水稻中一个与花发育相关的MADS-box基因的表达检测

根据MADS－box基因的保守区结构，设计简并性引物，利用RT－PCR从水稻（Oryza sativa L.)中克隆到一个新的水稻MADS－box基因cDNA睛段，将它命名为FDRMADS5．该基因核苷酸序列851bp,编码160个氨基酸，有典型的植物MADS－box基因的结构，FDRMADS5的Southern分析，表明它为单拷贝基因，用Northern检测了FDRMADS5的表达情况，发现该基因除了在花中有表达外，在水稻的根尖和幼苗端中也有微量的表达，这一结果表明，水稻的MADS－box基因功能可能并不局限于控制花的发育。     

CTLL—2／MTT法快速测定IL—2基因转移效率的研究

应用包装ＩＬ－２基因的逆转录病毒载体，将ＩＬ－２基因导入小鼠成纤维细胞ＮＩＨ－３Ｔ３和小鼠黑色素瘤细胞Ｂ１６，建立了ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－２，ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７和Ｂ１６／ＩＬ－２－４等３个转基因细胞株，应用ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法快速测定各转基因细胞株分泌上清ＩＬ－２的浓度．转染效率最高的ＮＩＨ－３Ｔ３／ＩＬ－２－７其ＩＬ－２分泌量高达１４２２ｕ／（１０６ｃ·２４ｈ），表明这一基因转移系统能有效地将外源基因导入靶细胞．ＣＴＬＬ－２／ＭＴＴ法能快速、简便、有效地检测ＩＬ－２的表达．     

eglinC基因的化学合成与克隆

采用固相亚磷酰胺法合成了ｅｇｌｉｎＣ全基因，该基因全长２２１ｂｐ，包括其结构基因，５’－端起始密码子ＡＴＧ和３－端终止密码子ＴＡＧ，并在基因的５－和３－分别装上ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ位点。共分１２个片段，采取分段合成，酶促连接成完整的ｅｇｌｉｎｇＣ基因。合成的基因克隆于Ｍ１３载体，经杂交，检测，筛选出含ｅｇｌｉｎＣ基因的克隆。用双脱氧链终止法测其序列，结果与设计的一致。     

α—珠蛋白基因的PCR检测

用多对引物的复合ＰＣＲ技术，分别扩增α－珠蛋白基因族中α１和α２基因片段；参照β－珠蛋白基因ＰＣＲ扩增产物量，判断α１和α２基因是否正常，是否为缺失的纯合子或杂合子，对α－地中海贫血症先征者家系基因型进行ＰＣＲ分型诊断。     

β-hCG重组基因在几种哺乳类细胞中的表达

为探讨用哺乳类细胞表达β-hCG基因。将重组β-hCG基因导入L－1和CNE－2细胞，在L－1细胞中得到10ng／mL的β-hCG，在CNE－2细胞中有7ng／mL的β-hCG，而且β-hCG还能在传代培养的L－1和CNE－2细胞中产生。再将重组β-hCG基因和dhfr基因其导入CHO细胞，在培养液中得到6．85mg／mL的表达量，说明β-hCG重组基因在哺乳类细胞中有表达功能，但尚未获得能稳定表达β-hCG的单克隆CHO细胞株。     

MYC基因在人类HL—60和CEM癌细胞系中原位表达的研究

以细胞分子原位杂交方法对两种不同类型的人类白血细胞系ＨＬ－６０和ＣＥＭ，以及正常人白细胞中Ｃ－ｍｙｃ基因的表达进行了比较研究。结果证明：ＨＬ－６０细胞中Ｃ－ｍｙｃ基因有异常高水平的表达；而在ＣＥＭ细胞和正常人白血球与淋巴细胞中则没有明显的Ｃ－ＭＹＣ转录产物，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分析表明，ＨＬ－６０细胞基因组中Ｃ－ｍｙｃ基因的异常高水平表达，与该基因的大量扩增紧密相关，还对两种癌细胞系的癌变机理和细胞原     

在大肠杆菌中利用反义RNA抑制乙肝病毒（HBV）X基因的表达

将乙肝病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ株完整的Ｘ基因正向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２１的ＰＬ启动子下游，得到能表达Ｘ蛋白的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＶ（＋）；同时将Ｘ基因反向重组到原核表达质粒ｐＢＶ－２２０的ＰＬ启动子下游，得到能转录Ｘ基因反义ＲＮＡ的重组质粒ｐＢＶ－ＨＢＸ（－）。利用这两个质粒，构建出能同时转录Ｘ基因ｍＲＮＡ和反义ＲＮＡ的重组质粒ｐＥＸ。ＡＮ－ＨＢＸ，并在原核水平上，证实了反义ＲＮＡ对Ｘ基因的表     

基因拷贝数分析的研究

基因拷贝数分析的研究王瑛（中国科学院动物研究所，北京，１０００８０）陈来同（北京大学生命科学学院，北京，１００８７１）关键词基因拷贝数；单倍体基因组；α１－抗胰蛋白酶基因；大鼠ＲＡＬＲＳ－１重复序列中图分类号Ｑ５７８基因拷贝数（ｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒ）...     

小麦高亲和力NO3-转运体基因相关序列的克隆与表达分析

根据已知高亲和力ＮＯ３＾－转运体基因－大麦ＢＣＨ１和衣藻ＮＲＴ２；１Ｃｒ两者之间的保守多肽序列，设计一对简并引物，通过ＲＴ－ＰＣＲ，从小麦根总ＲＮＡ中，获得高亲和力ＮＯ３＾－转运体基因ｃＤＮＡ片段ＴａＮＲＴ１（６５７ｂｐ）。ＴａＮＲＴ１与已知８种高等植物的高亲和力ＮＯ３－转运体基因具有很高的同源性。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ显示该基因讯速表达，４ｈ左右最强，２４ｈ左右恢复至诱导前水平。     

肠炎沙门氏菌2种rDNA 16s—23s基因间隔区序列分析

采用凝胶分离ＰＣＲ产物的方法，对肠炎沙门氏菌中种ｒＤＮＡ１６ｓ－２３ｓ基因间隔区进行克隆和序列分析。肠为沙门氏菌小ｒＤＮＡ１６ｓ－２３ｓ基因间隔区，全长３５４个碱基对，包含１个谷氨酸ｔＲＮＡ基因。大ｒＤＮＡ１６ｓ－２３ｓ基因间隔区，全长５１８个碱基对，其中包含异亮氨酸和丙氨酸２个ｔＲＮＡ基因。它们分别与大肠杆菌的２个ｒＲＮＡ操纵子ｒｒｎＥ和ｒｒｎＨ有较高的序列相似性。肠炎沙门氏菌大ｒＤＮＡ１６ｓ－     

核酶转基因载体的构建及在烟草原生质体中对TMV感染的抑制 …

设计切割烟草花叶病毒ＲＮＡ的锤头型核酶Ｒｚ－２，分别以ｐＫｙＬｘ７和ｐＢｉｎ１９为载体，构建含Ｒｚ－２基因及核酶和底物连接的ＲｚＳｂ－２基因的重组质粒，通过三亲交配将目的基因转入土壤农杆菌中的Ｔｉ质粒。     

α—珠蛋白基因缺失的DNA扩增指纹图谱法分析

应用计算机辅助设计，选择α－珠蛋白基因族中断裂好发部位或其外侧一致ＤＮＡ序列设计引物，在包含低温退火的条件下，扩增并分析α－珠蛋白基因缺失的ＤＮＡ指纹图谱，并据此对６１例α－地中海贫血病人进行了基因分型诊断。该方法稳定、可靠，可望用于临床诊断。     

质量—数量性状的遗传参数估计：Ⅱ.利用DH群体或RIL群体

采用混合分布理论与极大似然法，拓展了适用于双单倍体群体（ＤＨ）和重组近交系（ＲＩＬ）群体的质量－数量性状的遗传分析方法，提此方法可以鉴别主－微基因的存在，了解主基因的作用方式，估计主－微基因的遗传效应和方差等遗传参数。     

NaCl诱导表达的盐藻果糖-1,6-二磷酸醛缩酶基因克隆及原核表达

通过RACE技术克隆到盐藻（Dunaliella salina Teod.)果糖－1，6－二磷酸醛缩酶（DsALDP)的全长cDNA,对其序列分析及在GeneBank中进行同源搜索，发现DsALDP基因属于果糖－1，6－二磷酸醛酶基因家族，其与植物叶绿体果糖－1，6－二磷酸酯缩酶（AldP)基因的一致性为73％－66％。Northern杂交结果及醛缩酶活性分析均表明它角为在盐诱导下特异表达。将DsALDP cDNA构建到pET32a载体上，转入E.coli BL21进行表达分析。IPTG诱导后可以检测到－62ku基因产物大量表达。经不同浓度NaCl处理，表达DsALDP基因产物的细菌耐盐性明显高于对照组。     

AcNPV增强子hr5增强HBsAg基因表达的研究

用形成包涵体（ＯＯＣ＋）并能利用人工合成启动序列和多角体ＸＩＶ启动子表达外源基因的转移载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３将多角体基因、乙型肝炎病毒表面抗原（ＨＢＳＡｇ）基因和苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）的增强子ｈｒ５部分序列同时插入无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－Ｇ基因组中，得到两株高效表达ＨＢｓＡｇ基因又形成包涵体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ３５－ＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ２６－ＯＣＣ＋．对重组病毒的酶切鉴定、ＤＮＡ斑点杂交和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证实，外源基因及其相应的启动子和增强子序列已正确插入病毒基因组中．插入顺序中，ｈｒ５增强子是插入ＨＢｓＡｇ基因下游，多角体基因与ＨＢｓＡｇ基因方向相反．１２５Ⅰ－固相放射免疫检测和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果表明，ＨＢｓＡｇ基因在昆虫离体细胞中得到高效表达并保留了抗原活性．ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ２６－ＯＣＣ＋和ＴｎＮＰＶ－ｓｈｒ３５－ＯＣＣ＋表达的ＨＢｓＡ吕蛋白与没有插入增强子序列的重组病毒ＴｎＮＰＶ—ＨＢｓ８５－ＯＣＣ＋的比较，分别提高了４０％和４６％．     

多能硫杆菌1,5-二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶基因的启动子克隆和表达

将３．４ｋｂ的多能硫杆菌１，５－二磷酸核酮糖羧化酶／加氧酶基因（ｒｂｃＬ－ｒｂｃＳ）片段亚克隆到启动子探测质粒载体ｐＫＬ６的ＨｉｎｄⅢ位点，该基因片段能够启动ｐＫＬ６的ｌａｃ基因的表达，说明３．４ｋｂ的ｒｂｃＬ－ｒｂｃＳ基因带有自己的启动子．     

6个氨基酸小C肽人胰岛素原类似物基因的构建和表达

用片段置换法，从在Ｃ肽两端具有酶切位点的双突人胰岛素原因中，将Ｃ肽基因替换成含Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｙｓ６个氨基酸小Ｃ肽基因。将这个小Ｃ肽岛素原类似物基因重组到具有Ｔａｃ启动子的质粒中，并与部分牛凝乳酶原基因融合，在Ｅ．ｃｏｌｉ中得到了高效表达。表达的ＢＣ＇Ａ融合蛋白占菌体总蛋白的１６％。表达产物以包含体形式存在，经ＣＮＢｒ裂解及磺酸，再经复性后，具有对胰岛素的放射免疫活性。     

Quox—1基因同源序列在豚鼠精子形成中的表达

以地高辛标记的Ｑｕｏｘ－１基因ｃＤＮＡ的ｃ３片段为探针，与豚鼠基因组ＤＮＡ作Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，结果表明，在豚鼠基因组中存在Ｑｕｏｘ－１基因同源序列，以抗ＱＵＯＸ－１蛋白的特异性抗体对成年豚鼠睾丸，附睾和幼年豚鼠睾丸的组织切片进行免疫组织化学分析，发现在豚鼠精子发生中精子细胞分化为精子阶段有类ＱＵＯＸ－１蛋白提示Ｑｕｏｘ－１基因同源序列可能对豚鼠精子发生中的精子形成过程有调控作用。     

研究聚ADP核糖基化作用与细胞恶变关系的双基因真核表达重组体的构建

本文将聚ADP核糖聚合酶基因1．4kb部分序列反向插入真核表达载体pMAMneo和pSMG中，同时12位密码子突变的活化ras癌基因也一同克隆到上述载体中，从而获得具有不同真核基因筛选标记的双基因真核表达重组体pMAMneo－Cl．4－T24，pMAMneo－Cl.4－arT24，及pSMG－Cl．4-T24，上述质粒的构建成功为研究聚ADP核糖基化作用与细胞恶变的关系提供了一种新的分子模型．     

农杆菌介导外源基因进入油菜的研究

用甘蓝型油菜子叶为外植体，以农杆菌共培养法将苏云金杆菌δ－内毒素基因和ＮＰＴＩ基因导入油菜．所用的农杆菌为ＬＢＡ４４０４－δ（ｄｉｓａｒｍｅｄｐＡＬ４４０４，ｐＧＡ６４３－δ）．ＰＧＡ６４３－δ为表达载体，其中克隆有ＮＰＴＩ基因和δ－内毒素基因．共培养４ｄ后，转化的子叶被转入含有卡那霉素（Ｋｍ）的分化培养基［１］上，分化出芽．被切下的芽在含有Ｋｍ的生根培养基［２］上生根，移栽后成活的小抗Ｋｍ油菜苗生长良好．用ＤＮＡ分子杂交、ＥＬＩＳＡ分析和生物测定等方法证明外源基因被转移到油菜中．