大鼠血管内皮细胞siRNA转染条件的优化

目的:旨在优化siRNA转染大鼠血管内皮细胞的转染条件.方法:将0.75μL和1.5μL的脂质体LipofectamineTM3000分别与20、40、60、80nmol带荧光标记的FAMsiRNA组合,转染6、12、18、24h后,用荧光显微镜计数阳性细胞率、MTT法检测各浓度条件下内皮细胞的存活率,筛选最优转染条件.结果:(1)转染12h后,用荧光显微镜检测20、40、60、80nmol各组,均可观察到绿色荧光(2)siRNA浓度为60nmol/L,脂质体为1.5μL的组合转染效率最高,继续增加siRNA的浓度,转染效率提高不明显.(3)转染时间超过24h,各组细胞荧光减弱,细胞死亡率显著增加.结论:结果表明,以1.5μL LipofectamineTM3000与60nmol/L的siRNA浓度组成转染混合物转染12h可以实现对大鼠血管内皮细胞高效转染并保持较高的细胞活性.     

电刺激小脑顶核促脑缺血后血管内皮生长因子表达的意义

探讨电刺激小脑顶核(FNS)对局部脑缺血后血管内皮生长因子(VEGF)表达和毛细血管新生的影响．以线栓法制成大鼠右侧大脑中动脉梗塞模型(MCAO)，大鼠随机分为假手术对照组、MCAO组、电刺激小脑顶(MCAO FNS)干预组，以免疫组织化学法检测VEGF、内皮细胞阳性表达及毛细血管记数，大脑中动脉梗塞后，缺血区神经元变性、坏死，VEGF、内皮细胞在半暗带有少量表达，毛细血管数较对照组增加，经电刺激小脑顶核干预后，VEGF、内皮细胞大量表达，毛细血管数目明显增加，有统计学差异．电刺激小脑顶核可通过促VEGF表达、内皮细胞增殖，从而促进毛细血管新生。     

冠状动脉粥样硬化病变中微量元素的X射线显微分析

本文应用EDAX-9100能谱仪,对家兔冠状动脉粥样硬化病变部位的微量元素进行显微分析,发现Zn/Cu比值大于1,提供了冠心病病因中“Zn/Cu假说”的实验论证。     

雌二醇对体外培养内皮细胞抗氧化活力的影响

雌激素对心血管系统的保护作用,是育龄妇女少患此类疾病的重要原因。本文以体外培养的小牛主动脉内皮细胞为实验材料,考察了雌二醇对血管内皮细胞抗氧化系统的影响。结果表明,０．５μｇ／ｍｌ雌二醇作用内皮细胞后,细胞内ＳＯＤ活性显著增加,与此相对应,细胞内过氧化产物ＭＤＡ的含量显著降低。提示该浓度的雌二醇能够提高细胞内的抗氧化能力,因而可能防止活性氧对内皮细胞的损伤,而这种损伤往往是动脉粥样硬化的开端。０．     

Ti-O薄膜表面抗凝血及人脐静脉内皮细胞种植

利用等离子体浸没离子注入沉积(PIII-D)合成Ti-O薄膜, 并采用体外血小板粘附试验对Ti-O薄膜进行血液相容性评价. 结果表明, 晶态Ti-O薄膜表面具有良好血液相容性. 进一步的薄膜表面人脐静脉内皮细胞种植试验表明, 晶态Ti-O薄膜表面内皮细胞生长自然、正常且均匀覆盖其表面. 研究发现晶态Ti-O薄膜具有良好的内皮细胞化特性.     

糖尿病血管内皮细胞功能异常及其机理

糖尿病血管病变（Diabetic vasculopathy）是糖尿病患者致残死亡的首要原因，多种因素参与了这一病理过程，其中血管内皮细胞功能异常起重要作用。随着糖尿病患者血糖升高，患者血管内皮功能受损逐渐加重，与脂代谢紊乱、胰岛素抵抗、氧化应激等多种因素相互影响。认识血管功能的异常，探索其发病机理，对有效预防糖尿病大血管病变，提高患者生存率及生存质量是十分重要的。     

D-半乳糖诱导大鼠肺微血管内皮细胞衰老

探讨了D-半乳糖(D-galactose, D-gal)诱导的大鼠肺微血管内皮细胞(pulmonary microvascular endothelial cells, PMVECs)衰老与细胞凋亡的关系. 以含D-gal(10 g/L)DMEM培养液培养PMVECs, 经内皮细胞鉴定后, 再通过下述鉴定建立了大鼠PMVECs衰老模型: (1) 约90%的细胞呈现b-半乳糖苷酶活性阳性染色; (2) 流式细胞仪检测可见细胞周期分布变化, 90%细胞停留在G0/G1期, 而S期和G2/M期细胞近于消失. 与未诱导的对照组细胞比较得到如下结果: (1) 荧光显微镜和透射电子显微镜观察, 可见D-gal诱导的PMVECs细胞核染色质浓缩和凝聚, 并可见凋亡小体; (2) 流式细胞仪检测Annexin V /PI双染色的D-gal诱导的PMVECs中, 早中期凋亡细胞明显增加, 其细胞凋亡率为(39.8±2.8)% (对照组为(14.0±3.7)%); (3) PMVECs在衰老终末阶段出现典型的晚期凋亡亚二倍体峰. 实验表明: D-gal可诱导体外培养的PMVECs老化, 从而复制细胞衰老. 经D-gal诱导的衰老PMVECs易发生凋亡, 提示细胞凋亡参与了D-gal诱导细胞衰老的过程.     

血管抑素3A工程蛋白的柱复性与离子交换纯化

由大肠杆菌以包涵体形式表达的一种抗内皮细胞生长工程蛋白(A nti-ang iogen ic agent,简称3A)经变性,Sephacry l S-100 HR柱复性,SP Sepharose FF离子交换吸附纯化,SephadexG-25脱盐,获得复性率为53.47%,HPLC纯度为92.52%的3A活性蛋白。以猪髋动脉内皮细胞为受检细胞,表明纯化蛋白具有抑制内皮细胞生长的特性。     

葛根黄酮对糖基化终产物致细胞损伤的修复

研究了糖基化终产物（AGEs）对血管内皮细胞（VEC）的作用，以及葛根黄酮对AGEs致VEC损伤的修复.以体外培养的新生小牛胸主动脉VEC为材料，检测了AGEs (4 g/L)作用于VEC 24 h后，细胞内一氧化氮（NO^-₂/ NO^-₃）、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽（GSH）和脂褐素（LPF）含量的变化；细胞乳酸脱氢酶（LDH）的泄漏量；AGEs对细胞生长增殖的影响，及细胞形态和超微结构的变化.结果显示AGEs (4g/L)可使细胞增殖率、LDH、MDA及LPF含量显著升高（P<0.01），NO^-₂/ NO^-₃和GSH含量显著降低(P<0.01).细胞形态收缩变形，胞内出现脂滴和空泡.同时加入葛根黄酮，可使以上指标及细胞形态均接近或恢复到正常水平.因此，葛根黄酮可作为防治糖尿病血管并发症的外源性氧自由基清除剂.     

MTT法检测化痰活血方含药血清对血管内皮细胞增殖的影响

目的:观察化痰活血方对体外培养的牛主动脉内皮细胞增殖的影响.方法:制备化痰活血方含药血清,作用于培养的牛主动脉内皮细胞.通过细胞形态学、MTT法检测化痰活血方含药血清对牛主动脉内皮细胞增殖的影响.结果:不同浓度的化痰活血方含药血清对细胞增殖的影响不同,低浓度(5%、10%、15%含药血清组)的化痰活血方含药血清促进细胞增殖,高浓度(20%含药血清组)的化痰活血方含药血清抑制细胞增殖.结论:化痰活血方可通过促进牛主动脉内皮细胞增殖起到抗动脉粥样硬化、保护血管内皮细胞的作用.