从寄主昆虫血淋巴中分离纯化病原真菌菌体的方法

采用正交实验方法，对东亚飞蝗（Locusta migratoria）血细胞裂解及其DNA和RNA降解的条件进行了优化．在优化条件下，不仅去除了感病东亚飞蝗血淋巴中的血细胞及DNA和RNA。而且成功地分离和纯化了绿僵菌（Metarhizium anisopliae）菌体．裂解血细胞及其DNA和RNA的最佳酶解条件为：蛋白酶K的浓度为1mg／mL，作用温度为26℃，时间为60min，脱氧核糖核酸酶（DNAase I）的用量为5U，核糖核酸酶（RNAaseA）的浓度为0．5mg／mL，作用时间为35min，作用温度为30℃．以蝗虫特异引物进行PCR及RT-PCR检测结果表明，从绿僵菌侵染后的蝗虫血淋巴中分离纯化无蝗虫DNA和RNA污染的绿僵菌菌体，为后续分离和克隆绿僵菌侵入蝗虫体内后表达的基因，研究它们在致病机理中的作用奠定了基础．     

绿僵菌与小檗碱复配制备水分散粒剂

将金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）和小檗碱复配为水分散粒剂，可以起到既抗虫又抗病的双重效果，并且可降低田间施药的成本。测得小檗碱对绿僵菌的有效中浓度（EC₅₀）为47.2 mg/mL，表明小檗碱对绿僵菌没有明显的抑制作用；根据以往绿僵菌的田间试验及小檗碱的抗真菌实验，确定小檗碱的最终添加量为3%（质量分数）。在单因素试验的基础上，利用响应面法确定水分散粒剂的配方为：25%绿僵菌孢子粉、3%小檗碱、3%乳化剂NP-10（润湿剂）、2.1%亚甲基双甲基萘磺酸钠（分散剂）、5.3%木质素磺酸钙（分散剂）、18%海藻酸钠（崩解剂）、1.7%羧甲基纤维素钠（黏结剂），用硅藻土（载体）补足100%（均为各成分占制剂的质量分数）。按照此配方在造粒机中制备了水分散粒剂，质量检测结果表明：所制备的水分散粒剂的崩解时间为174 s，孢子萌发率为85.4%，孢子悬浮率为86.34%，含水量为1.88%，杂菌率为2.01%，符合相关行业标准。     

绿僵菌与小檗碱复配制备水分散粒剂

将金龟子绿僵菌（Metarhizium anisopliae）和小檗碱复配为水分散粒剂，可以起到既抗虫又抗病的双重效果，并且可降低田间施药的成本。测得小檗碱对绿僵菌的有效中浓度（EC₅₀）为47.2 mg/mL，表明小檗碱对绿僵菌没有明显的抑制作用；根据以往绿僵菌的田间试验及小檗碱的抗真菌实验，确定小檗碱的最终添加量为3%（质量分数）。在单因素试验的基础上，利用响应面法确定水分散粒剂的配方为：25%绿僵菌孢子粉、3%小檗碱、3%乳化剂NP-10（润湿剂）、2.1%亚甲基双甲基萘磺酸钠（分散剂）、5.3%木质素磺酸钙（分散剂）、18%海藻酸钠（崩解剂）、1.7%羧甲基纤维素钠（黏结剂），用硅藻土（载体）补足100%（均为各成分占制剂的质量分数）。按照此配方在造粒机中制备了水分散粒剂，质量检测结果表明：所制备的水分散粒剂的崩解时间为174 s，孢子萌发率为85.4%，孢子悬浮率为86.34%，含水量为1.88%，杂菌率为2.01%，符合相关行业标准。     

不同菌株绿僵菌对粒肩天牛幼虫的致病力及林间防治效果

粒肩天牛是福建省杨树林的一种主要害虫,此次研究应用7株金龟子绿僵菌菌株对该天牛幼虫进行生物测定,旨在筛选出感染该虫的高致病力菌株,为生物防治提供新的资源。结果表明:感染Ma1291-2和Ma1775两个绿僵菌菌株14 d后,天牛幼虫的校正死亡率分别为89.47%和88.92%;Ma1291-2和Ma1775两个绿僵菌株对天牛幼虫的致死中时间(LT50)分别为5.62和5.82 d,孢子致死中浓度(LC50)分别为1.70×104个/mL和6.16×104个/mL。说明绿僵菌Ma1291-2和Ma1775两个菌株对该天牛幼虫的致病力强,不仅致死率高,且致死速度快,僵虫率高,应以浓度为1.5×108个/mL的孢子悬浮液进行林间防治,效果良好。     

紫外线-亚硝酸复合诱变选育高抗逆性绿僵菌的初步研究

为提高绿僵菌孢子的抗逆性,延长储存期和对环境的稳定性,利用紫外线-亚硝酸对绿僵菌M105-3进行复合诱变,选育出孢子海藻糖含量显著提高的耐储藏诱变株M105-32;250℃下贮存,初步试验表明孢子半衰期由96.6d提高到144.9d,通过孢子紫外线抗性、耐热性和耐储藏性测定,诱变株比出发菌株的耐抗紫外线、耐热性及储藏性均有了显著提高.     

一株绿僵菌的分离鉴定及对桃小食心虫的致病力研究

从山西临汾襄汾景毛乡果园罹病的桃小食心虫Carposina sasakii(Matsumura)(Lepidoptera:Carposini-dae)幼虫虫尸中分离纯化获得一株新菌株,命名为TSL06.通过对该菌株的培养性状、光学显微和扫描电镜下的形态特征观察,以及ITS基因序列分析,鉴定出TSL06菌株为绿僵菌属Metarhizium Sorokin的金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae(Metsch.)Sorokin.用该菌株的5种浓度孢子悬液对桃小食心虫幼虫进行毒力试验,结果表明,浓度为1.2×109孢子/mL的孢子悬液对桃小食心虫幼虫的校正致死率最高,达到86.08%.     

低分子量壳聚糖对猕猴桃灰霉病的抑制作用

壳聚糖对多种果蔬采后病害具有抑制作用。文章对比了低分子量壳聚糖(low molecular weight chitosan, LMWC)和高分子量壳聚糖(high molecular weight chitosan,HMWC)对猕猴桃灰霉病的抑制效果,以及两者对灰霉病菌孢子萌发和对猕猴桃免疫反应的诱导作用差异。结果表明,LMWC和HMWC均可显著降低猕猴桃病斑直径以及灰霉病菌孢子萌发率,而LMWC的抑制效果比HMWC更显著;LMWC和HMWC均可诱导猕猴桃产生活性氧,LMWC处理组中,过氧化氢酶、过氧化物酶、苯丙氨酸解氨酶和酪氨酸解氨酶活性均显著升高,在HMWC处理中,仅过氧化物酶和酪氨酸解氨酶活性受到显著诱导,LMWC对猕猴桃抗性的诱导作用比HMWC更强。     

球囊菌黑色素样色素的亚细胞定位及感染功能初探

【目的】鉴定黑色素样色素在球囊菌(Ascosphaera apis)孢子的定位情况，分析它在球囊菌感染意大利蜜蜂(Apis mellifera)(以下简称意蜂)幼虫中的作用。【方法】以黑色素提取法提取和纯化球囊菌孢子的黑色素样色素，制备多克隆抗血清。通过间接免疫荧光定位技术分析类黑色素在孢子中的定位特征。分别以含有孢子、黑色素样色素、孢子及黑色素样色素、磷酸缓冲液的饲料喂食意蜂3龄幼虫，统计幼虫存活率，探讨黑色素样色素在孢子感染幼虫中的作用。【结果】经分离和纯化得到了球囊菌黑色素样色素，并将它注射入小鼠(Mus musculus)体内后成功制备了多克隆抗血清。间接免疫荧光亚细胞定位结果显示黑色素样色素主要分布在球囊菌孢子壁上。感染分析结果表明：与正常摄食对照组和磷酸缓冲液对照组相比，添食球囊菌孢子使意蜂幼虫存活率有统计学意义上的下降(p<0.05)，单独添食黑色素样色素对意蜂幼虫存活率没有统计学意义上的影响；较单独添食孢子处理而言，同时添食球囊菌孢子和黑色素样色素使意蜂幼虫存活率有统计学意义上的下降(p<0.05)。【结论】球囊菌黑色素样色素定位于球囊菌孢子的细胞壁上，潜在的参与了球囊菌孢子对蜜蜂幼虫的感染。     

家蚕病原的超微结构及其致病机制

三、绿僵菌大多感染三龄以后的家蚕幼虫,分生孢子发芽慢,病程也较长,近来证明,绿僵菌感染家蚕,以破坏素(Destruxin)杀死寄主占主要作用。破坏素有多种,其共同的结构式如下:     

绿僵菌菌剂中试生产基地建设

介绍了国内外绿僵菌资源的开发现状以及山西省在绿僵菌研究方面所做的工作,阐述了绿僵菌菌剂中试生产基地建设项目的计划目标、主要研究内容、实施年限、经费预算、必要的支撑条件、组织措施及实施方案。     

粘虫血淋巴溶菌酶的纯化及其对染病小白鼠的初试

给粘虫注射大肠杆菌，血淋巴中溶菌酶活性增强，然后用琼脂糖（ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅ）离子交换层析法纯化溶菌酶。小白鼠先注射致病的阴沟肠杆菌，一小时后腹腔注射从粘虫免疫血淋巴纯化的溶菌酶，结果处理小白鼠死亡率比对照组低，说明试虫血淋巴中的溶菌酶在小白鼠体内可能有一定的抗菌作用。     

美洲大蠊下颚须扫描电镜观察

下颚须为美洲大蠊(Periplaneta americana)触角以外头部最长的附属构造,生于下颚,靠近口部,应是与蜚蠊取食活动有重要关系的器官。至今未见关于下颚须细微形态的报道,而关于触角超微结构的研究却很多。作者首次用扫描电镜观察了下颚须的细微构造,以期为将来蜚蠊饮食行为的研究提供形态学方面的基础资料。     

灌胃双歧杆菌BB1对免疫低下小鼠非特异性免疫功能的影响

目的评定双歧杆菌(Bifidobacteria)对免疫低下小鼠非特异性免疫的调节作用。方法小鼠腹腔注射环磷酰胺,建立免疫低下模型,对其进行巨噬细胞吞噬试验。结果灌胃中、高剂量的双歧杆菌能提高小鼠巨噬细胞的吞噬能力。结论双歧杆菌BB1可增强免疫低下小鼠的非特异性免疫功能。     

美洲大蠊的生药学及分子生药学鉴定

运用生药学及分子生药学方法，对美洲大蠊的中药材特征进行鉴别。采用高效体视显微镜和生物数码显微镜对美洲大蠊的性状特征及其粉末显微特征进行观察记录，并利用分子鉴定方法对美洲大蠊DNA做PCR扩增、测序。将测序结果与中药材DNA条形码鉴定系统中的数据进行同源性比对，检测结果与形态学方法鉴定结果相比较，验证生药学鉴别的准确性。结果显示美洲大蠊粉末体壁碎片多鳞片状纹理，内外壁分层明显；刚毛分粗细两种，颜色分明，二者之间的差异较大；复眼碎片特征明显。分子生药学鉴定结果为蜚蠊科大蠊属昆虫美洲大蠊Periplaneta americana L.，同源性100%。该研究可以确认美洲大蠊的中药材鉴别特征，为保障美洲大蠊药材的安全使用提供了实验依据。     

澳洲大蠊与美洲大蠊总糖含量的比较研究

目的:比较澳洲大蠊与美洲大蠊中总糖含量的差异。方法:采用苯酚-硫酸法测定总糖含量。结果:澳洲大蠊中总糖平均含量为139.6 mg/g,美洲大蠊的为127.6 mg/g,两种蜚蠊的总糖含量差异无统计学意义。结论:两种蜚蠊中总糖含量丰富,且二者的含量比较差异无统计学意义。     

昆虫病毒对脊椎动物体细胞的致突变性研究

用微核测定法,检测3种昆虫病毒包涵体及其降解物对小白鼠骨髓多染红细胞染色体的损伤程度。证明对脊椎动物体细胞是否具有致突变性。结果表明,3种昆虫病毒对小白鼠骨髓嗜多染红细胞没有损伤作用。可以认为3种昆虫病毒对哺乳动物体细胞无致突变作用。     

美洲商陆光合光响应曲线及其模型拟合

为探讨不同光响应模型对美洲商陆光合特性的适用性,利用4种典型的光响应模型拟合了美洲商陆的光响应曲线,通过分析光合参数模拟值与实测值的拟合相似度,在4个模型中筛选最佳美洲商陆光响应模型。结果表明,直角双曲线模型、非直角双曲线模型、指数方程以及修正的直角双曲线模型对美洲商陆的光合光响应曲线都可以进行拟合,决定系数均为R2>0.99,但只有修正的直角双曲线模型可以计算它们的饱和光强。由各模型计算的光合参数可知,非直角双曲线模型求得的Pnmax远高于实测值,指数方程与修正的直角双曲线模型求得的Pnmax与实测值最为接近。直角双曲线、非直角双曲线模型以及指数方程求得的Isat均远低于实测值,唯有修正的直角双曲线模型求得的Isat与实测值最为相符。因此,修正的直角双曲线模型对于美洲商陆的光合光响应曲线的拟合以及各光合参数的求取最为适合。由修正的直角双曲线模型计算得到的美洲商陆的光合参数可知,美洲商陆的Pnmax为16.98μmol·m-2·s-1,Isat为1614.54μmol·m-2·s-1,Ic为14.14μmol·m-2·s-1,表明美洲商陆对光强具有较大的适应范围。     

Apoptosis of Spodoptera litura larval hemocytes induced by heavy metal zinc

By adding different amount of zinc into the artificial medium of the insect larvae, the zinc-induced apoptosis of the larvae haemocytes of the herbivorous insect Spodoptera litura Fabricius was investigated with flow cytometer. The results showed that the increase of zinc dose in the artificial feed led to the accumulations of zinc in the larval hemolymph and fat body, and more zinc was accumulated in fat body than in hemolymph. The apoptosis of hemocytes was significantly induced at high zinc concentration （1000 mg·kg^-1） in the insect diet, and the apoptosis rate was 63.63%, which was remarkably higher than that at control and lower concentrations （50--500 mg·kg^-1）. This suggests that the high dose of zinc in the artificial diet of S. litura larvae could induce the apoptosis of the larval hemocytes of S. litura.     

湿度对交织顶孢霉孢子萌发及对六星黑点豹蠹蛾致病力的影响

测定在不同湿度下对交织顶孢霉(Acremonium implicatum(Miller et al.)Gams)孢子萌发率及对六星黑点豹蠹蛾(Zeuzera leuconotumButler)幼虫的致病力的影响.结果表明:随着相对湿度的增大,孢子萌发速度、萌发率也增高.相对湿度为100%时,72 h孢子萌发率达到90%以上,相对湿度低于75%时,孢子萌发明显受到抑制.在相对湿度为(95±5)%时,交织顶孢霉对六星黑点豹蠹蛾幼虫的致死效果最好,校正死亡率和僵虫率分别为90.04%和70.00%,此时的致死速率也最快,致死中时(LT50)为6.368 d;相对湿度低于(65±5)%时,六星黑点豹蠹蛾幼虫校正死亡率和僵虫率显著降低,LT50均在20 d以上.     

昆虫生长调节剂对柑桔潜叶蛾的毒力测定及药效评价

试验测定了氟铃脲(92.5%原药)对柑桔潜叶蛾的室内毒力活性,原药加工制剂5%氟铃脲悬浮剂田间药效评价.结果表明:氟铃脲的致死中质量浓度LC50为832.572 1;阿维菌素的致死中质量浓度LC50为0.366 65.氟铃脲室内活性稍低于阿维菌素,但5%氟铃脲悬浮刺1 500倍液,药后3 d,7 d和14 d与1.8%阿维菌素3 000倍液防效基本相当,不存在差异显著性,可以在生产上大量推广使用.