基于DNA-AuNCs的荧光传感新方法灵敏检测胰蛋白酶活性

以DNA模板金纳米簇(DNA-AuNCs)作为荧光探针,发展了一种灵敏检测胰蛋白酶活性的荧光分析新方法.在胰蛋白酶存在条件下,牛血清白蛋白水解成多肽片段,释放出游离的半胱氨酸残基.半胱氨酸残基与金纳米簇通过Au-S键形成非荧光的配合物,导致金纳米簇的荧光强度显著降低.该方法对胰蛋白酶的线性检测范围为0.1～2.0mg/L,检出限为20μg/L(R_(SN)=3).此外,该方法被成功应用于人血清样品中胰蛋白酶含量的测定.     

低频超声波对大豆胰蛋白酶抑制素的处理效果

采用２０ｋＨｚ的低频超声波对大豆胰蛋白酶抑制素（ＳＴＩ）进行了处理。结果表明,超声波对经纯化了的鲍曼－贝尔克抑制素（ＢＢＩ）几乎不起钝化作用,对生豆奶中天然存在的ＳＴＩ的钝化效果要比对从大豆中提取纯化的ＳＴＩ好得多,说明纯化了的ＳＴＩ似对超声处理较稳定;豆奶中大分子蛋白组分１１Ｓ和７Ｓ的存在有助地ＳＴＩ的纯化;低频超声波对生豆奶中的ＢＢＩ似乎有轻微的激活作用;在生豆奶中添加半胱氨酸、亚硫酸钠的胃液     

大豆（G．max）胰蛋白酶抑制剂SBTi－A_2新类型Ti~x的纯化及其性质研究

用丙酮脱脂、稀酸处理、硫酸铵盐析和ＤＥＡＥ－５２纤维素柱层析等方法从大豆（Ｇ．ｍａｘ）中分离纯化得一种新类型胰蛋白酶抑制剂Ｔｉｘ．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析显示Ｔｉｘ与已知的大豆蛋白酶抑制剂Ｔｉａ的相对分子质量均为２１０００，且Ｎ－末端均为ＡｓＰ；亲和电泳分析显示Ｔｉｘ与Ｔｉａ均可与胰蛋白酶完全结合；ＢＡＥＥ法测定显示出Ｔｉｘ对胰蛋白酶活性的抑制略小于Ｔｉａ；两者经ＣＮＢｒ裂解后电泳分析得到相同带型；纯化样品的氨基酸组成分析显示Ｔｉｘ比Ｔｉａ多了两个碱性氨基酸，因而Ｔｉｘ带有更多的正电荷．研究结果初步证明Ｔｉｘ是Ｋｕｎｉｔｚ类型中一种新的胰蛋白酶抑制剂．     

胰蛋白酶抑制剂抗虫基因转化烟草的研究

实验用携带质粒pAM194/TI的根癌农杆菌LBA4404转化烟草,通过筛选,共获得35株卡那霉素抗性苗.GUS组织染色、PCR检测及抗虫试验表明胰蛋白酶抑制剂抗虫基因已经成功地整合进再生植株染色体基因组中,有些已正确表达.     

Q Sepharose F.F.层析柱的制备及BTI的初步纯化

通过对Q Sepharose F．F．离子柱的制备及荞麦蛋白酶抑制剂(BTI)的初步纯化，探索用自制层析柱代替价格昂贵的预装柱来分离纯化生物活性物质的可能性．实验结果表明：自制的Q Sepharose F．F．强阴离子层析柱可以满足对目的产品进行分离纯化的实验要求，同时与购买的预装柱比较，自装柱具有较大的上样量，柱体积灵活可变以及低成本等特点．     

毛蚶及其酶解产物的功能性评价和比较

目的:对毛蚶及其胰蛋白酶水解产物进行功能性评价和比较。方法:通过正交实验优化胰蛋白酶水解条件,并对毛蚶水解产物和毛蚶进行蛋白含量、氨基酸成分和抗氧化活性的检测和比较。结果:通过胰蛋白酶的水解,毛蚶的营养价值和肽含量明显提高,并表现出更强的抗氧化活性。结论:胰蛋白酶处理过的毛蚶具有更明显的药用活性,为进一步研究后者的药用价值提供依据。     

Salicylic acid and ethylene signaling pathways are involved in production of rice trypsin proteinase inhibitors induced by the leaf folder Cnaphalocrocis medinalis （Guenee）

The roles of signaling pathways in the production of trypsin proteinase inhibitors (TrypPIs) in rice infested by the leaf folder (LF) Cnaphalocrocis medinalis were studied. Infestation by LF increased TrypPI levels in the leaves of rice plants at the tillering, booting and flowering stages but decreased TrypPI levels at the ripening stage; TrypPI levels in rice stems did not increase at any developmental stage. Infestation by LF at the tillering stage systemically increased TrypPI levels in leaves but not in stems; it also enhanced salicylic acid (SA) levels in leaves and stems, and the ethylene level released from plants. However, LF infestation did not increase JA concentrations. Exogenous application of SA or ethylene enhanced TrypPI levels in the leaves and stems of plants at the tillering stage, whereas treatment with both SA and ethylene induced lower levels of TrypPIs than treatment with SA or ethylene alone, suggesting an antagonistic effect of SA and ethylene on TrypPIs induction. The results suggest that both SA and ethylene signaling pathways are involved in the production of TrypPIs in rice induced by LF; moreover, the antagonistic effect of SA and ethylene may explain the changes in TrypPI levels seen at different plant developmental stages and in different organs.     

水稻胰蛋白酶抑制剂对褐飞虱产卵刺激的响应

 昆虫产卵过程对寄主植物的直接刺激包括产卵器的机械损伤和卵表面物质带来影响,这些刺激是启动植物诱导抗虫性的重要途径。通过对褐飞虱产卵处理后水稻植株内胰蛋白酶抑制剂（BBPI）合成酶基因的表达量及物质含量的测定,对比褐飞虱取食和机械损伤处理,发现褐飞虱产卵能够诱导水稻BBPI合成酶基因的表达和BBPI物质的生成。处理后6 h,12 h,水稻 BBPI 表达量显著高于取食和机械损伤处理;产卵诱导的BBPI物质含量显著高于正常水稻。褐飞虱产卵诱导水稻启动〖WTBX〗BBPI〖WTBZ〗表达和物质合成表明,与取食危害类似,水稻同样会对褐飞虱产卵刺激产生响应,启动相应的植物防御体系,进而达到阻滞褐飞虱危害的目的。     

重组刺桐胰蛋白酶抑制剂的制备及活性鉴定

刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种Kunitz型胰蛋白酶抑制剂,能够抑制胰蛋白酶及组织型纤溶酶原激活剂的活性,因此ETI可以作为配体与固定相偶联用于亲和层析.利用化学合成及聚合酶链式反应(PCR)的方法获得ETI的编码基因,然后用NdeI/SacI酶切并插入载体pET25b ( )中构建重组表达质粒pET25b ( )/ETI .重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用IPTG诱导使重组ETI(rETI)过量表达形成包涵体.包涵体经过洗涤、复性及CM离子交换柱纯化,每升培养液可获得14 mgrETI ,其纯度超过92 %.活性测定表明,rETI对凝血酶及尿激酶的活性没有抑制作用,但能显著抑制胰蛋白酶、瑞替普酶及纤溶酶的活性,抑制常数Ki分别为5 .14×10-9,9 .4×10-8和2 .08×10-8mol/L.     

鲁米诺-H2O2体系流动注射-化学发光增强法测定胰蛋白酶

在碱性条件下,胰蛋白酶对鲁米诺-过氧化氢体系的化学发光体系具有显著的增强作用,据此建立了流动注射-化学发光增强法测定胰蛋白酶的新方法.该法简单、快速、线性范围宽,在优化的实验条件下,测定胰蛋白酶在1.0～50.0mgL/的浓度范围内相对发光强度与其浓度呈良好的线性关系,检出限可达0.26mg/L,对浓度为10.0mg/L的胰蛋白酶进行平行测定其相对标准偏差(RSD)为0.7%(n=11),成功地用于合成样品中胰蛋白酶的测定,回收率在90.1%～104.1%,结果令人满意。