双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析

采用分子克隆方法获得5拷贝口服长效促胰岛素多肽(rolGLP-1)和水蛭素(rHV)融合基因促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV),并将该基因克隆至pET22b(+)表达载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),实现了高效表达.表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定后用Ni-NTA亲和层析柱纯化,得到高纯度的5rolGLP-HV.用STZ诱导Ⅱ型糖尿病小鼠和血栓模型鼠进行药物功能分析,结果表明,5rolGLP-HV有较好的降糖和抗血栓效果.     

十拷贝串联重复laGLP-1基因植物表达载体的构建及对黄瓜遗传转化的研究

天然胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是含有30个氨基酸的短肽激素,对2型糖尿病具有特殊疗效.以本实验室克隆的长效GLP-1(long acting GLP-1,laGLP-1)基因为基础,构建了十拷贝串联重复laGLP-1的无抗生素选择标记的植物表达载体pX6-laGLP-1,采用农杆菌介导法对黄瓜自交系2M1进行转化,通过PCR及Southern杂交检测分析,最后获得了4株稳定整合十拷贝串联重复laGLP-1的转基因植株.该遗传体系的建立为研发糖尿病食疗型转基因植物或用其生产治疗糖尿病的口服药物奠定了基础.     

双功能促胰岛素水蛭素(5rolGLP-HV)的构建及功能分析

采用分子克隆方法获得5拷贝口服长效促胰岛素多肽（rolGLP-1）和水蛭素（rHV）融合基因促胰岛素水蛭素（5rolGLP-HV）, 并将该基因克隆至pET22b(+)表达载体上, 转化大肠杆菌BL21（DE3）, 实现了高效表达. 表达产物经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定后用Ni-NTA]亲和层析柱纯化, 得到高纯度的5rolGLP-HV. 用STZ诱导Ⅱ型糖尿病小鼠和血栓模型鼠进行药物功能分析, 结果表明, 5rolGLP-HV有较好的降糖和抗血栓效果.