污泥中真菌Penicillium lanosum NT-121的细胞毒活性产物研究

以来源于污泥的抗肿瘤活性真菌P. lanosum NT-121活性代谢产物研究为例, 探索污染环境中生物资源高值利用(即药源微生物新菌株资源开发)的新途径。采用活性跟踪分离的实验策略, 利用液液萃取、柱层析、重结晶等方法从该活性菌株的发酵液乙酸乙酯萃取物总浸膏中分离出3个化合物, 利用现代波谱技术结合文献对照鉴定其化学结构分别为5α,8α-过氧-(22E,24R)-麦角甾-6,22-二烯-3β-醇(1), 槲皮素(2), terrein(3)。用MTT法测试化合物1, 2, 3抑制K562细胞的IC₅₀ 值分别为 45.8, 563.8和6.5 μg/ mL。这3个化合物虽为已知化合物, 但均为首次在P. lanosum中发现, 且化合物1和3对K562细胞有一定增殖抑制活性。     

3-MA 对阿霉素诱导 K562、K562 / ADM 细胞凋亡及其相关基因 mRNA 表达的影响

目的：通过自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对阿霉素（ADM）诱导白血病K562细胞及K562／ADM细胞的细胞效应和自噬基因Beclinl、凋亡抑制基因SurvivinmR．NA表达的变化观察,探讨自噬在细胞凋亡中的作用和机制．方法：体外培养K562和K562／ADM细胞,采用MTT法分别检测ADM及3-MA预处理对K562、K562／ADM细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时RT—PCR法检测细胞自噬及凋亡相关基因（Beclinl、Survivin）mRNA表达的变化．结果：ADM可抑制K562与K562／ADM细胞增殖,且抑制作用呈现浓度与时间依赖性．ADM诱导组K562与K562／ADM细胞在24h、48h、72h细胞凋亡率均较空白对照组明显提高（P〈0．05）．在ADM诱导前,经3-MA预处理可使ADM诱导的K562与K562／ADM细胞抑制率和细胞凋亡率均较单用ADM显著提高（尸〈0．05）,Bedin1、SurvivinmRNA相对表达量均较单用ADM明显下降（P〈0．05）,呈正相关（r=0．827,P〈0．01）．结论：ADM可抑制K562、K562／ADM细胞的生长,并诱导细胞凋亡．3-MA通过抑制细胞的自噬可增强ADM诱导白血病细胞K562、K562／ADM的凋亡,其机制可能与下调BeclinlmRNA表达,而使Survivin表达受抑制有关．     

8-取代苯并呋喃[3,2-d]嘧啶类化合物的合成及其体外抗白血病细胞活性研究

设计合成14个8-硝基或8-氨基苯并呋喃[3,2-d]嘧啶类目标化合物(2a-g,3a-g),其结构经EI-MS、1H NMR和IR光谱确证。采用MTT法评价目标化合物对人白血病细胞K562体外增殖抑制活性,结果显示所合成化合物对K562细胞均具有一定的抑制作用,且8-氨基苯并呋喃[3,2-d]嘧啶类化合物的抗增殖活性均高于8-硝基苯并呋喃[3,2-d]嘧啶类化合物。     

3,3′-双取代-2-吲哚酮的合成及其抗肿瘤活性研究

以靛红(2,3-二酮二氢吲哚)及其衍生物作为先导化合物,利用活性结构单元拼接原理,通过Morita-Baylis-Hillman反应将3,3′-双取代-2-吲哚酮结构单元与丙烯酸酯基团构筑在同一分子中,合成系列3,3′-双取代-2-吲哚酮(3a—3r),结构经~1H NMR、~(13)C NMR和HRMS或MS表征。化合物3a—3r对于人白血病细胞(K562)和前列腺癌细胞(PC-3)的体外抗增值活性采用MTT法进行测定。药理活性研究表明,该类化合物对于K562和PC-3均有抗增殖活性,其中3j对K562的抗增殖活性最强,3r对PC-3的抗增殖活性最强,这两者的抗增殖活性分别为阳性对照物顺铂的2.85倍和4.24倍。     

抗肿瘤Dipodazine及其衍生物的合成与活性

以甘氨酸酐、吲哚或溴代吲哚为原料,通过氨基保护、亲电取代、羟醛缩合、脱保护等反应,以总产率10%~30%,设计合成了8个Dipodazine衍生物.这一系列化合物对白血病细胞(K562)、结肠癌细胞(HT-29)、肝癌细胞(HepG2)的体外抑制活性表明,N-1位氨基是活性必须基团,C-5位基团取代对活性影响比较大.     

以多药耐药基因为靶标的siRNA对耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡的影响

目的:研究应用以多药耐药相关蛋白(MRP)基因为靶标的siRNA( small interference RNA) 抑制相应蛋白表达后,耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率的改变.方法:通过脂质体将以MRP基因为靶标的siRNA(100 μmol/L)转入柔红霉素(DNR)0.8、1.6、3.2、6.4、12.8 μg/mL处理的肺癌耐药细胞株SW1573/R20;阿霉素(ADM)1.6、3.2、6.4、12.8、25.6 μg/mL处理的白血病耐药细胞株K562/ADM;顺铂(DDP)0.125、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 μmol/mL处理的鼻咽癌耐药细胞株CNE2/DDP;以单纯化疗处理组和未处理组为对照.于转染后24、48、72h,用MTT法检测各组细胞生长抑制率,算出各细胞IC50.转染siRNA联合IC50剂量化疗处理6 h后流式细胞仪检测各细胞凋亡率和死亡率,24 h后RT-PCR检测相应基因mRNA表达水平,48 h后检测MRP蛋白表达率.结果:以MRP为靶标的siRNA 明显抑制各肿瘤细胞靶基因蛋白和mRNA的表达,与未处理组相比均有统计学差异(P＜005);转染以MRP为靶标的siRNA后,耐药肿瘤细胞对化疗药物敏感性明显增强,IC50明显降低,细胞凋亡率明显增加,与单纯化疗组相比有统计学差异(P＜005).结论:以MRP基因为靶标的siRNA,通过降低靶基因mRNA和蛋白表达,明显增加耐药肿瘤细胞药物敏感性和凋亡率.     

RHD基因转录子的选择性剪切

通过RT-PCR技术分析红系细胞和非红系细胞RHD的转录情况，同时进一步比较不同D表达个体的RHD的转录关系.采用逆转录PCR（RT-PCR）技术检测HL-60,K562,Jurkat,THP-1,胚肺成纤维细胞系（HECF）,10名不同Rh表型个体的网织红细胞（CcDEe 3名,CCDEe 2名,CCDee 2名,CcDee 2名和CCDuee 1名）以及10名不同Rh表型（2 CCDEe,2 CCDee,2 ccDee,2 CcDee,ccDEe和CcDEe）个体的白细胞的RhD mRNA，然后进行cDNA测序分析.结果表明,HL-60,Jurkat,THP-1,胚肺成纤维细胞系（HECF）以及不同Rh表型个体的外周血有核细胞中除网状红细胞外皆不存在RhD mRNA，K562具有一个正常的RHD基因转录本，而不同表型个体的网织红细胞具有复杂的RhD cDNA形式，有的缺少RHD基因的外显子7,有的缺少外显子7～9或外显子4～9,但这些个体都有一个正常形式的RhD mRNA.由此得出结论,选择性剪切使RHD基因的产生多种形式的转录子，但这些不同形式的转录子仅来自红系的血细胞如网织红细胞和K562细胞系，白细胞、单核细胞、T淋巴细胞以及胚肺成纤维细胞都不具有RHD的mRNA.     

血小板对NK细胞杀伤K562细胞的影响

目的　探讨血小板对外周血纯化、扩增的NK细胞杀伤作用的影响.方法　使血小板与K562细胞在体外共孵育,以相差显微镜和流氏细胞仪检测血小板与K562细胞的粘附.从外周血单个核细胞(PBMC)中分离纯化、扩增NK细胞,以MTT法研究血小板对NK细胞杀伤活性的影响.结果　K562细胞体外能结合血小板,粘附率达到(25.0±4.3)%.血小板与K562细胞的粘附可抑制NK细胞对K562细胞的杀伤作用,且血小板对NK细胞杀伤活性的抑制呈数量依赖性.结论　血小板能粘附肿瘤细胞并能抑制NK细胞对K562细胞的杀伤作用.     

石蒜碱诱导人白血病K562细胞凋亡的研究

为研究石蒜碱诱导白血病K562细胞凋亡机制,采用体外细胞培养方式,通过CCK-8法描绘细胞生长曲线,测定细胞增殖活性,CCK-8结果显示石蒜碱能够抑制K562细胞生长,且呈现剂量依赖性,其IC50=4.13μmol/L.倒置显微镜进行细胞形态学观察,石蒜碱作用细胞后,细胞形态学发生改变.PI单染法检测细胞凋亡率,数据显示,石蒜碱诱导K562细胞的凋亡率与给药剂量呈正相关.Western-blot法检测P53蛋白表达情况,随着石蒜碱浓度的增加,P53活性增强(P0.05).结果显示,石蒜碱抑制白血病K562细胞增殖,诱导细胞凋亡,其凋亡诱导作用可能与细胞内P53基因的表达有关.     

原小檗碱衍生物诱导急性淋巴白血病细胞凋亡活性及PAMPA研究（英文）

测定了15个原小檗碱衍生物(3-17)及小檗碱(1)和药根碱(2)抑制急性淋巴白血病细胞(包括Reh和Nalm-6细胞)增殖的活性。其中化合物4(9-溴乙基小檗碱),5(9-氯乙基小檗碱)和6(9-溴丙基小檗碱)表现出最为突出的抑制活性:在Reh细胞中,IC50值分别为0.45、0.39和0.57μmol/L;在Nalm-6细胞中,IC50值分别为3.6,4.3和1.17μmol/L。活性均强于先导化合物小檗碱和药根碱(后两者的IC50值均大于20μmol/L)。此外,化合物4和5能够剂量依赖的通过裂解PARP诱导急性淋巴白血病细胞凋亡,降低procaspase-3的浓度,增加活性caspase-3水平,同时提高细胞质中的细胞色素C水平。进一步,Reh细胞用0.5μmol/L的4和5处理36 h,能够显著下调β-catenin蛋白的表达,以上实验结果证明了这类化合物抑制肿瘤细胞增殖的作用机制可能与Wnt/β-catenin通路相关。化合物1、4、5、7和11的PAMPA膜渗透实验说明,C-9位取代的小檗碱衍生物可以提高化合物的细胞膜渗透性。     

反义基因逆转肿瘤细胞多药耐药性和诱导细胞凋亡的研究

探讨克服肿瘤细胞多药耐药（ＭＤＲ１）性的方法,提高化疗效果。本文采用多药耐药反义基因（ＭＤＲ１－ＲＳＰＳ－ＯＤＮ）逆转Ｋ５６２／ＡＤＭ肿瘤细胞的ＭＤＲ１,诱导肿瘤细胞凋亡,发现ＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ诱导Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞株细胞产生大量ＤＮＡ断片,ＦＡＣＳ检测发现几乎全部ＭＲＤ＋Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞发生凋亡。其结果表明ＤＭＤＲ１－ＡＳＰＳ－ＯＤＮ能有效、特异地抑制ＭＤＲ１基因表达,逆转肿瘤细胞的ＭＤＲ１,促进阿霉素诱导ＭＤＲ＋１Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞凋亡,为其临床应用提供理论依据     

α一干扰素、异搏定协同逆转肾癌细胞药物耐受性

目的：探讨α-干扰素(α-IFN)、异搏定(VRP)对RCC-925肾癌细胞阿霉素敏感性的影响。方法：(1)将RCC-925肾癌细胞分别与不同浓度的逆转剂α-干扰素或异搏定或α-干扰素+异搏定及与不同浓度阿霉素(ADM)共同培养;MTT法检测肿瘤细胞的存活率。(2)图像分析仪检测逆转前后PgP(P-glycoprotein)表达。结果：单独应用α-干扰素无逆转作用;联合应用α-干扰素、异搏定显著逆转肿瘤细胞的耐药性,效果优于单用异搏定(P＜0．05);2．5 mg/L异搏定+500pg/mLα-干扰素共同与细胞作用后,PgP表达降低。结论：α-干扰素、异搏定作为逆转剂联合使用,能显著逆转RCC-925细胞的耐药性,可望为临床耐药肿瘤的治疗提供一种新的方法。     

羊脆木的化学成分研究(Ⅱ)

对滇产羊脆木(Pittosporum kerrii Craib)枝叶粗提物的有效部位进行化学成分研究.采用萃取、硅胶柱色谱、重结晶等方法,分离纯化得到8个单体,通过理化数据测定及波谱数据分析鉴定了它们的结构,分别是2-二十九烷酮(2-nonacosanone,1),1-二十九烷醇(nonacosan-1-ol,2),1-二十六烷醇(ceryl alcohol,3),三十二烷酸(lacceroic acid,4),三十烷酸(melissic acid,5),二十八烷酸(octacosanic acid,6),棕榈酸(palmitic acid,7),(2S,3S,4R,8E) -2-[(2R)-2-羟基二十三酰胺]-8-十八碳烯-1,3,4-三醇{(2S,3S,4R,8E)-2-[(2R)-2-hydroxytricosanoylamino]-8-octadecene-1,3,4-triol,8}.以上化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物8为首次从该属植物中分离得到.药理试验表明化合物7、8具有细胞毒活性,对K562细胞的IC50分别为10.0、15.0 μg/mL.     

用流式细胞术研究PKC及VRP，CsA对多药抗性细胞的调制与逆转

利用流式细胞术检测抗药性细胞内Ｒｈｏ－１２３的荧光强度作为检测抗性细胞抗性程度的指标，研究了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂Ｈ７，肿瘤促进剂佛波酯（ＴＰＡ）对多药抗性细胞的调节；钙离子通道阻断剂维拉帕米（ＶＲＰ），免疫抑制剂（ＣｓＡ）对多药抗性的逆转作用．测定了抗性细胞细胞膜和胞浆ＰＫＣ活性水平，指出ＰＫＣ可能通过磷酸化细胞膜上的Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）来调节多药抗性细胞的抗性水平，并提供了一种筛选多药抗性逆转药物的简便方法．     

Knockdown of <Emphasis Type="Italic">MRP4</Emphasis> by lentivirus-mediated siRNA improves sensitivity to adriamycin in adriamycin-resistant acute myeloid leukemia cells

Chemotherapy remains the standard treatment for acute myeloid leukemia;however,the emergence of drug resistance is a major hurdle in the successful treatment of leukemia.The expression of multidrug resistance-associated protein 4(MRP4)induces re- sistance in the adriamycin-resistant acute myeloid leukemia cell line,K562/ADR.The aim of this study was to investigate whether knockdown of MRP4 by lentivirus-mediated siRNA could improve the sensitivity of K562/ADR cells to adriamycin.Five lenti- virus-mediated short hairpin RNAs(lv-shRNAs-MRP4)were designed to trigger the gene silencing RNA interference(RNAi) pathway.The efficiency of lentivirus-mediated siRNA infection into K562/ADR cells was determined using fluorescence mi- croscopy to observe lentivirus-mediated GFP expression.MRP4 expression in infected K562/ADR cells was evaluated by real- time PCR and Western blot analysis.The MTS assay was used to measure cell viability and flow cytometry was used to measure apoptosis.The transfection efficiency of K562/ADR cells was over 80 percent.The gene silencing efficacy of lv-shRNA1-MRP4 was superior to the other constructs.Infection of K562/ADR cells with lv-shRNA1-MRP4 led to strong inhibition of MRP4 mRNA and protein expression.Combined treatment with lv-shRNA1-MRP4 and adriamycin decreased cell growth and increased apoptosis compared to treatment with lv-shRNA1-MRP4 or adriamycin alone.These data indicate that in K562/ADR cells MRP4 is involved in drug resistance mechanisms and that lentivirus-mediated knockdown of MRP4 may enhance sensitivity to adriamycin.     

Modulating multidrug resistance through inhibiting of protein kinase C activity by phenothiazines

In the present study, actions of phenothiazines(PTZ) in reversing multidrug resistance(MDR) and inhibiting PKC activity were investigated. It was found that the three PTZs caused 2.49, 36.58 and 75.78 fold reversal of K562/AO2 MDR cells resistant to adriamycin, respectively, while the chemosensitizer verapamil caused 40 fold reversal in the same condition, indicating that PTZ11 is a novel reversal agent of MDR and a potential chemotherapeutic reagent for tumor therapy. PKC activity analysis in the presence of PTZs showd that PTZ6 and PTZ11 inhibited rat brain protein kinase C activity in a manner of dose_dependent. The IC 50 values were (489.77±31.4) and (113±9.64) μmol/L, respectively. PTZ7 had no inhibition on PKC activity. Further study showed that PTZ11 could reduce PMA_mediated activation of PKC in a manner of dose_dependent, suggesting that PTZ11 might compete for the high_affinity phorbol ester binding site within PKC molecule. Recently, an X_ray structure of PMA in complex with PKC Cys2 activator_binding domain was solved. We therefore decided to explore the possible binding model of PTZ11 with PKC molecule using SYBYL 6.02 program. It was shown that the binding site of PTZ11 with PKC molecule partially overlapped with that of PMA, providing for the first time new data for designing PKC inhibitors and MDR reversal drugs.     

木犀草素和木犀草苷对K562细胞增殖的影响

选择合适浓度的DMSO溶剂,观察和比较糖苷和苷元对K562细胞增殖的影响．采用MTT法测定DMSO、木犀草素和木犀草苷对K562细胞增殖的影响,对结果进行了统计分析．处理结果显示：DMSO作为溶剂对K562细胞增殖产生影响的最小的浓度为0．1％．梯度实验显示：木犀草素和木犀草苷同它们的抑制作用都有量效关系．结果表明：最好选用0．1％DMSO作为观察药物影响K562细胞增殖实验的助溶剂,浓度偏大或偏小都会表现出它对K562细胞增殖的影响;在0．1％DMSO中,木犀草素和木犀草苷对K562细胞增殖均可表现出抑制作用,且呈浓度依赖性;木犀草苷的作用比木犀草素强;1．15umol／L的木犀草苷在水溶液中的作用比在0．1％DMSO中的强,且差异极其显著．     

青龙衣的化学成分和抗肿瘤活性研究

研究青龙衣的化学成分及抗肿瘤活性.利用硅胶柱色谱和开放ODS柱色谱等分离技术从青龙衣的95%乙醇提取物中分离得到了11个化合物,通过理化性质、波谱数据分析等方法,鉴定了全部化合物结构.采用MTT法,选取人胃癌细胞株(SGC7901),人肝癌细胞株(Hep G2),人肺腺癌细胞株(A549),乳腺癌细胞株(MCF7),结肠癌细胞株(Lo Vo)对化合物体外抗肿瘤作用进行筛选.从青龙衣中分离鉴定了11个化合物,分别为正二十九烷醇(nonacosanol)(1),[1-(4'-甲氧基苯基)-7-(3'-甲氧基,2'-羟基苯基)-3',4'-环氧-3-庚酮[3',4'-epoxy-1-(4'-methoxylphenyl)-7-(3'-methoxyl-2'-hydroxyphenyl)-heptane-3-one](2),正三十一烷醇(hentriacontanal)(3),1-(4'-羟基苯基)-7-(3'-甲氧基-4'-羟基苯基)-庚烷-3-醇[1-(4'-hydorxyphenyl)-7-(3'-methoxy-4'-hydorxyphenyl)-hepta-3-ol](4),4,6-二羟基-3,4-二氢-1-萘酮(4,6-dihydroxy-3,4-dihydro-naphthalenone)(5),胡桃醌(5-hydroxy-1,4-naphthoquinone)(6),β-谷甾醇(beta-sitosterol)(7),齐墩果酸(oleanolic acid)(8),香草酸(vanillic acid)(9),槲皮素(quercetin)(10),香草醛(vanillin)(11).化合物5、10对肿瘤细胞均有很强的生长抑制作用,IC50≤35μmol/L.化合物8对肿瘤细胞有较强的生长抑制作用,IC50≤58μmol/L.化合物2、3、6和7对个别肿瘤细胞有作用,其他化合物对肿瘤细胞没有生长抑制作用.11个化合物均为已知化合物,其中化合物1,3,10,11为属内首分,化合物5、8和10均具有较显著的抗肿瘤活性.