诱导的1型糖尿病小鼠心肌纤维化的影响。方法 32只8周龄雄性C57/BL6J小鼠随机分为对照组(n=6),FGF21siRNA对照组(n=6),1型糖尿病组(n=10),1型糖尿病+FGF21siRNA组(n=10)。以150 mg/kg体质量的剂量单次腹腔注射STZ建立1型糖尿病小鼠模型,造模后行FGF21siRNA给药。实验到达终点时,光镜下观察Masson染色心肌组织,电镜下观察纤维化程度,利用real-time PCR技术检测心肌组织Ⅰ型(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、TGF-β及FGF21mRNA的表达含量。结果与正常组小鼠相比,STZ诱导的1型糖尿病小鼠心肌细胞胶原纤维增生,伴随小鼠心肌组织ColⅠmRNA、ColⅢmRNA、TGF-βmRNA、FGF21mRNA表达增加,经FGF21siRNA处理后FGF21mRNA减低,心肌细胞胶原纤维增生更明显,心肌组织ColⅠmRNA、ColⅢmRNA、TGF-βmRNA的表达进一步增加。结论 FGF21可改善STZ诱导的1型糖尿病小鼠心肌纤维化。     

大蒜多糖抗氧化活性及其对PC12细胞增殖的影响

目的: 检测大蒜多糖对大鼠嗜铬瘤细胞株(pheochromocytoma cells, PC12)增殖的影响和对经过氧化氢(H2O2)诱导损伤的PC12细胞的保护作用.方法:应用四氮唑蓝(MTT)比色法检测大蒜多糖对细胞增殖的影响;建立H2O2致PC12细胞损伤模型,于倒置相差显微镜下观察细胞形态的变化;化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞内和细胞培养上清液中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性.结果:大蒜多糖各剂量组均能显著提高正常PC12细胞的存活数,大蒜多糖各剂量组均能有效对抗由25 μmol/L H2O2引起的细胞存活率下降和细胞凋亡,可明显改善细胞形态的衰变,显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内的MDA含量,提高SOD活性.结论: 大蒜多糖促进正常PC12细胞增殖;且对H2O2诱导PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关.     

桔梗皂苷-纳米硒复合物对CCl4 致小鼠肝损伤的保护作用①

目的:研究桔梗皂苷-纳米硒复合物(PLD-NSe~0)对CCl_4引起的小鼠急性肝损伤的预防保护作用。方法:采用CCl_4法制造小鼠急性肝损伤模型,检测正常组,模型组,联苯双酯阳性组和PLD-NSe~0高、中、低剂量组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、球蛋白(GLB)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)水平以及肝组织匀浆中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力和丙二醛(MDA)含量。计算小鼠的肝重指数,观察肝脏组织病理学变化。结果:PLD-NSe~0的高、中剂量组与模型组相比,小鼠血清中TP、ALB的含量显著升高,肝组织中的GSH-Px活力(p0.01)显著增强,而小鼠血清中ALT、AST、ALP水平、GLB含量和肝组织中MDA含量显著降低,病理切片显示PLD-NSe~0组均不同程度改善肝组织病理的变化。结论:PLD-NSe~0对CCl_4所致急性肝损伤有保护作用。     

蜂花粉对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤保护作用的病理学分析

探讨蜂花粉对四氯化碳(CCl4)所致的小鼠急性肝损伤的预防作用,观察其肝组织的病理变化。将48只小鼠随机分成6组:对照组、模型组、破壁花粉高、低剂量组、未破壁花粉高和低剂量组。第1～9天,花粉组每日灌胃给药1次,正常对照组与模型对照组灌胃给予等体积的饮用水,给药24 h后,用四氯化碳致小鼠急性肝损伤,观察比较各组小鼠的肝脏病理组织学变化。结果发现,病理学观察表明蜂花粉各剂量组可预防CCl4引起的肝细胞肿胀、气球样变等减轻急性肝损伤的肝脏损伤程度的病理改变。蜂花粉对CCl4引起的急性化学性肝损伤均有预防作用,破壁蜂花粉效果最明显,并存在量效关系。