人卵巢癌裸鼠卵巢原位移植瘤模型的构建

为探讨人卵巢癌进展机制的相关研究,构建适宜的体内动物模型。采用慢病毒转染技术,构建稳定过表达绿色荧光报告基因(GFP)的人EOC细胞模型:SKOV3(人卵巢浆液性腺癌细胞株)和ES-2(人卵巢透明细胞癌细胞株);异氟烷吸入麻醉4-6周龄BALB/C(nu/nu)雌性裸鼠,从裸鼠背部正中纵切口进入腹腔,显微多点注射法分别将细胞模型悬液,移植于裸鼠的单侧卵巢,每组6只裸鼠;Night OWL活体成像系统动态观察裸鼠移植瘤生长和转移情况;移植术后4-6周解剖裸鼠,取卵巢和转移瘤组织行HE染色。结果显示,携带GFP的EOC细胞模型SKOV3和ES-2,均可成功构建裸鼠卵巢原位移植瘤模型,裸鼠未发生手术原因死亡,成功率均100%;活体成像系统通过检测GFP的荧光强度和范围,能够动态监测裸鼠移植瘤生长情况;SKOV3细胞模型构建的卵巢癌和转移瘤组织,HE染色观察病理特征符合人卵巢浆液性腺癌;ES-2细胞模型构建的卵巢癌和转移瘤组织,HE染色观察病理特征符合人卵巢透明细胞癌。由此可知,异氟烷吸入麻醉、从背部正中纵切口进入腹腔、显微多点注射法移植携带GFP的EOC细胞模型,能成功构建可动态监测的裸鼠卵巢原位移植瘤动物模型;该动物模型与人卵巢癌生物学特征类似,适宜作为研究人卵巢癌演变进展的体内模型。     

细胞悬液注射法与组织块移植法建立骨肉瘤动物模型的比较

 为建立裸鼠胫骨原位骨肉瘤模型,并比较分析MG-63细胞悬液局部注射以及肿瘤组织块移植两种方法的成瘤特性,在注射组体内连续传代筛选MG-63细胞系获得高成瘤率的细胞,将MG-63细胞悬液(25μL,约1×10⁵个)注射于裸鼠胫骨上段髓腔内;组织块移植组将MG-63细胞皮下成瘤瘤组织块接种于裸鼠胫骨上段髓腔内。随后观察两种方法建立的胫骨骨肉瘤原位模型不同的成瘤特性,并采用影像学等手段比较两种方法的成瘤率和成瘤特点。结果表明,术后3周左右可见局部肿瘤形成,4周后通过小动物X线技术可见胫骨中上段溶骨与肿瘤样骨形成,同时在光学显微镜下可见典型的骨肉瘤病理特征。细胞悬液法成瘤率85%,组织块法成瘤率95%,两种方法成瘤率的差异有统计学意义(P<0.05),模型组血清碱性磷酸酶(ALP)明显高于对照组(P<0.01)。两种方法均可形成裸鼠胫骨原位骨肉瘤模型,采用组织块移植法成瘤率较高,瘤体生长速度较快,而且对骨皮质及周围软组织的破坏力较强,转移率高。     

人卵巢癌高转移细胞株裸鼠原位移植瘤模型

 卵巢癌仍是病死率最高的妇科恶性肿瘤。理想的动物模型对于卵巢癌生物学行为及治疗方法的探索等方面均有重要作用。肿瘤原位模型因具有相对较高的仿真性而成为动物实验研究的首选。本研究选用人卵巢癌高转移细胞株HO-8910PM作为成瘤细胞,拟建立裸鼠卵巢癌原位移植瘤模型,并对相关生物学特性进行研究。首先,将HO-8910PM细胞（细胞数约2×106）注射到雌性裸鼠皮下。待皮下成瘤后再通过显微外科手术将瘤体小块转移到其他裸鼠卵巢内,追踪观察原位肿瘤的生长和体内的转移情况,在荷瘤鼠处于濒死状态时将其处死,取原位和转移病灶处的肿瘤组织做光镜及电镜的病理检查。共14只裸鼠接受了原位移植手术,经追踪观察,有8只原位成瘤,成功率为57.14%。通过尸检发现有5只荷瘤鼠出现了远处器官的转移（转移率为83.33%）,转移器官为肺、肝脏、膈肌、胃表面、肠管表面、胰脏、后腹膜、对侧卵巢、髂窝淋巴结等处,以膈肌和肝脏较为普遍。本研究成功地建立了裸鼠原位移植瘤模型,其生物学特性在某种程度上与人类卵巢癌更为相似,为卵巢肿瘤的研究提供了一种理想的动物模型。     

人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

利用人卵巢癌Cocl细胞株制备裸鼠皮下移植瘤模型。将两种不同浓度Cocl细胞悬液(5×10     

胸膜穿刺针联合OB吻合胶构建615小鼠胃癌皮下移植瘤模型

目的 采用胸膜穿刺针联合OB吻合胶构建615 小鼠皮下移植瘤模型。方法 小鼠前胃癌细胞株(MFC)在无菌环境下培养制成浓度1×107个/mL细胞悬液,然后将悬液接种于小鼠右腋下,建成胃癌动物皮下移植瘤模型,利用瘤块进行体内传代3次,胸膜穿刺针法进行穿刺移植建立615小鼠皮下移植瘤模型。同时建立对照组(未放瘤块)用于对比,小鼠成瘤情况利用外观形态学和HE染色方法评价。结果 模型组小鼠体质量减轻。模型组肿瘤在第12天后生长较快,模型成功率为100%。外观形态学观察,模型组10只小鼠成瘤率100%,平均瘤重为(7.7160±0.2937)g;对照组成瘤率为0,模型组与对照组差异明显(P<0.01)。病理结果显示：模型组的瘤块体积较大,表面不规则,细胞核呈圆形、卵形或异形,核仁不显现,核分裂相较明显,是比较典型的胃癌组织的形态特征。结论 胸膜穿刺针联合OB吻合胶法构建615小鼠胃癌皮下移植瘤模型成功率高、并且具有高效、便利等特点,值得推广应用及研究。     

不同转移能力的人鼻咽癌细胞CNE-2Z克隆株在scid小鼠体内的验证和比较

报道将从人类鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)分离出的不同克隆株细胞悬液,分别移植于严重联合免疫缺陷(scid)小鼠和BALB/c裸鼠的背侧皮下,于56天后处死所有小鼠,进行了大体和组织学检查。结果发现当每只scid小鼠移植2×10~6个瘤细胞时,CNE2-L2克隆株为高转移株,其淋巴转移率为100％,肺转移率为71％;而CNE2-L4克隆株为低转移株,其肺转移为13％,淋巴结未见转移;而当每只小鼠移植2×10~5个瘤细胞时,CNE 2-L2也为高转移克隆株,但比上者为低,其淋巴结转移率为71％。肺转移率为14％;CNE2-M2克隆株为中转移株。其淋巴转移率为43％,肺转移率为14％。与其裸鼠相比,当给每只BALB/c移植2×10~6个瘤细胞后56天时,尚未查见转移。说明两种免疫缺陷动物对恶性瘤细胞表型的表达,scid小鼠比BALB/c裸鼠为敏感。另外,皮下移植瘤细胞的数量也可能与转移出现的时间有密切关系。在相同时间内移植瘤细胞数越多,转移率也相对地增高,反之亦然。     

淫羊藿素对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞株周期阻滞作用的研究

目的:研究淫羊藿素(ICT)对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞株的增殖抑制作用及机制,为复发耐药性卵巢癌治疗药物的研发提供新思路.方法:利用胸腺嘧啶核苷酸(TdR)双阻滞法建立周期同步化模型,采用流式细胞技术检测淫羊藿素对同步化后的不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞株的细胞周期阻滞作用,Western blot检测浓度为20μmol/L淫羊藿素作用下细胞株周期蛋白CyclinE、CyclinB1、p53及CHK1蛋白表达情况.结果:淫羊藿素浓度为20μmol/L作用4 h时即产生周期阻滞作用,阻滞效果随作用时间延长而增强;其中,p53野生型C13~*细胞株G1期百分比升高(P0.05);p53变异型A2780cp细胞株G2期百分比升高(P0.05);p53缺失型的SKOV3细胞株G2期百分比升高(P0.05).淫羊藿素20μmol/L作用下,p53野生型C13~*细胞株CyclinE表达下调,而CyclinB1蛋白无明显变化;p53变异型A2780cp及p53缺失型SKOV3细胞株CyclinB1蛋白表达下调,而CyclinE无明显变化.p53野生型C13~*细胞株p53蛋白表达明显上调,p53变异型A2780cp细胞株p53蛋白无明显变化,p53缺失型SKOV3细胞株p53蛋白表达缺失;三株细胞CHK1蛋白表达均明显升高.结论:淫羊藿素对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞均具有时间依赖性的周期阻滞作用;其对不同p53分型顺铂耐药卵巢癌细胞的阻滞作用途径不同;其中对p53野生型C13~*细胞株通过p53途径下调CyclinE蛋白诱发细胞G1期阻滞;而对p53突变型A2780cp及p53缺失型SKOV3细胞株则通过CHK1途径下调CyclinB1诱发G2期阻滞.     

裸鼠人胃癌原位移植模型的建立

作者将ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞接种至棵鼠皮下，建立皮下移植模型并反复传代，以第八代移植瘤为材料，将瘤组织块种植到裸鼠胃壁，成功地建立了裸鼠人胃癌原位移植模型。该模型原位瘤沿胃壁呈浸润性生长，潜伏期为３－４周，以后迅速增长并与网膜粘连，约１２周以后部分动物出现肝转移，以后逐渐消瘦，生存期为１６－２４周，本方法原位成瘤率及局部浸润发生率均为１００％，且可出现肝脏转移，肿瘤生长过程与临床胃癌特点很类似，适用于人胃癌转移的研究。     

Hepa1-6细胞的培养及小鼠皮下移植瘤模型的建立

目的 培养小鼠Hepa1-6细胞,建立小鼠皮下肝癌模型,为后续实验奠定基础.方法 Hepa1-6体外培养,观察细胞生长情况,按2×105/鼠(A组)、2×106/鼠(B组)和4×106/鼠(C组)的细胞量,接种于C57BL/6j小鼠,观察肿瘤生长情况.结果 细胞生长速度较慢,传代第3 d为指数生长期;成瘤率分别为A组30%,B组为80%,C组为100%;A、B组分别在接种肿瘤细胞后12 d和10 d成瘤,而C组在接种肿瘤细胞后7 d成瘤,成瘤速度明显高于前两组;第3周和第4周C组和B组肿瘤生长体积显著高于A组(P<0.01),而C组和B组之间无明显差异.结论 使用Hepa1-6细胞以4×104/鼠的细胞用量在SPF.级雌性C57BL/6j小鼠前肢部皮下成功建立了肝癌移植瘤,完成了小鼠肝癌动物模型的建立.     

蒺藜总螺甾皂苷对人卵巢透明细胞癌荷瘤裸鼠肿瘤抑制作用的实验研究

目的研究蒺藜总螺甾皂苷对人卵巢透明细胞癌荷瘤裸鼠肿瘤的抑制作用。方法采用人卵巢透明细胞癌接种裸鼠待长出实体瘤后,用第二代实体瘤按每鼠约1 mm3瘤组织块移植裸鼠皮下建立人卵巢透明细胞癌裸鼠模型;用蒺藜总螺甾皂苷(高剂量0.42 mg/m L、中剂量0.21 mg/m L)分别给实验组裸鼠灌胃0.3 m L/10 g,对照组只给饮用水,每日1次,连续30 d。每周测量体质量和肿瘤大小2次,给药30 d后处死小鼠,解剖称肿瘤重量,计算抑瘤率,评价蒺藜总螺甾皂苷(高剂量、中剂量)对裸鼠荷瘤的抑制作用;结果蒺藜总螺甾皂苷高剂量和蒺藜总螺甾皂苷中剂量对人卵巢透明细胞癌荷瘤裸鼠有抑制肿瘤作用,抑瘤率分别87.61%和95.26%,其中中剂量抑制肿瘤与对照组比较有显著性差异(P0.01),高剂量组有统计学意义(P0.05);结论蒺藜总螺甾皂苷(高剂量、中剂量)均能抑制人卵巢透明细胞癌荷瘤裸鼠肿瘤作用。     

H22 实体瘤小鼠生存实验及环磷酰胺对生存期的影响

摘要: 目的研究腹水型H22 肝癌皮下移植小鼠的生存期及环磷酰胺的影响。方法将H22 肝癌腹水瘤细胞接种 于BALB / c 小鼠左侧腋窝皮下,5d 后按肿瘤体积随机分成环磷酰胺组和对照组。环磷酰胺组腹腔注射环磷酰胺 50 mg / kg,每周2 次。观察小鼠一般临床表现、成瘤时间、成瘤率、体质量、摄食量、饮水量、肿瘤体积及生存时间。 结果H22 皮下移植小鼠成瘤时间约为5 d,成瘤率100% 。环磷酰胺组体质量、肿瘤体积与对照组比较明显降低 ( P ＜ 0. 05) ,环磷酰胺组摄食量、饮水量与对照组比较有增加的趋势。H22 皮下移植瘤小鼠平均生存时间为87 d, 环磷酰胺组小鼠平均生存时间为113 d( 生命延长率30. 3% ,P ＜ 0. 01) 。结论H22 腹水型肝癌皮下移植小鼠是一 种较理想的实体瘤模型,具有正常的免疫功能,可用于生物反应调节剂抗肿瘤药物影响荷瘤小鼠的生存期实验。     

裸鼠自发淋巴瘤生物特性和病理形态观察

介绍纯合子Swiss裸鼠自发恶性淋巴瘤的移植特性和病理形态观察。取肿瘤组织悬液接种无T淋巴细胞的纯合子(nu/nu)小鼠皮下,每点注射0.2ml,肿瘤发生率100％;而接种有T淋巴细胞的小鼠均不生长。该肿瘤共传5代,其特性均与原自发瘤一样。光镜检查为B细胞型恶性淋巴瘤,电镜检查符合B细胞恶性淋巴瘤。     

青刺胶囊抗肿瘤作用及调节免疫功能的实验研究

目的:研究青刺胶囊对荷S180瘤细胞小鼠的体内抗肿瘤活性和对体液免疫功能的影响。方法:采用S180瘤细胞悬液接种小鼠皮下造实体肉瘤为模型,分别以环磷酰胺片组为阳性对照组、模型组为阴性对照组,青刺胶囊以高、中、低3种剂量为受试药物组,每组ig给药,1次/日,连续给药10天。结果:青刺胶囊显著抑制S180荷瘤小鼠瘤体积的增长速度,使荷瘤小鼠的一般生活状况明显提高,抑瘤率可达到65.2%,瘤重与模型对照组比较P0.01;提高荷瘤鼠血清中溶血素水平(P0.05);提高二硝基氯苯所致的迟发超敏反应强度(P0.05)。结论:通过实验证明,青刺胶囊具有明显的体内抗肿瘤活性,能显著提高荷瘤鼠机体的体液免疫功能,为青刺胶囊的临床应用提供实验依据。     

人淋巴瘤OCI-Ly3细胞的免疫学特性研究和小鼠模型建立

以人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)活化B细胞(activated B-cell,ABC)型细胞株OCI-Ly3为研究对象,探索ABC型的生物学特性及肿瘤相关分子的表达,以及小鼠成瘤条件.对不同条件下培养的OCI-Ly3细胞进行对比分析,观察细胞生长形态及生物学特性;分析肿瘤相关抗原在OCI-Ly3细胞的表达情况;采用皮下和腹腔接种,在SCID小鼠中建立移植瘤动物模型.流式分析显示,体外培养的OCI-Ly3细胞对c-Met、Ki-67和survivin等细胞增殖和凋亡相关标记物具有较高的表达;SCID小鼠皮下接种107 OCILy3细胞,成瘤率87.5%;腹腔接种2×107细胞,成瘤率75%;肿瘤组织符合人DLBCL的组织学特征,且分布弥散,具有较高的侵袭性.成功构建了人ABC型DLBCL的小鼠模型,并对OCI-Ly3细胞的体外培养特性和与肿瘤发生相关的免疫标记物进行了较为系统的检测,为DLBCL的进一步研究提供了参考和工具.     

前列腺癌细胞乳鼠移植瘤动物模型的建立

为构建前列腺癌细胞(PC3)乳鼠移植瘤动物模型,在体外培养PC3细胞,经软琼脂克隆形成实验筛选PC3细胞株中具有克隆形成能力的细胞,常规传代后取对数生长期细胞,接种约2×107 mL-1单细胞悬液0.1mL于出生2d的乳鼠颈部和前肢交界处皮下,建立移植肿瘤动物模型,观察乳鼠肿瘤生长特点,并用病理组织HE染色和免疫组织化学染色鉴定PC3在乳鼠皮下的成瘤情况.结果显示注射后乳鼠未见明显的不良反应.1~6d可见乳鼠皮下肿胀,且能触及到黄豆粒大小的肿物;7~15d肿物变大,肉眼能观察到明显肿物;16~21d时肿物有消退迹象.病理组织HE染色观察显示肿块为肿瘤组织,免疫组织化学染色显示肿物中CD133呈强阳性表达.     

狼毒乙醇提取物限制糖脂代谢阻止小鼠肺癌细胞生长和转移

采用不同浓度的狼毒乙醇提取物处理体外培养的Lewis肺癌细胞48h,MTT法检测细胞粘附与增殖,transwell小室检测细胞运动,并测定细胞内葡萄糖(Glu)、葡萄糖转运体1(GLUT1)、游离脂肪酸(FFA)和甘油三酯(TG)水平.将小鼠Lewis肺癌细胞分别注射到小鼠腋部皮下和尾静脉建立小鼠Lewis肺癌皮下移植模型和实验性肺转移模型,分成模型组、狼毒乙醇提取物高剂量组和低剂量组,模型建立后次日给药,治疗3周评价狼毒乙醇提取物的抗肿瘤和抗转移作用,检测瘤组织中GLUT1、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)、FFA和TG水平,并采用免疫组化法比较肺转移肿瘤部位与非肿瘤部位GLUT1和脂肪酸合成酶(FAS)的差异.结果显示,狼毒乙醇提取物对体外培养的Lewis肺癌细胞呈剂量依赖性抑制其粘附、增殖和运动,能降低细胞内Glu,GLUT1,FFA和TG水平.与未治疗的模型小鼠比较,狼毒乙醇提取物呈剂量依赖性减缓肿瘤生长速度、阻止肿瘤转移、延长荷瘤小鼠存活时间.狼毒乙醇提取物能降低瘤组织中GLUT1,LDH,FFA和TG水平,但增加SDH活性.在免疫组化中,与正常肺组织比较,狼毒乙醇提取物也能抑制肺转移肿瘤部位的GLUT1和FAS.以上结果表明,狼毒乙醇提取物能限制肿瘤细胞对葡萄糖和脂肪的利用从而阻止肺癌细胞的生长和转移,是一种有前景的新型潜在抗肿瘤药物.     

右旋柠檬烯对双酚A影响下人源乳腺癌MDA-MB-231裸鼠移植瘤生长及肠道菌群的影响

观察右旋柠檬烯对环境雌激素双酚A影响下荷人源MDA-MB-231乳腺癌裸小鼠移植瘤的抑制情况和肠道菌群的影响。将人源乳腺癌MDA-MB-231细胞接种于Balb/c-nu/nu雌性裸鼠右侧腋窝皮下建立人三阴性乳腺癌裸鼠移植瘤模型，获得的30只三阴性乳腺癌荷瘤裸鼠随机分为5组，模型组(每天予蒸馏水)，双酚A+右旋柠檬烯低、中、高剂量组(0.25 m L/kg、0.5 m L/kg、1 m L/kg)，双酚A组(1 m L/kg)，每组6只;每天灌胃给药1次，连续6周。实验结束，观察比较右旋柠檬烯低、中、高剂量组与模型组荷瘤鼠肿瘤质量、瘤体体积的变化，计算肿瘤抑制率，采用高通量测序技术检测荷瘤小鼠的肠道菌群变化。结果:双酚A组肿瘤较对照肿瘤组肿瘤增加大，双酚A+右旋柠檬烯低、中、高剂量组中的乳腺癌肿瘤体积、瘤重比对照组和双酚A组减小;接种肿瘤后细菌种类和丰度下降，右旋柠檬烯治疗后肠道菌群种类和丰度增加，右旋柠檬烯中高剂量组疣微菌门菌verrucomicrobiota丰度较双酚A组和对照组的明显增多，而拟杆菌门Bacteroidet丰度较双酚A组和对照组的明显减少。在属水平上，与对照组相比，...     

LAGE-1DNA肿瘤疫苗的抗肿瘤治疗效果研究

以LAGE-1转染EMT6构建小鼠乳腺癌肿瘤模型;将BalB/c小鼠随机分为4组,以pcDNA3.1/LAGE-1及对照pcDNA3.1分别接种实验组和对照组各三次.于末次免疫后10 d在小鼠左背部、右背部皮下分别种植EMT6肿瘤细胞和EMT6/LAGE1肿瘤细胞．荷瘤后观察成瘤时间、肿瘤大小,并对小鼠脾细胞进行CTL细胞杀伤活性实验来观察DNA疫苗引起的免疫反应.结果显示LAGE-1DNA疫苗在体内能诱导有效的特异性肿瘤免疫应答,该疫苗简便有效.     

基于拉曼光谱对人舌鳞癌动物模型建立的检测

建立人舌鳞癌细胞体外癌变模型, 采用激光共焦显微拉曼光谱仪对其进行检测,从分子层面对其进行分析. 方法: 通过培养CAL-27细胞,然后注射在裸鼠皮下成瘤,在通过激光共焦显微拉曼光谱仪和HE染色观察其癌变的情况. 结果:①正常皮肤组织的切片图上可见,其细胞层次清晰,整齐,但是肿瘤组织发现上皮异常增生,细胞多形性,结构层次非常不清楚;②采用共焦显微拉曼拉曼光谱技术并结合主成分分析法和线性辨别技术分类健康裸鼠和人舌鳞癌细胞体外癌变组织的拉曼光谱得到灵敏度为98.4%,特异性为95%,诊断率为96.7%,并发现该方法可以很好的对该动物模型进行在体的检测.     

GAGE-1 DNA肿瘤疫苗的构建及其抗肿瘤治疗效果的试验研究

目的 观察G antigen 1 (GAGE-1)核酸疫苗pcDNA3.1+/GAGE-1免疫小鼠后,对表达GAGE-1抗原的B-16/GAGE-1肿瘤细胞的保护作用.方法 将C57 BL/6小鼠随机分为4组,与0、2、4周分别接种pcDNA3.1＋/GAGE-1（实验组1）、pcDNA3.1＋/GAGE-1/白介素2（实验组2）、pcDNA3.1＋（对照组1）,pcDNA3.1＋/白介素2（对照组2）各三次.末次免疫后10d小鼠用于肿瘤细胞攻击试验：分别于左背部、右背部皮下种植B16肿瘤细胞、B16/GAGE-1肿瘤细胞.种植肿瘤细胞（荷瘤）后观察成瘤时间、肿瘤大小和荷瘤后小鼠的生存时间及生存率. 结果： pcDNA3.1+/GAGE-1/IL-2质粒免疫的小鼠在种植B16/GAGE-1、B16/pcDNA3.1+后,发现小鼠成瘤时间明显延迟,成瘤减小,生存期明显延长.结论:pcDNA3.1+/GAGE-1/IL-2 DNA 疫苗在体内能诱导出显著的GAGE-1特异性肿瘤免疫应答,且能抑制体内已经存在的少量肿瘤细胞的成瘤