不同发育时期胎儿胸腺和肝脏染色体蛋白质非组蛋白HMG的研究

我们从三个不同发育时期入的流产胎儿的肝脏和胸腺染色质中提取出高迁移率组(HGM)蛋白质,比较了它们的电泳行为。发现,1)不同发育时期胎儿肝脏染色质HMG的SDS电泳行为没有明显地区别;2)不同发育时期胎儿胸腺HMG的SDS电泳图型也没有明显的区别;3)胎儿肝脏HMG和胸腺HMG以及与小牛胸腺HMG相比具有某些差异。 从5—7个月胎儿肝脏总HMG中纯化出几个不同的蛋白质组分。其中HMG—e和HMG—c二个组分的氨基酸组成已被测定,发现它们各有独特的氨基酸组成。 用SDS凝胶电泳测得胎儿肝脏和胸腺HMG的分子量范围为12,000—26,000。     

一种新的蛋白质HMG家族

由于科学技术的高速发展和电泳技术分离大分子的成功,人们开始认识了一类新的蛋白质,即高活性群蛋白质(HMG)。HMG是一系列酸性小蛋白质的聚集体,具有高度的流动性,反映了它们质量很小,相对分子量均在30000以下。然而,其他与非组织染色体关联的蛋白质的分子量比我们已熟悉的HMG要大得多,人们对现有HMG的重视     

北京鸭红细胞生成过程中HMG染色体非组蛋白的变化及其与基因活动的关系

嗜多色红细胞具有基因转录活性,而成熟红细胞却没有基因转录活性。本文实验结果表明嗜多色红细胞发展到成熟红细胞过程中,HMG蛋白质的相对含量发生了显著地变化。高分子量类型的HMG蛋白质(HMG_1,HMG_(2a)和HMG_(2b))总含量升高;而低分子量类型的HMG蛋白质(HMG_(14)和HMG_(17))的总含量降低。 用DNase I有限度地消化嗜多色红细胞和成熟红细胞染色质,发现DNase I对嗜多色红细胞染色质的消化速率比对成熟红细胞染色质的消化速率要高的多。     

HMGA2的结构、功能及调控机制

前言 核小体是染色质的基本单位, 由DNA和核心组蛋白八聚体 (H2A、H2B、H3和H4各两分子)组成,并由不同的蛋白质〔包括组蛋白H1和高迁移率组(HMG)蛋白〕组成高级结构.     

尿促性素的提取及其生物活性研究

建立人绝经期促性腺激素(HMG)提取及初步纯化工艺,提取不同地区绝经期妇女尿液中HMG成分,进行免疫效价和生物活性测定,以苏木精-伊红染色法观察大鼠卵巢经HMG中间体注射后的改变,比较不同地区原尿提取的HMG中间体的质量;以高岭土吸附,二级丙酮提纯得到HMG中间体,采用酶联免疫吸附测定试剂盒测定卵泡刺激素(FSH)的免疫效价,生物测定法测定FSH生物活性。结果发现,采自临沂、济宁、济南、泰安、德州5地的样品的HMG中间体免疫效价分别为0.92、1.06、1.57、1.08、0.9 IU/mg,生物活性分别为1.02、0.94、1.21、0.77、0.76 IU/mg;经HMG中间体注射后,大鼠卵泡体积、质量均变大,且随剂量增加更明显;相比传统方法,本文中提取的HMG中间体活性有显著提高,采自济南地区的样品的HMG中间体生物活性最高,临沂、济宁两地的次之;同时,除临沂外,其他地区样品的HMG中间体生物活性均低于免疫效价。     

不同倍性鲫鲂高迁移率族蛋白1基因的克隆和原核表达

用RACE PCR技术,分别获得三倍体鲫鲂、四倍体鲫鲂、红鲫和团头鲂的高迁移率族蛋白1基因(HMG1)mRNA全长序列,其开放阅读框包含579nt,翻译成193个氨基酸.不同倍性鲫鲂HMG1的cDNA和氨基酸序列比较分析表明:在cDNA水平上,四倍体鲫鲂与母本红鲫的同源性(99%)高于同父本团头鲂的同源性(97%);三倍体鲫鲂与父母本同源性(95%)低于亲本之间的同源性(98%);在氨基酸水平上,四倍体鲫鲂与父母本的同源性(100%)高于三倍体鲫鲂与亲本的同源性(97%).结果表明:远源物种间的杂交对两性不育的三倍体鲫鲂HMG1基因造成了一定的冲击,分子遗传效应表现为三倍体鲫鲂HMG1基因位点发生了变异;四倍体鲫鲂HMG1氨基酸序列与亲本的完全一致性,克服了等位基因的杂交不亲和性,为两性可育的异源四倍体鲫鲂遗传稳定奠定了基础.生物信息学分析表明:HMG1蛋白二级结构具有8个螺旋和3个转角,HMG1蛋白三级结构于N-端具有两个DNA结合基序,C-端具有一长为23个重复D或E的氨基酸尾.这种结构决定了HMG1能够与核DNA发生"蛋白-DNA"的相互作用,参与多种核内生物学功能的完成.另外,以HMG1氨基酸序列构建了鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类的进化树,结果提示HMG1是一种古老的蛋白质,并在物种演化中具有保守性;首次构建了鱼类HMG1原核表达载体,外源的鱼类HMG1基因编码蛋白在原核细胞中得到了表达,这为下一步HMG1蛋白的制备和生物学功能、尤其与DNA转座子相互作用的研究提供了条件,将助于了解物种间的杂交形成异源多倍体的机制.     

Interactions between HMG proteins (HMG1/2 and HMG14/17) and human ε-globin gene promoter (ε-promoter)

High mobility group (HMG) proteins are abundant non-histone proteins in the nuclei of eukaryocytes. It has been shown that HMG proteins may play important roles in the structure and function of chromatin. In the present study, thebinding of HMG proteins (HMG1/2 and HMG14/17) to the human ε-globin gene promoter (ε-promo- ter, -177-+1 bp) has been examined by using both the in vitro nucleosome reconstitution and the electrophoresis mobility shift assay (EMSA). We found that HMG1/2 proteins could bind to the naked ε-promoter DNA, however, HMG14/17 could not. Using the in vitro nucleosome recons- titution, we revealed that HMG14/17 could bind to the mononucleosome reconstituted in vitro with ε-promoter,whi- le HMG1/2 could not. Those results indicate that the binding of HMG proteins to ε-promoter is dynamic as the nucleo- some assembling and disassembling. Wespeculated that this selective binding of HMG proteins to ε-promoter might playa critical role in the regulation of ε-globin gene expression.     

用^211At和^131I标记蛋白质的研究

报道了砹—211和碘—131标记蛋白质的方法.通过过氧化氢或氯胺T直接氧化制备,使用凝胶色谱从反应产物中分离标记蛋白质,相对法比较放射性计数测定标记产率,过氧化氢适用于~(211)At标记蛋白质,氯胺T有利于~(131)I标记蛋白质.8次实验的结果表明,用过氧化氢氧化标记的~(211)At牛血清白蛋白产率96.4％,氯胺T氧化标记的~(?)I牛血清白蛋白产率66.1％.间接法标记蛋白质,放射性核素~(211)At同对氨基苯甲酸反应获得对—~(211)At—苯甲酸,经乙醚萃取和高效液体色谱分离,然后再偶联到免疫球蛋白或牛血清白蛋白上。动物实验结果表明,此种结合的标记蛋白质在体内稳定,标记率不低于初始~(211)At放射性活度的40%.     

蚕豆萎蔫病毒中国分离物RNA2全序列及多聚蛋白切割位点

对蚕豆萎蔫病毒2(BBWV2)分离物B935 RNA2全序列进行了测定,全长由3 601个核苷酸组成(不包括3'端Poly(A)).RNA2包含一个长的开读框,该开读框起始于231位,终止于3 428位,编码一个分子量为119 ku的多聚蛋白.对外壳蛋白亚基N端氨基酸序列测定表明外壳蛋白大亚基(LCP)和小亚基(SCP)是由119 ku多聚蛋白中谷酰胺与甘氨酸及谷酰胺与丙氨酸之间的切割产生的,LCP含有402个氨基酸,SCP含有197个氨基酸.与蚕豆病毒属(Fabavirus)病毒基因组核苷酸及编码的蛋白质氨基酸序列比较表明,B935与BBWV2分离物及广藿香轻花叶病毒具有很高的同源性,而与BBWV1分离物的同源性较低.B935与豇豆花叶病毒属(Comovirus)和线虫传多面体病毒属(Nepovirus)的基因组结构相似,但序列同源性很低.B935与豇豆病毒属病毒的LCP和SCP氨基酸具有共同的保守序列.用4株单克隆抗体进行TAS-ELISA测定表明B935与BBWV1分离物(NRS和PH3)抗原上有差异.     

青藏高原有机牦牛肉背最长肌双向电泳体系的建立

为了建立青藏高原有机牦牛肉背最长肌双向电泳(2-DE)体系,本研究对肌肉样品的处理、蛋白质的提取以及等电聚焦方式等进行了研究。结果表明:(1)用超声波裂解肌肉蛋白质的检出率及蛋白分离效果明显优于用液氮研磨;(2)用直接裂解法(7M尿素,2M硫脲,4%CHAPS(w/v),0.5%两性电解质p H 3~10,100 mmol/L DTT(w/v),60 mmol/L Tris,20μL蛋白酶抑制剂)提取肌肉组织全蛋白获得的蛋白质量、凝胶图谱斑点数目、匹配率和图像分辨率最好,尤其适合提取小分子蛋白;(3)采用间隔式等电聚焦方式,蛋白质的分离效果明显优于普通升压方式,且横条纹较少,蛋白点数量增多。结论:本研究建立的2-DE体系,能提高有机牦牛背最长肌总蛋白双向电泳的分辨率和重复性,为后续进行有机牦牛肉品质评价的蛋白质组学研究,更好地解析青藏高原有机牦牛肉品质形成的遗传调控机制奠定了基础。     

高效液相色谱法/双电极电化学检测器测定小鼠脑组织中硝基酪氨酸

用HPLC结合双电极电化学检测器测定小鼠脑组织蛋白质3 硝基酪氨酸(3 NT)含量。采用4 6mm×150mmWaters0DS2柱,10mmol L醋酸钠 10mmol L柠檬酸 0 2%甲醇为流动相,检测器第一电极电位650mV,第二电极电位750mV。流速1mL min。在此条件下,小鼠脑组织蛋白质水解液3 NT得到良好的分离。方法回收率为93±2%,加标及未加标样品的sr分别为2 7%和6 2%。最低检测量为0 1pmol。在0 01～2 00μmol L浓度范围内线性关系良好,相关系数为0 9992。运用这一方法成功地观察到18～20月龄小鼠脑组织蛋白质3 NT含量比4～6月龄小鼠明显增加(p<0 05)。     

丹参中微量元素Fe,Cu,Mn和Zn的形态分析

对丹参水煎液及人工胃酸提取液中的具有生物活性的微量元素Fe,Cu,Mn和Zn的形态进行了研究.用OasisTMHLB固相提取小柱、D401螯合树脂对2种丹参提取液中的Fe,Cu,Mn和Zn进行了提取.用AmberliteXAD-7大孔吸附树脂分离了丹酚酸等有机结合态,同时对蛋白质、多糖有机结合态分布进行了分析,用火焰原子吸收法(FAAS)测定了各形态微量元素的含量.结果表明:Zn和Cu的蛋白质结合态分布较高;多糖结合态中以Cu元素为主;XAD-7截留的丹酚酸等有机结合态中Fe元素的含量最高.     

高效离子交换色谱法分离和测定SO_3~(2-),S~(2-),S_2O_3~(2-)的研究

用高效离子交换色谱法分离S_3~(2-),S~(2-)及S_2Q_3~(2-)的工作仅见两篇文献报导,但都是以强酸性溶液作为电极反应液,并在洗脱液中加入甲醇。分离时间在二十分钟以上。我们使用国产SY-202高效离子交换色谱仪及阴离子交换树脂对上述离子进行了快速分离和测定,仅     

HMG在家兔超数徘卵中的应用

用国产的尿促性腺激素(HMG)，孕马血清促性腺激素(PMSG)，人绒毛膜促性腺激素(HCG)，对40只母兔进行超数排卵处理试验。结果显示，国产的HMG对母兔有良好的超排作用。试验兔中有90％表现出超排效应，平均每只母兔可回收到30．2个胚胎，最多的一只母兔回收到103个胚胎，对照组(PMSG)平均为7．6个胚胎，差异十分显著(P＜0．01)，同时显示季节对超数排卵的影响也很大，春季优于秋季。     

借5—Br—PADAP螯合物和反相液相色谱测定钒和镍

借反相高压液相色谱法分离了钒(Ⅴ)和镍(Ⅱ)的5-Br-PADAP螯合物、于Zorbax CN柱上,用含10~(-2)mol/L KHSO_4-NaAc缓冲剂(pH 3.5)的70%甲醇-30%水(V/V)作流动相(0.7ml/min)可在18分钟内将此二螯合物分离并于550nm处检测。检测限为0.3 ng V(V)和2 ng Ni(Ⅱ),此方法已应用于合金钢和钒渣中钒的测定,以及水样中钒和镍的测定。     

间接原子吸收光度法测定微量S^2—

研究了用间接原子吸收分光光度法测定微量S~(2-).在pH=4.5的含S~(2-)溶液中,加入定量过量的Cu~(2+),使其形成CuS沉淀,多余的Cu~(2+)用戊黄原酸钾配合,然后用甲基异丁基甲酮(MlBK)溶剂萃取配合物.不需分离,直接喷雾有机相溶液测定配合铜.S~(2-)的灵敏度为0.01μg/mL/1％,变动系数2.7％.     

矿石中锂的火熖光度测定

將含鋰矿样用HF—H_2SO_4分解,并蒸发除去HF,然后用尿素分离Fe和Al,以真飽和草酸分离Ca真至于鉀对鋰的影响,可用校正曲线法改正。溶液中鋰(待校正的)及鉀的含量均用火焰光度法测定。用差减法所得真实鋰含量与管理矿样比较,其耙对誤差(当Li_2O％小于0.11％时)小于+0.03％     

SDS-PAGE电泳法测定蒜头果蛋白的相对分子质量

蒜头果蛋白(malanin)是从广西、云南特有植物蒜头果中分离、纯化出的一种新的、具有抗肿瘤活性的植物蛋白质.采用变性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定malanin的相对分子质量.结果表明,malanin是一种双链蛋白质,由A、B 2条肽链通过二硫键连接而成,其相对分子质量约为65.94×103.方法具有简单、快速、直观的特点.     

硅胶柱层析粗提尿激酶的方法与分析

采用40—60目氧化硅胶作吸附剂,通过色谱层析和硫酸铵盐析分离提取了尿激酶(UK),并对粗品中酶的活力进行了测定,为45IU/ml,同时对蛋白质组分进行了SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分析。电泳结果显示11条区带,其中1～2条着色较深的区带与标准尿激酶(比活13万/mg蛋白)的区带的迁移率基本相同。表明选用40—60目硅胶粗提尿激酶具有较好的吸附和分离效果。     

HMG单一成分对转录活性的影响

使用北京鸭嗜多染红细胞核和DNA的转录体系测定了HMG单一成分和组合成分对转录活性的影响。结果表明,HMG_1+HMG_(2a)+HMG_(2b)抑制核转录的活性,而单一的HMG_1或HMG_(2a)或HMG_(2b)没有这种抑制作用。在DNA转录体系中,DNA的转录活性可被单一的HMG_(2a)或HMG_(2b)所抑制。HMG_(14)或HMG_(17)对核和DNA的转录都没有明显的影响,但是在核转录体系中,HMG_(14)+HMG_(17)在加样量为20μg时有明显的促进作用。