内切葡聚糖酶的纯化及其基本性质

纤维素酶是自然界碳素循环中的一种关键酶,它可以将纤维素性材料,转化为可直接利用的葡萄糖,并可通过其它酶和酶系统的作用转化为乙醇及蛋白质。纤维素酶是多酶体系,包含外切葡聚糖酶、内切葡聚糖酶(Cx)及β-葡萄糖苷酶。其中内切葡聚糖酶含有若干种同工酶,能将可溶性纤维素转化为还原寡糖,是纤维素酶系中的重要组分,为了深入研究Cx酶的性质,本文对其中一种Cx酶进行了分离纯化,并对其基本性质进行了研究。 1实验部分     

纤维素酶制剂中葡聚糖纤锥二糖水解酶活力的测定

根据真菌纤维素酶系中β-葡聚糖纤维二糖水解酶,内切β-葡聚糖酶以及纤维二糖酶在棉纤维上吸附和脱吸附性质的不同,拟订了一种可选择性地测定β-葡聚糖纤维二糖水解酶活力的方法。β-葡聚糖纤维二糖水解酶强烈吸附于棉纤维上,而且不为1 mol/L,pH4.8的醋酸缓冲液所洗脱;只有部分内切β-葡聚糖酶为棉纤维所吸附,但在上述条件下可完全被洗脱。纤维二糖酶不被吸附。在此基础上,再借助β-葡聚糖纤维二糖酶与内切β-葡聚糖酶的协同作用,可在后者过量存在的条件下,定量测定β-葡聚糖纤维二糖水解酶活力。用两种商品纤维素酶制剂验证了本方法的可靠性。     

巨大芽孢杆菌AP25内切葡聚糖酶基因的克隆及序列测定

从土壤中分离到一株产纤维素酶的巨大芽孢杆菌AP25,经羧甲基纤维素平板检测,该菌可产生葡聚糖内切酶。根据GenBank登录的β-1,4内切葡聚糖酶基因（DQ782954．1,M28332．1,AY859492．1）的同源性序列,利用PCR方法克隆到该酶的基因,并对其进行测序。测序结果显示其全长为1500bp,推测其含499个氨基酸。与GenBank中的已知葡聚糖内切酶相比较,发现该酶的氨基酸序列与Bacillus subtilis的β-1,4内切葡聚糖酶基因同源性达到达94％。     

用混合培养法提高木霉A10的纤维素酶活性

陕西省微生物研究所纤维素酶研究基地用纤维素酶生产的菌绿色木霉A10(Trichoderma viride A10),具有较高的产生内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶的能力,但其β-葡萄糖苷酶的产生能力较低。用改进的培养基和接种方法混合培养木霉和曲霉,不仅使β-葡萄糖苷酶活力比单纯培养木霉时提高3.2倍,而且內切和外切葡聚糖酶也同时增长24％和5％,滤纸酶活性增加59％.这种混合培养的方法为生产较高β-葡萄糖苷酶的纤維素酶提供了可能.     

绿色木霉葡聚糖内切酶cDNA基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

用L-山梨糖诱导绿色木霉(Trichoderma viride)AS3.3711纤维素酶基因的转录,提取其总RNA反转录获得cDNA。PCR扩增葡聚糖内切酶(EG)和葡聚糖内切酶(EG)的cDNA基因,将其克隆到酵母载体中,构建产生纤维素酶的酿酒酵母工程菌。重组菌株能够识别EG和EG自身携带的信号肽而将表达产物分泌到胞外,故可采用刚果红平板染色法筛选具有羧甲基纤维素酶(CMCase)活性的重组转化子。重组菌株表达的EG酶活在诱导70h时达到最高(为0.08U/ml),表达的EG酶活在诱导60h时达到最高(为0.03U/ml)。     

眉斑并脊天牛纤维素酶性质的研究

为了了解眉斑并脊天牛(Glenea cantor)纤维素酶的性质,选取以木棉树(Bombax ceiba)为食的眉斑并脊天牛为研究对象,按照IUPAC的标准测定方法,测定和定位眉斑并脊天牛肠道中的内切-β-1,4葡聚糖酶、纤维二糖酶以及滤纸酶活力,考察内切-β-1,4葡聚糖酶的最适pH值和最适温度.结果表明:在眉斑并脊...     

pH值对纤维素酶系内切β-葡聚糖苷酶活力影响的酶催化动力学模型

pH值是影响酶催化反应速率的重要因素之一，建立动力学模型有助于定量分析酶解反应。经典的“三状态”动力学模型未考虑pH值对底物解离状态的影响及产物抑制的作用，该文对“三状态”动力学模型进行改进。在一系列假设基础上提出绿色木霉产纤维素酶水解羧甲基纤维素钠（CMC-Na）的反应机理，建立了pH值对纤维素酶系内切β-葡聚糖苷酶活力影响的动力学模型，推导出反应速率表达式。Lineweaver-Burk作图法求得内切β-葡聚糖苷酶水解CMC-Na在不同pH的动力学参数：K＇m和V＇max，试验最佳初始pH值与模型计算pH值符合，从而模型得以验证。     

秋水仙碱对木霉F10纤维素酶系的诱变处理研究

纤维素酶是一种多组分起协同作用的复合酶系 .它通常包括内切型葡聚糖酶 (ＥＣ3 .2 .1 .4,也称Ｃｘ酶 )、外切型葡聚糖酶 (ＥＣ3 .2 .1 .91 ,也称Ｃ1酶、微晶纤维素酶 )和纤维二糖酶 (ＥＣ3 .2 .1 .2 1 ,也称β 葡萄糖苷酶 )等 3种主要组分[1～ 3 ] .不同来源的纤维素酶其酶系在组成上具有较大差别 ,其协同组合酶之种类、比例亦往往不同 ,即酶系中的各组分对菌株具有严格的专一性 .但是 ,当突变发生时 ,它们的构成比例将会有所变化[4] .一旦纤维素酶的各组分发生变化 ,则纤维素酶系的协同作用也可能发生变化 .因此 ,我们应设法获得某些纤维…     

微量量热法研究纤维素酶系中内切葡聚糖酶的酶催化反应

对绿色木霉产纤维素酶的内切葡聚糖酶进行了分离提纯.利用微量量热仪,研究了酸度,温度及金属离子对酶催化反应的影响,测出内切葡聚糖酶催化反应的热功率-时间曲线,根据曲线上的数据,按照热动力学理论和对比进度法解析出不同条件下酶催化反应的最大反应速率(Vmax)和米氏常数(Km),从而得到酶解的最佳酸度(pH=5.20),最佳温度(T=322.88 K)及金属离子对酶催化反应的抑制作用或激活作用的Vm-c方程.     

纤维素降解菌N2-10菌株β-1,4-内切葡聚糖酶基因的克隆及表达

为探究枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)N2-10菌株降解纤维素的机理,通过同源性比对设计兼并引物扩增菌株β-1,4-内切酶葡聚糖基因,并进行生物信息学分析,然后研究其在大肠杆菌中的表达情况.结果显示,该内切葡聚糖酶基因大小为1500bp,共编码499个氨基酸,具有典型的纤维素酶结构,SDSPAGE电泳检测其表观分子质量约为55ku;刚果红染色显示,表达产物具有纤维素酶活性.