钝齿棒状杆菌转导噬菌体T-1的理化和生物学特性

虽然对谷氨酸产生菌(Corynebacterium crenatum)噬菌体已有许多较深入的研究,但对于噬菌体在遗传学上的应用的研究却很少。为寻找适合于谷氨酸产生菌的遗传载体,本实验室从分离出的48株噬菌体中,筛选后得到两株具有转导能力的噬菌体。下文报道其中一株的理化、生物学特性,为已发表的谷氨酸产生菌噬菌体进行比较,提供选择转导噬菌体的参考。     

Cytosporone B 的分离纯化,结构鉴定及其生物活性的初步研究

从福建九龙江口红树林自然保护区桐花树树皮中分离出内生真菌HTF3菌株，用柱层析和正相HPLC的方法从该菌株的发酵液中纯化出一单体化合物，经ID-、2D-NMR和ESI-MS等方法鉴定该化合物为Cytosporone B．活性检测发现它具有较强的抗肿瘤活性和较广谱的抗真菌活性．本文报道这类物质有抗肿瘤活性．作用机理值得进一步深入研究。     

海洋真菌杀虫活性的初步研究

对采集自浙江舟山海域底泥、福建省九龙江口红树林及福建省云霄县红树林共188株海洋真菌代谢产物的杀小杆线虫（Rhabditis sp．）和卤虫（brineshrimp）活性进行初步研究．筛选出#164菌株代谢产物对小杆线虫显示了较好的杀害活性，其LC90小于0．5mg／mL．#122菌株代谢产物对卤虫显示了较强的麻痹效应．#305菌株代谢产物对卤虫的LG。仅为75μg／mL．此外，对188株海洋真菌代谢产物的乙酰胆碱酯酶抑制活性进行研究．筛选出#229菌株代谢产物和#170菌株代谢产物具有较强的乙酰胆碱酯酶抑制活性,IC50分别为30／μg／mL和25／μg／mL．这些活性菌株具有产生杀线虫剂或乙酰胆碱酯酶抑制剂的特性．     

侵染钝齿棒状杆菌的噬菌体T-1转染研究

作者就本实验室分离到的一株对钝齿棒状杆菌B_9具有转导作用的噬菌体T_1,研究了噬菌体DNA的转染条件、钝齿棒状杆菌球状体的制备条件与转染频率的关系.证明以1％甘酸氨和0.8μ/ml青霉素培养,再经1mg/ml溶菌酶破壁处理10-16h效果较好;比较了各种二价阳离子和PEG对转染频率的效应,30mM CaCl,和16％PEG结合处理可提高转染频率,单独加Ba~( )或PEG,对转染无作用,二者结合处理有作用;加小牛血清白蛋白及37℃加温处理5min可提高转染频率,最适条件下,高达9.5×10~(-3)p.f.u./cell(2.8×10~6p.f.u./μg DNA)。噬菌体T-1对钝齿棒状杆菌是专一的,但以它的DNA对其它一些棒状杆菌也能转染,表明噬菌体T-1的受点与细胞壁有关.     

人LDHA原核表达、纯化及体外抑制剂筛选模型的建立

在多数肿瘤细胞中高度表达的乳酸脱氢酶A(LDHA)与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,筛选LDHA小分子抑制剂可提供一种富有潜力的靶向抗肿瘤策略.本研究以pET-28a为载体,构建了人LDHA表达质粒并于大肠杆菌BL21(DE3)中稳定表达,产量达到2.65mg/L.基于LDHA的催化反应建立了以丙酮酸钠和还原型烟酰胺腺嘌呤二核甘酸(NADH)为底物的筛选模型.实验结果表明:模型的LDHA最适质量浓度为60ng/mL,以质量分数0.25%草酸铵为阳性对照,筛选模型的Z因子为0.812.至此,本研究建立了LDHA抑制剂体外生化筛选模型,其成本低、可操作性强,符合高通量筛选要求,为发现新颖的LDHA抑制剂奠定了基础.     

SARS冠状病毒基因片段变异分析

采用基因序列和生物信息分析法，研究了SARS-CoV复制酶基因中4个片段。结果发现，片段Ⅰ与已报道的SARS冠状病毒ZJ01有2个位点不同，片段Ⅲ与CUHK-W1、CUHK-Su1O、HKU-39849和Hong-Kong各有1个位点的差别；片段Ⅳ与GZ01间有1个位点的变化。同时对已公布的17个全基因组序列进行比对分析。可找到共137个变异位点，其中仅出现1次的变异位点119个，间约信息位点18个。     

植物性转基因食品的检测与验证方法

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子(CaMV 35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)的序列，设计并合成了两对不同的引物，建立了PCR-酶切分析-Southern杂交检测并确认转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法．并利用该方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测，发现13份样品中有6份检出35S启动子和NOS终止子，7份样品结果为阴性．结果表明建立的检测与验证方法能有效检出转基因作物及其食品中的35S启动子和NOS终止子，具有灵敏度高、特异性好和结果准确的特点，可应用于进出境产品的转基因成分检测．     

海洋细菌1202菌株产胞外多糖的适宜条件

应用响应面法(ResponseSurfaceMethod,RSM)对海洋细菌1202菌株胞外多糖发酵培养基进行优化.结果表明,适宜的发酵培养基组成为:蔗糖4%,酵母膏0.05%,玉米浆1.5%,CaCO30.15%,KH2PO40.08%,MgSO4·7H2O0.05%,FeSO4·7H2O0.01%,NaCl0.1%,pH7.5.在装液量为50mL(500mL三角瓶),接种量5%时,于28℃摇瓶培养7d,胞外多糖的产量可达到8.3mg/mL,转化率为20.75%.     

沙门氏菌LPS相关抗体的快速检测

建立两种颗粒——乳胶颗粒及磁性颗粒快速检测沙门氏菌ＬＰＳ相关抗体（ＩｇＭ或ＩｇＧ的方法。乳胶颗粒用ＬＰＳ包被，磁性颗粒用羊抗人ＩｇＭ或ＩｇＧ包被，将两种颗粒及血清标本置于酶标条的微孔中，室温振荡３０ｍｉｎ后置于磁铁上使磁性颗粒沉淀。上清液在４００ｎｍ的酶标仪上读取浊度以判定反应结果。该方法比乳胶凝集试验的灵敏度高。其结果与用ＥＬＩＳＡ方法检测的结果一致，但步骤少，时间短，操作更简便。是一种快速诊断沙门氏菌感染的有效方法。