大鼠血管内皮细胞siRNA转染条件的优化

目的:旨在优化siRNA转染大鼠血管内皮细胞的转染条件.方法:将0.75μL和1.5μL的脂质体LipofectamineTM3000分别与20、40、60、80nmol带荧光标记的FAMsiRNA组合,转染6、12、18、24h后,用荧光显微镜计数阳性细胞率、MTT法检测各浓度条件下内皮细胞的存活率,筛选最优转染条件.结果:(1)转染12h后,用荧光显微镜检测20、40、60、80nmol各组,均可观察到绿色荧光(2)siRNA浓度为60nmol/L,脂质体为1.5μL的组合转染效率最高,继续增加siRNA的浓度,转染效率提高不明显.(3)转染时间超过24h,各组细胞荧光减弱,细胞死亡率显著增加.结论:结果表明,以1.5μL LipofectamineTM3000与60nmol/L的siRNA浓度组成转染混合物转染12h可以实现对大鼠血管内皮细胞高效转染并保持较高的细胞活性.     

A549-KIF4A过表达细胞株的构建与鉴定

非小细胞肺癌A549细胞中驱动蛋白KIF4A的表达量极低.为研究KIF4A在肺癌发生和发展过程中的作用,利用脂质体转染的方法,将p EGFP-KIF4A质粒和p EGFP-C1质粒分别转入A549细胞中,用G418筛选得到单克隆,并扩增得到稳定表达GFP-KIF4A和GFP的细胞株.利用Western Blot以及免疫荧光染色法对得到的细胞株进行鉴定.结果表明:A549-GFP-KIF4A细胞中GFP-KIF4A蛋白的表达水平较高,A549-GFP-C1中仅表达GFP蛋白.免疫荧光检测表明:A549-GFP-KIF4A过表达细胞中GFP-KIF4A荧光融合蛋白的定位与内源KIF4A的定位相同.     

光镊与DNA纳米技术在膜生物学研究中的应用

生物膜是生命活动中信号传导和物质运输的平台。近年来，多学科的交叉应用为膜蛋白介导的膜融合与分裂、囊泡形成与分泌，以及脂质代谢的调控机制等膜生物学研究带来了新的信息。例如，单分子光镊力谱方法通过精准、定量地检测蛋白与膜的相互作用，为在时空维度上理解这一生物过程的复杂调控机制提供了强有力的手段。此外，DNA纳米技术通过构建纳米尺度可编程的自组装结构，提供了可精确修饰与功能化的分子器件。经过疏水修饰的核酸纳米器件可以作用于磷脂膜或生物膜，进而对膜进行表面改性、诱导形变、控制理化参数以及跨膜通信等调控操作。该领域的进步将为细胞生物学机制研究、分泌囊泡的分析检测、人工脂质体的制备优化、新型分子载具开发以及新型药物开发提供特色的工具手段，并构建新颖的体系平台助力合成生物学、化学生物学以及分子医学的发展。     

大黄酚脂质体包封率测定方法的研究

目的建立大黄酚脂质体包封率的测定方法。方法采用低速离心法分离载药脂质体与游离的药物,采用紫外分光光度法测定大黄酚的含量,计算出包封率。结果实验结果表明,当离心条件为1 500r/min、离心时间为120s时,可将载药脂质体与游离药物有效地分离,并测得3批大黄酚脂质体的包封率分别为82.29%,83.25%和83.06%,符合2010版《中华人民共和国药典》的规定。结论该方法简便快速,准确可靠,可用于测定大黄酚脂质体的包封率。     

溶菌酶脂质体的制备及其对生物膜的剥离作用

采用逆向蒸发法制备了稳定的溶菌酶脂质体.在不锈钢表面培养出稳定生物膜后,分别利用溶菌酶和溶菌酶脂质体对其进行剥离.运用Zeta电位仪、扫描电子显微镜(SEM)和红外光谱(FT-IR)对脂质体和生物膜进行表征.结果表明制备的脂质体平均粒径为80~100 nm,包封率为82.4%.相同浓度下溶菌酶及其脂质体对混合菌种形成的生物膜剥离效率分别达到62.4%和86.5%.溶菌酶脂质体在24h内对生物膜和水体中微生物去除率分别达到89.6%和99.6%.因此,溶菌酶脂质体能够有效控制不锈钢表面生物膜污染风险.     

ω-3转基因克隆绵羊诞生

我们构建了含有bfat-1表达载体pIE-bF1,通过脂质体介导转染获得转基因细胞系,再以核移植技术获得转基因克隆胚胎。胚胎移植后,于2010年10月27日出生两只克隆羊。经检测均为转ω-3基因克隆绵羊。     

mRNA技术荣获2023年诺贝尔生理学或医学奖

mRNA要成为药物或疫苗，科学家需要解决其会被免疫细胞识别并降解的问题。卡塔琳·卡里科和德鲁·魏斯曼荣获2023年诺贝尔生理学或医学奖，因为他们对核苷碱基修饰的发现，使研发出有效的新冠病毒mRNA疫苗成为可能。核苷碱基修饰是针对mRNA的“易容术”，以避免免疫细胞对人工合成的mRNA的监视和降解。当然，只有“易容术”是不够的，mRNA疫苗的成功，也离不开递送系统和对病毒基因序列的了解。mRNA技术有着更广阔的未来，不仅可用于预防病原体感染的疫苗，也可以用于癌症疫苗、基因编辑和细胞治疗。     

非病毒转基因载体——脂质体

基因治疗已成为目前医药科技研究的热点，脂质体作为一种非病毒转基因载体在临床显露出良好的基因治疗前景，具有非常的潜力。     

用小角X射线散射法和31P核磁共振技术研究液晶态油酸多相脂质体的结构

采用小角X射线散射法和31P核磁共振技术研究液晶态油酸多相脂质体的结构.实验表明:胆固醇、油酸、非离子表面活性剂均对PE脂质体的结构有显著的影响.