使用伪氨基酸组成和BP神经网络预测类弹性蛋白多肽的相变温度

根据获得的16条ELP序列及相变温度的数据,利用伪氨基酸组成方法提取其序列特征值.将伪氨基酸组成中的相关系数部分作为类弹性蛋白的特征向量,从类弹性蛋白序列出发,利用最小中位方差回归,找出与其序列相关系数的最佳阶数.运用均匀设计法,分别对支持向量机与BP神经网络参数进行优化.结果表明:BP神经网络获得的预测模型最佳,相变...     

类人弹性蛋白在大肠杆菌中的高效表达

类人弹性蛋白是由VAPGVG六肽重复序列构成的多肽。研究通过全基因合成获得上游引入NcoI和下游引入XhoI限制性内切酶位点的[(VAPGVG)3S]4基因编码序列,通过定向递归连接技术在pMD19-T simple克隆载体中构建[(VAPGVG)3S]32基因编码序列。利用NcoI和XhoI双酶切从重组克隆载体中回收[(VAPGVG)3S]32(ELPs)基因编码序列,在T4 DNA连接酶作用下与NcoI和XhoI双酶切处理的线性化载体DNA分子pET28a(+)重组,重组混合物转化大肠杆菌Top10感受态细胞。从添加有50μg·mL-1卡那霉素的LB平板上随机挑取37℃培养过夜的转化克隆,碱法小量抽提质粒DNA,经酶切及序列测定筛选出序列正确的重组质粒DNA转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。从添加有50μg·mL-1卡那霉素的LB平板上随机挑取37℃培养过夜的转化克隆至新鲜配制的TB液体培养基中,于37℃、200 r·min-1培养至OD600约为0.60 h,添加终浓度为100μg·mL-1的IPTG诱导类人弹性蛋白表达3 h,SDS-PAGE凝胶电泳及Western blotting分析表明,该研究成功构建了类人弹性蛋白原核表达载体,在IPTG诱导作用下以可溶性状态高效表达。灰度扫描分析显示,重组类人弹性蛋白经IPTG诱导表达3 h后,可达宿主细胞可溶性蛋白的28.3%。该工作为以大肠杆菌为表达宿主,大量制备类人弹性蛋白用于生物医学材料奠定了良好的基础。     

Inverse Thermal-Responsive Glyco-Polypeptide Polymer for One-Pot Glyco-Affinity Proteomic

1 Introduction Proteins are ultimately responsible for the biological processes in cells, body fluids, and tissue specimens. This presents enormous challenges to the field of proteomics, which aims to identify, characterize and assign biological functions of all proteins. Determining individual protein in complex biological samples often requires some type of separation as a prerequisite for its measurement. The complexities of chemical structure and in the physiological function of every prot…