| 类人弹性蛋白在大肠杆菌中的高效表达 |
| |
| 引用本文： | 赵轶君,刘莹,薛添,魏琪,季佳菲,陈富林,李红民.类人弹性蛋白在大肠杆菌中的高效表达[J].科学技术与工程,2014,14(28). |
| |
| 作者姓名： | 赵轶君 刘莹 薛添 魏琪 季佳菲 陈富林 李红民 |
| |
| 作者单位： | 西北大学生命科学学院,西北大学生命科学学院,西北大学生命科学学院,西北大学生命科学学院,西北大学生命科学学院,西北大学生命科学学院,西北大学生命科学学院 |
| |
| 基金项目： | 本研究由国家基础科学人才培养(J1210063, 2013.1-2016.12)、西北大学“十二五”“211工程”研究生创新人才培养项目(YZZ12055)、陕西省教育厅重点实验室重点科研计划项目(11JS085)和陕西省科技厅2011年度社会发展攻关项目(2011K12-61)共同资助。 |
| |
| 摘 要： | 类人弹性蛋白是由VAPGVG六肽重复序列构成的多肽。研究通过全基因合成获得上游引入NcoI和下游引入XhoI限制性内切酶位点的(VAPGVG)3S]4基因编码序列,通过定向递归连接技术在pMD19-T simple克隆载体中构建(VAPGVG)3S]32基因编码序列。利用NcoI和XhoI双酶切从重组克隆载体中回收(VAPGVG)3S]32(ELPs)基因编码序列,在T4 DNA连接酶作用下与NcoI和XhoI双酶切处理的线性化载体DNA分子pET28a(+)重组,重组混合物转化大肠杆菌Top10感受态细胞。从添加有50μg·mL-1卡那霉素的LB平板上随机挑取37℃培养过夜的转化克隆,碱法小量抽提质粒DNA,经酶切及序列测定筛选出序列正确的重组质粒DNA转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。从添加有50μg·mL-1卡那霉素的LB平板上随机挑取37℃培养过夜的转化克隆至新鲜配制的TB液体培养基中,于37℃、200 r·min-1培养至OD600约为0.60 h,添加终浓度为100μg·mL-1的IPTG诱导类人弹性蛋白表达3 h,SDS-PAGE凝胶电泳及Western blotting分析表明,该研究成功构建了类人弹性蛋白原核表达载体,在IPTG诱导作用下以可溶性状态高效表达。灰度扫描分析显示,重组类人弹性蛋白经IPTG诱导表达3 h后,可达宿主细胞可溶性蛋白的28.3%。该工作为以大肠杆菌为表达宿主,大量制备类人弹性蛋白用于生物医学材料奠定了良好的基础。
|
| 关 键 词： | 类人弹性蛋白 可溶性表达 原核细胞 生物材料 |
| 收稿时间： | 2014/5/12 0:00:00 |
| 修稿时间： | 6/3/2014 12:00:00 AM |
High-level Expression of Human Elastin-like Polypeptide in Escherichia coli |
| |
| zhao yijun,and.High-level Expression of Human Elastin-like Polypeptide in Escherichia coli[J].Science Technology and Engineering,2014,14(28). |
| |
| Authors: | zhao yijun and |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Human elastin-like polypeptide Soluble expression Prokaryotic cell Biomaterials |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《科学技术与工程》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《科学技术与工程》下载免费的PDF全文 |
|
