FGFR2IIIc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌作用的研究

目的：研究FGFR2IIIc及其突变型腺病毒对小鼠乳腺癌的作用。方法：确定腺病毒颗粒Ad、Ad-FGFR2IIIc及Ad-FGFR2IIIcS252W感染4T1细胞的最佳MOI,并通过RT-PCR检测外源目的基因的表达。建立BALB/c小鼠的4T1乳腺癌模型,在此模型上原位注射重组腺病毒颗粒治疗17天,观察其对小鼠肿瘤的作用。结果：当MOI=60时腺病毒对4T1细胞的感染率可达到95%以上,RT-PCR结果显示,FGFR2IIIc和FGFR2IIIcS252W可在4T1细胞中成功表达。与对照组和Ad组比较,Ad-FGFR2IIIc对小鼠肿瘤无明显作用,Ad-FGFR2IIIcS252W能显著减缓小鼠肿瘤体积和质量的增长。结论：FGFR2IIIc对BALB/c小鼠4T1乳腺癌无显著作用,FGFR2IIIcS252W能够显著抑制BALB/c小鼠4T1乳腺癌的生长。     

cnksr2基因干扰腺病毒的构建及鉴定

构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒质粒载体并加以鉴定.根据小鼠cnksr2基因序列设计cnksr2干扰序列引物,定向克隆至穿梭载体pshuttle-H1的BglⅡ和HindⅢ位点,PmeⅠ酶切线性化的pShuttle-H1-Sicnksr2干扰质粒,并与腺病毒载体(pAdEasy-1质粒)共同转化E.coli BJ5183感受态细菌,产生重组腺病毒载体.用PacⅠ酶切线性化的回收质粒,转染293A细胞,包装腺病毒颗粒,在倒置显微镜下观察细胞病理性变化(Cell pathological effect,CPE),用TCID50法测定病毒颗粒的浓度,并初步观察病毒感染PC12细胞对目的基因的干扰效率.经酶切鉴定、测序证实成功构建小鼠cnksr2基因干扰腺病毒载体.包装的腺病毒浓缩悬液滴度为3.98×107PFU/mL.cnksr2在大鼠及小鼠中具有保守性,该病毒能在大鼠来源的PC12细胞中成功表达,并且对cnksr2基因干扰效率达50%以上.结论:成功构建了小鼠cnksr2基因的干扰腺病毒载体.     

山慈菇酯提物对4T1乳腺癌免疫微环境的影响

为探究山慈菇酯提物(Cremastra appendiculata,CrAp)体内外抗4T1乳腺癌的作用以及对4T1乳腺癌荷瘤小鼠免疫相关的分子机制的影响.采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测不同浓度(12500、1250、125、12.5、1.25、0.125μg/mL)的CrAp在24、48、72 h对4T1乳腺癌细胞的增殖抑制作用.100只BABL/c雌性小鼠植瘤成功后,随机分成空白对照组、模型组、阿霉素(adriamycin,ADM)阳性对照组、CrAp组以及CrAp+ADM组,每隔7 d小鼠称重一次,绘制体重曲线;每3 d测量小鼠肿瘤长径及短径,绘制肿瘤曲线;剥离癌组织,计算抑瘤率;取癌组织做苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色;ELISA法检测白介素-2(interleukin-2,IL-2)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)和白介素-10(interleukin-10,IL-10)含量的变化.TMT分析CrAp调控与4T1乳腺癌免疫相关的差异蛋白.结果表明:在MTT实验中,不同浓度的CrAp抑制率范围为13.48％ ～74.47％,其中CrAp(125μg/mL)在72 h抑制作用最强,抑制率为74.47％.乳腺癌荷瘤鼠体重明显降低;CrAp能明显增加乳腺癌小鼠的体重(P<0.01),并明显降低乳腺癌肿瘤体积(P<0.01).癌组织HE染色:模型组肿瘤细胞形态完好,数目较多,坏死区域少见;CrAp及CrAp+ADM组肿瘤细胞破裂以及胞核溶解,密度降低,并存在不同程度的死亡区域,且各给药组增加了乳腺癌中免疫细胞的数量.在癌组织中,与模型组相比,各药物组明显升高IL-2和IFN-γ的含量(P<0.01),而明显降低TNF-α和IL-10的含量(P<0.01).在体外,CrAp可抑制4T1乳腺癌细胞的增殖.在体内,CrAp能抑制4T1乳腺癌的增长,增加荷瘤小鼠的体重,改善乳腺癌荷瘤小鼠的生存.CrAp提高癌组织中免疫因子IL-2、IFN-γ的表达而降低TNF-α、IL-10的表达.此外,CrAp可以增强ADM抗4T1乳腺癌及免疫调节作用.     

二氢杨梅素对乳腺癌荷瘤小鼠化疗的增效减毒作用

为了探讨二氢杨梅素(DMY)对荷瘤小鼠阿霉素(ADM)化疗的增效减毒作用,建立4T1乳腺癌细胞Balb/C雌性小鼠体内移植肿瘤模型,观察DMY和ADM单用以及联合干预对小鼠移植瘤重、肺部转移灶和心肝毒性的影响.结果发现:与对照组(生理盐水溶液)相比,100 mg/( kg·d)的DMY对荷瘤小鼠瘤重及肌酸激酶、谷丙转氨...     

5种甘肃道地中药对衰老小鼠免疫功能影响的比较研究

目的:研究5种甘肃道地中药对衰老小鼠免疫功能影响的差异.方法:将70只健康小鼠随机分成正常组、模型组、纹党组、红芪组、当归组、大黄组和半夏组,采用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,检测每组小鼠的脾脏和胸腺指数,血IL-1、IL-2、IL-4含量及T淋巴细胞亚群,T淋巴细胞增殖能力,脾胸腺超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量.结果:与正常组相比,模型组小鼠脾脏和胸腺指数,血IL-1、IL-2、IL-4、CD4+T细胞和CD4+/CD8 +T细胞比值,脾T淋巴细胞增殖能力,脾和胸腺SOD、GSH-Px活性均显著降低,MDA含量显著升高(p＜0.05,p＜0.01).与模型组比较,各中药组小鼠脾脏和胸腺指数,血IL-1、IL-2、IL-4、CD4+T细胞和CD4+/CD8+T细胞比值,脾T淋巴细胞增殖能力,脾和胸腺SOD、GSH-Px活性均呈增高趋势,MDA含量均呈降低趋势,纹党组和红芪组上述指标改变更为明显.结论:纹党和红芪水提物对衰老小鼠某些免疫功能的调节作用优于当归、大黄和半夏.     

中等强度有氧运动通过抑制NF-κB通路过度激活影响4T1乳腺癌小鼠肿瘤生长研究

观察中等强度有氧运动对原位移植4T1乳腺癌小鼠模型肿瘤生长的影响,并探讨其相关机制. 40只雌性6周龄Balb/C小鼠被随机分为正常对照组(NC,n=10)和运动对照组(NCE,n=10),肿瘤模型组(TC,n=10)及模型运动组(TCE,n=10). TC,TCE组小鼠接种4T1细胞.其中NCE, TCE组以10 m/min, 60 min/次,5次/周的强度进行有氧运动干预,共计28 d.最后一次运动结束后48 h,分离小鼠血清和肿瘤,记录瘤体积和瘤质量.通过ELISA法检测血清白介素1β(IL-1β)和雌二醇(estradiol, E2)质量浓度,Western blot检测小鼠瘤组织中NF-κBP65和IκBα蛋白的表达.结果表明:4周有氧运动干预后,TCE组小鼠瘤体积和瘤质量均显著小于TC组(p0.05);与TC组相比,TCE组小鼠体内IL-1β(p0.05),E2质量浓度(p0.01)显著降低;与TC组相比,有氧运动干预显著下调了TCE组肿瘤组织NF-κBP65和IκBα蛋白的表达(p0.01).得出中等强度有氧运动干预能够起到抑制4T1乳腺癌肿瘤生长的作用,其机制可能与有氧运动能够降低炎症因子IL-1β,减少IκBα蛋白的激活以降低NF-κBP65入核,抑制转录过程的发生,从而抑制NF-κB信号通路过度激活有关.     

护肝布祖热颗粒对酒精诱导小鼠急性肝损伤的保护作用和作用机制

目的 探讨护肝布祖热颗粒对酒精性小鼠急性肝损伤的保护作用以及对NF-κb p65,Bax,Bcl-2及p-IκB ɑ蛋白表达水平的影响.方法 将72只昆明小鼠随机分为6组,分别为:空白组,模型组,护肝布祖热颗粒低剂量治疗组(1.25 g·kg-1),护肝布祖热颗粒中剂量治疗组(2.5 g·kg-1),护肝布祖热颗粒高剂...     

汉滩病毒嵌合基因G2S0.7重组腺病毒免疫学特性研究

对汉滩病毒糖蛋白 (GP)和核蛋白 (NP)的嵌合基因G2S0 .7重组腺病毒的免疫学特性进行研究。将汉滩病毒含有G2S0 .7嵌合基因的重组腺病毒直接免疫Balb/c小鼠 ,用ELISA、微量细胞培养中和实验及淋巴细胞增殖实验检测免疫应答效果 ,以研究嵌合基因的免疫效果。结果用该重组腺病毒免疫的小鼠 ,可诱导产生抗汉滩病毒NP及GP特异性的抗体 ,抗体效价分别为 1 :1 6 0及 1 :2 0。同时重组腺病毒还可刺激机体产生低水平的中和抗体和明确的淋巴细胞增殖反应。说明汉滩病毒嵌合基因G2S0 .7重组腺病毒 ,既可刺激机体产生特异性的抗汉滩病毒体液免疫应答 ,也可刺激机体产生特异性的细胞免疫应答 ,本研究为汉滩病毒基因工程疫苗的研究奠定了实验基础     

γδT细胞在乙肝病毒表面抗原转基因(HBs-Tg)小鼠肝纤维化模型中的作用

利用乙肝病毒表面抗原转基因(HBs-Tg)小鼠与γδT细胞缺陷型(TCRδ~(-/-))小鼠杂交,筛选出HBs-Tg-TCRδ~(-/-)小鼠.采用腹腔连续注射四氯化碳(CCl_4)的方式建立了小鼠肝纤维化模型,探讨了γδT细胞在HBs-Tg小鼠肝纤维化模型中的作用.结果表明:与HBsTg小鼠相比,HBs-Tg-TCRδ~(-/-)小鼠反映肝损伤和肝纤维化的相关指标ALT及α-SMA,TIMP1,COl1a1基因表达水平显著增高——肝纤维化更为严重——γδT细胞在HBs-Tg小鼠肝纤维化模型中具有保护作用.为今后γδT细胞对肝纤维化的治疗奠定了一定基础.     

汉滩病毒嵌合基因 G150.7 重组腺病毒免疫学特性研究

对本室已构建的汉滩病毒糖蛋白(GP)和核蛋白(NP)的嵌合基因GlS0.7重组腺病毒的免疫学特性进行研究.将汉滩病毒含有G1S0.7嵌合基因的重组腺病毒直接免疫Balb/c小鼠,用ELISA、微量细胞培养中和实验及淋巴细胞增殖实验检测小鼠的免疫应答效果.用该重组腺病毒免疫的小鼠,可诱导产生抗汉滩病毒NP及GP特异性的抗体,抗体效价分别为1:320及1:40.同时重组腺病毒还可刺激机体产生低水平的中和抗体和明确的淋巴细胞增殖反应.说明所构建的汉滩病毒嵌合基因G150.7重组腺病毒,可同时刺激机体产生特异性的抗汉滩病毒体液免疫应答及细胞免疫应答.     

小鼠结核分枝杆菌感染模型用于评价重组HBHA疫苗免疫效果的实验研究

目的通过复制小鼠结核病模型评价重组HBHA疫苗的免疫效果。方法将重组肝素结合血凝素(HBHA)疫苗接种BALB/c小鼠,观察其诱导的细胞免疫应答水平,并以MTB H37Rv毒株攻击免疫小鼠,研究重组疫苗诱导的保护力。结果重组HBHA免疫BALB/c小鼠后可诱发细胞毒作用,将体内MTB裂解。重组疫苗不仅能刺激CD4+T,CD8+T增殖、活化,还可诱导脾细胞分泌IFN-γ、IL-2等细胞因子。H37Rv毒株攻击后,被免疫小鼠的组织病理学症状减轻。结论本研究通过检测小鼠体内细胞免疫应答和肺脏组织病理学改变等指标,客观的反映了重组疫苗免疫小鼠结核模型的保护效果。     

金翁止痢颗粒对免疫低下小鼠的免疫调节作用

为探讨金翁止痢颗粒对免疫低下小鼠的免疫调节作用,将72只小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药物组、金翁止痢颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组,其中空白组小鼠给予生理盐水,模型组与各药物组小鼠腹腔注射环磷酰胺构建免疫低下模型．造模成功后,模型组给予生理盐水,阳性药物组给予2 g／kg黄芪多糖液,金翁止痢颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组分别灌胃20 g／kg ,16 g／kg ,12.8 g／kg的金翁止痢颗粒提取液,1次／d ,连续治疗7 d后,检测小鼠碳粒廓清指数、免疫器官指数,T／B淋巴细胞转化等指标．结果表明,金翁止痢颗粒能显著提高免疫低下小鼠碳粒廓清指数、免疫器官指数,促进 T／B淋巴细胞转化,与模型组相比差异极具有统计学意义（p＜0.01）,表明金翁止痢颗粒具有增强免疫低下小鼠免疫功能的作用．     

熊果酸对H22荷瘤小鼠抗肿瘤及免疫调节作用

目的 探讨熊果酸（UA）对H22荷瘤小鼠抗肿瘤作用及免疫功能的影响.方法 皮下移植建立H22荷瘤小鼠模型,腹腔注射不同剂量UA,检测抑瘤率和免疫器官指数,MTT法检测脾脏T、B淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测CD4＋、CD8＋T细胞亚群含量及比例,ELISA法检测血清细胞因子IL-2、IL-4和TNF-α的表达量.结果 UA对小鼠皮下移植性肿瘤H22有显著的抑制作用,可降低免疫器官中异常增大的脾指数,增强脾脏中T、B淋巴细胞增殖能力,提高淋巴细胞亚群CD4＋T细胞表达及CD4＋/CD8＋T细胞亚群比例,促进血清IL-2、TNF-α表达,降低IL-4表达.结论 UA可抑制小鼠肝癌H22肿瘤生长,体内可以提高荷瘤小鼠的免疫能力,其抗肿瘤作用可能与机体的免疫调节作用相关.     

扶正升血颗粒对荷H22瘤小鼠免疫功能影响的实验研究

目的:通过观察扶正升血颗粒对荷H22瘤小鼠免疫器官(胸腺、脾脏)重量、脾淋巴细胞增殖活性及细胞因子(IL-2)分泌的影响,探讨扶正升血颗粒对荷瘤小鼠免疫系统的调节作用.方法:采用荷H22(肝癌)实体瘤小鼠模型,用免疫器官重量法计算胸腺指数(TI)和脾脏指数(SI),用MTT比色法测定淋巴细胞增殖反应,用双抗体夹心ELISA法测定脾淋巴细胞培养上清液中IL-2的浓度.结果:扶正升血颗粒大、中、小剂量组荷瘤小鼠胸腺指数、脾脏指数均高于模型组,其中大剂量组TI、SI分别为18.9mg/10g、76.3mg/10g,较模型组分别增长36.0％、17.9％(p＜0.05);中剂量组TI为18.0mg/10g,较模型组增长29.5％(p＜0.05).扶正升血颗粒各剂量组荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性均高于模型组,以大剂量组作用最优,与模型组比较有显著性差异(p＜0.05).扶正升血颗粒各剂量组小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IL-2的浓度均较模型组增高,大剂量组IL-2的浓度为61.6pg/ml,与模型组比较有显著性差异(p＜0.05).结论:扶正升血颗粒对荷H22瘤小鼠免疫器官胸腺、脾脏具有增重作用,能够增强脾淋巴细胞增殖活性,促进荷瘤小鼠细胞因子IL-2的分泌,表明扶正升血颗粒能明显增强荷瘤小鼠机体的免疫功能.     

麝香开窍颗粒对小鼠记忆损害的影响

目的　观察麝香开窍颗粒对智力低下小鼠的疗效。方法　选用ICR小鼠 ,分为麝香开窍颗粒高、中、低剂量(4 0 0、2 0 0和 1 0 0g生药 kg)组 ,模型组 ,阳性对照组和空白对照组。连续灌胃给药 15d ,进行小鼠跳台、Y型水迷路及冰水游泳实验。结果　 (1)在跳台实验中麝香开窍颗粒能使小鼠获得性记忆障碍模型的触电潜伏期延长 ,遭受电击的错误次数减少 ,与模型组比较 ,有显著和极显著差异 (P <0 0 5和P <0 0 1)。 (2 )麝香开窍颗粒对戊巴比妥所致方向辨别障碍性模型动物有保护作用 ,从训练的第 4d开始 ,高、中剂量组方向辨别的错误次数与模型组比较 ,有显著性差异 (P <0 0 5 )。 (3)麝香开窍颗粒能在一定程度上提高机体的应激能力和耐受力 (P <0 0 5 )。结论　麝香开窍颗粒能明显地改善小鼠智力障碍     

痰热清注射液对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响

观察痰热清注射液对流感病毒FM1感染小鼠免疫功能的影响,并探讨其作用机制.采用流感病毒FM1感染小鼠模型,设正常对照组、模型组、利巴韦林阳性药物组、痰热清注射液大、中、小剂量组.分别用MTT法、淋巴母细胞法、巨噬细胞NO2-释放法、ELISA法测定T及B淋巴细胞的增殖功能I、L-2及IFN-γ的活性I、L-4及TNF-α浓度.痰热清注射液大、中、小剂量组明显增强流感病毒FM1感染小鼠的T,B淋巴细胞的增殖能力,并明显提高模型组T细胞培养上清中IL-2含量;痰热清注射液明显提高模型组肺匀浆中IFN-γ及IL-4含量,降低肺匀浆中TNF-α含量.痰热清注射液直接刺激T,B淋巴细胞的增殖,并通过细胞因子IL-2,IFN-γ,TNF-α等作用调控Th1与Th2细胞的平衡,增强机体的抗病毒免疫功能.     

水动力转染技术建造慢性乙型肝炎动物模型特效研究

摘要: 目的比较不同质粒建立的水动力转染乙型肝炎小鼠模型的特性。方法将pcDNA 3. 1-1. 3-HBV-C 与PAAV-1. 2-HBV-A 两种质粒通过水动力转染法建立两种乙型肝炎小鼠模型,通过对建模成功率和小鼠外周血HBsAg 滴度及稳定性,T 细胞指数流式等检测分析,比较不同模型差异和特效。结果转染pcDNA3. 1-1. 3-HBV-C质粒建模成功率为78. 6%,转染后体内HBsAg 滴度最高达到220IU/mL; 转染PAAV-1. 2-HBV-A 质粒建模成功率为56%,转染后体内HBsAg 滴度最高达到2 300IU/mL。建模小鼠的肝脏进行切片,做免疫组化后,观察实验结果,转染pcDNA 3. 1-1. 3-HBV-C 质粒的小鼠肝脏切片的HBsAg 免疫组化较PAAV-1. 2-HBV-A 质粒小鼠颜色面积更大。实验小鼠转染质粒后6 周的外周血进行流式细胞术检测,结果显示特异性T 细胞CD4 +、CD8 + 和正常小鼠比较,两种质粒的造模小鼠未有差别。结论利用水动力转染法用不同质粒建造乙型肝炎小鼠模型在乙肝病毒指标水平和稳定性方面有着显著差异。     

蒙药毛勒日达布斯-4汤散的解酒作用实验研究

目的:观察蒙药毛勒日达布斯-4汤散的解酒效果.方法:采用白酒和戊巴比妥钠诱导小鼠催眠,实验组分为模型对照组,酒宝葛灵颗粒阳性对照组和毛勒日达布斯-4高、中、低剂量等5组,观察高、中、低剂量毛勒日达布斯-4汤散及酒宝葛灵颗粒对小鼠的睡眠潜伏期和睡眠维持时间的影响.结果:与模型对照组比较给药组延长了睡眠潜伏期(P<0.01),明显缩短了睡眠维持时间(P<0.001).结论:毛勒日达布斯-4汤散能延长白酒和戊巴比妥钠所致的小鼠睡眠潜伏期并缩短其睡眠维持时间,可能具有解酒作用.     

异黑成熟颗粒对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用

 为研究异黑成熟颗粒对环磷酰胺诱导免疫抑制小鼠的非特异性免疫功能、体液免疫功能、细胞免疫功能的影响,将84只小鼠随机分为6组：正常对照组,环磷酰胺模型组,阳性对照组,异黑成熟颗粒低、中、高剂量组,每组14只。除正常对照组外,其他组小鼠均用75mg/kg环磷酰胺腹腔注射诱导免疫抑制小鼠模型,阳性对照组和异黑成熟颗粒组连续灌胃给药14d,1次/d。测定小鼠单核巨噬细胞吞噬功能、外周血T细胞亚群、NK细胞活性、白介素-1（IL-1）活性、白介素-2（IL-2）活性、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）活性、血清溶血素抗体生成（CH50）、迟发型变态反应等。结果表明,异黑成熟颗粒3个剂量组对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的单核巨噬细胞吞噬功能、外周血T细胞亚群数量、对2,4-二硝基氯苯（DNCB）诱导的迟发性变态反应、免疫器官重量和IgM、IgG值等均具有明显增强作用（P<0.05）;异黑成熟颗粒中、高剂量组明显增强小鼠NK细胞和TNF-α活性（P<0.05）;异黑成熟颗粒能提高小鼠IL-1和IL-2的活性（P<0.05）。异黑成熟颗粒对免疫抑制小鼠的免疫功能具有改善作用。     

全身性过表达和表皮特异性过表达胸腺素β4小鼠皮肤中目的基因表达差异分析

胸腺素β4(Thymosinβ4,Tβ4)能够促进毛发生长.旨在构建CAG启动子指导的全身性过表达Tβ4小鼠(CTP小鼠)和角蛋白14(Keratin14,Krt14)启动子指导的表皮特异性过表达Tβ4小鼠(KTP小鼠),比较两种转基因小鼠模型的Tβ4表达情况,为进一步研究Tβ4对毛发生长的影响以及其作用机制奠定基础.首先构建CAG启动子指导的全身性过表达载体pODsRed-CTP,然后用pODsRed-CTP和Krt14启动子指导的pODsRed-KTP表达载体,通过原核注射技术制作转Tβ4基因小鼠.PCR鉴定得到CTP小鼠2只,阳性率1.6%;KTP小鼠4只,阳性率8%.通过Real-time PCR检测Tβ4基因mRNA水平表达量,结果显示Tβ4在CTP小鼠皮肤中mRNA水平表达量是对照小鼠的1.24和1.13倍,在KTP小鼠皮肤中mRNA水平表达量分别是对照小鼠的4.22、1.84、4.60和2.74倍.Western blotting检测Tβ4在蛋白水平的表达,发现CTP小鼠皮肤中Tβ4蛋白的表达量没有显著变化,而KTP小鼠皮肤中Tβ4蛋白表达水平显著升高.与CTP小鼠相比,KTP小鼠更适合作为Tβ4过表达小鼠模型,深入研究Tβ4对毛发的影响以及作用机制.