Improving the thermal stability of lactate oxidase by directed evolution

Lactate oxidase is used in biosensors to measure the concentration of lactate in the blood and other body fluids. Increasing the thermostability of lactate oxidase can significantly prolong the lifetime of these biosensors. We have previously obtained a variant of lactate oxidase from Aerococcus viridans with two mutations (E160G/V198I) that is significantly more thermostable than the wild-type enzyme. Here we have attempted to further improve the thermostability of E160G/V198I lactate oxidase using directed evolution. We made a mutant lactate oxidase gene library by applying error-prone PCR and DNA shuffling, and screened for thermostable mutant lactate oxidase using a plate-based assay. After three rounds of screening we obtained a thermostable mutant lactate oxidase, which has six mutations (E160G/V198I/G36S/T103S/A232S/F277Y). The half-life of this lactate oxidase at 70 °C was about 2 times that of E160G/V198I and about 36 times that of the wild-type enzyme. The amino acid mutation process suggests that the combined neutral mutations are important in protein evolution. Received 15 September 2006; received after revision 21 October 2006; accepted 2 November 2006     

C60Ni(PPh3)2配合物的合成和性质研究

采用配体取代法合成出C60Ni(PPh3)2，利用元素分析、红外光谱、光电子能谱对产物进行表征，研究了产物的热稳定性和氯化还原性能。     

助成胶作用和氧化镧掺杂对活性氧化铝热稳定性的影响

研究水溶液成胶制备氧化铝过程中,掺杂氧化镧及利用聚乙二醇助成胶对氧化铝热稳定性和比表面的影响。通过XRD表征手段和TG检测方法来检测氧化铝在不同温度焙烧后的晶相改变和热失重情况,并利用BET检测方法检测不同温度焙烧后的比表面。实验结果表明,氧化镧的掺杂可提高氧化铝的热稳定性,利用聚乙二醇助成胶可有效提高氧化铝的比表面。     

大肠杆菌植酸酶appA的融合表达及耐热性研究

提取大肠杆菌(SUGL)基因组DNA,通过PCR方法从基因组扩增得到植酸酶基因ap-pA,测序结果表明该基因的ORF读框包含1440个核苷酸.将该基因重组于大肠杆菌表达载体pET-32a(+)中,导入大肠杆菌BL21(DE3),构建工程菌BL21(DE3)-pET32a-appA.对表达条件进行了优化,在30℃下,以0.1mmol/L IPTG诱导表达植酸酶,表达量达到10%以上.在37℃,用钒钼酸铵法测定了表达的植酸酶活性为40740.7U/g,同时观察不同加热温度对植酸酶活性的影响程度.发现融合表达的     

5-硝基水杨醛缩乙二胺双希夫碱钴(Ⅲ)配合物的合成、晶体结构及热稳定性研究

利用水热法合成了一例新的超分子配合物——5-硝基水杨醛缩乙二胺双希夫碱钴(Ⅲ)配合物.通过元素分析、红外光谱和X-射线单晶衍射等手段对其组成、结构进行了研究,并对合成条件进行了探讨.结果表明,配体采用四齿螯合的方式与金属钴离子配位,配合物结构单元之间通过分子间氢键构筑得到了配合物的超分子网络结构.热重分析表明,配合物具有良好的热稳定性.     

N—对羧苯基松香马来酰亚胺的合成及结构测定

本文研究一种能用于合成新型高热性能的聚酰亚胺酯或聚酰胺酰亚胺的单体——N—对羧苯基松香马来酰亚胺的合成原理、方法及其结构的测定数据.在加热条件下,松香和马来酸酐(1:1投料量)发生Diols(?)Alder反应生成松香—马来酐加合物(RMA)的产率为79％;在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)存在下,松香—马来酐加合物与对氨基苯甲酸反应获得的N—对羧苯基松香马来酰亚胺(PRMID)的产率为90.4％.溶解性等物理性质、红外光谱、核磁共振氢谱测定的数据表明产物的结构为标题化合物.热重分析(TGA)测试的曲线表明,产物具有较高的热稳定性能.     

松香马来酰亚胺聚酯的合成及热稳定性研究

本文研究N-(对-,间-,邻-羧苯基)-松香马来酰亚胺聚酯的合成方法及其热稳定性能.在催化剂存在下,N-(对-,间-,邻-羧苯基)-松香马来酰亚胺三种异构体与乙二醇进行缩聚反应生成三种松香马来酐聚酰亚胺酯(分别称为PPEI、PMEI、POEI)的产率分别为80%,80%,72%.在反应体系分别添加一定量的H_2SO_2,H_3PO_4,H_3BO_3,ZnO,Sb_2O_3与(CH_3CO_2)Zn(1:1),H_3BO_3与ZnO(1:1)做催化剂时,对缩聚反应均有催化作用,其中以H_3BO_3与ZnO(1:1)的催化效果最好.升高缩聚反应体系的温度则反应产率随之增高.经溶解性能试验、傅里叶红外光谱、核磁共振氢谱测试表明合成的三种聚酰亚胺酯为目标产物.热重分析(TGA)表明这三种聚酞亚胺酯的ONSET温度均超过470℃,显示出高的热稳定性能.     

偶联剂对稀土荧光竹塑复合材料性能的影响

 为研究马来酸酐接枝聚乙烯（MAPE）、异丙基三(硬脂酰基)钛酸酯（YB-510）、γ-（2,3-环氧丙氧）丙基三甲氧基硅烷（KH-560）3种偶联剂对稀土荧光竹塑复合材料发光性能、力学性能和热稳定性的影响,利用荧光分光光度计、电子万能试验机、摆锤冲击仪和热重分析仪对复合材料的荧光性能、力学性能和热稳定性进行了表征,并利用场发射扫描电子显微镜（FESEM）对稀土荧光竹塑复合材料的拉伸断面的微观形貌进行观察。结果表明,3种偶联剂都能改善稀土荧光竹塑复合材料的分散性、流动性、发光性能、弯曲强度、弯曲模量、拉伸强度和冲击强度;场发射扫描电镜显示,铝酸锶荧光粉在有偶联剂添加的稀土荧光竹塑复合材料的基体中分散均匀、团聚减少、界面黏合作用改善;相比于钛酸酯（YB-510）和KH-560,MAPE对稀土荧光竹塑复合材料的发光性能、力学性能和分散性提高更明显;热失重（TG）曲线和一阶微分（DTG）曲线分析表明,KH-560提高稀土荧光竹塑复合材料的热稳定性,钛酸酯（YB-510）对稀土荧光竹塑复合材料的热稳定性产生不良影响,MAPE对稀土荧光竹塑复合材料的热稳定性的影响不明显。     

不同来源钝顶螺旋藻藻蓝蛋白特性比较

 为更大程度地开发利用鄂尔多斯螺旋藻藻蓝蛋白资源,获得螺旋藻藻蓝蛋白提取及保存过程中的最佳参数,对2 藻种藻蓝蛋白硫酸铵盐析饱和度、热稳定性、酸碱稳定性进行了比较。结果显示,在硫酸铵饱和度达到40%时,2 藻种藻蓝蛋白纯度和藻蓝蛋白提取率均达到最高,且鄂尔多斯钝顶螺旋藻藻蓝蛋白纯度为引进钝顶螺旋藻的1.67 倍,两者的提取率持平。鄂尔多斯螺旋藻藻蓝蛋白对温度较引进种敏感,除25℃时相差不大外,35、45、55℃等条件下均表现出相比引进种更大的纯度降低率,多数为后者的两倍,但即使鄂尔多斯钝顶螺旋藻纯度降低率较大,降低后的纯度仍然比引进种最高纯度大,显示出鄂尔多斯钝顶螺旋藻在藻蓝蛋白上的优势。在工艺及环境条件允许的情况下,提取鄂尔多斯钝顶螺旋藻藻蓝蛋白时,尽量保持在较低温度下操作,如果兼顾提取率和纯度,宜选择55℃以内操作。2 藻种藻蓝蛋白酸碱稳定性上表现出较一致的反应,pH 值5~6 可以保持藻蓝蛋白的最大纯度。     

涂硼正比计数管性能参数优化研究进展

 介绍了与涂硼正比计数管性能参数相关的因素,从涂硼管自身的结构设计、制作工艺、管外慢化体设计的角度,对提高其性能的技术方法进行了综述分析,推导了硼含量和涂硼层厚度与探测效率间的关系,明确了当前提高涂硼层面积、涂硼工艺、耐高温设计的技术动态。分析表明,涂硼正比计数管应向选择性能更佳的填充气体、更成熟的阳极丝安装工艺和涂硼层制作工艺等方向发展。