限制-修饰基因克隆化的一些问题

克隆限制-修饰体系基因工作对研究DNA结构功能,蛋白质-核酸识别作用,酶类生产都有一定意义。从质粒DNA中克隆此类基因相对地容易做到。但大多数限制-修饰(R—M)基因都定位在染色体DNA上,多年来许多人从事这项研究工作,到作者从事此项工作时,仅H.Smith(诺贝尔奖获得者)和J.Walder的实验室各自得到一对R—M基因.H.Smith和R。Roberts分别著文探讨过此项研究的一系列困难。作者于1982年在Roberts的实验室工作,承担了为该室再次进行这类研究的任务。在较短的时间内将Moraxella species染色体上的R—M体系基因克隆入E.coli细胞并完成了这一对基因的鉴定、碱基序列分析和表达的研究促进了这方面研究工作。。     

乙型肝炎表面抗原基因在酵母中的表达——Ⅰ.HBsAg基因在酵母中的克隆

将乙型肝炎表面抗原基因组装进穿梭质粒,经E.coli扩增、鉴定后转入酵母细胞得到了转化子。经放射免疫分析,在此转化子中HBsAg未得到表达,可能是阅读框架不一致造成的。此外,我们对酵母DNA重组技术进行了摸索,并简化和改进了一些步骤。