人表皮生长因子融合蛋白在大肠杆菌表达的研究

在大肠杆菌中高效表达人表皮生长因子(hEGF)。根据大肠杆菌对密码的偏爱性,构建高效表达EGF融合蛋白的菌株,经离子交换层析和凝胶过滤层析两个步骤使产物得到纯化。融合蛋白表达产量为27%,EGF融合蛋白纯化产物纯度为95%以上,促3T3细胞增殖的活性测定为ED50为4.2ng/mL。在pET 3c:BL21(DE3)大肠杆菌表达系统中,以融合蛋白方式表达人表皮生长因子,表达效率高,纯化路线简单,产量较高,适合产业化生产。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子的纯化及生物活性鉴定

目的 :探讨重组人碱性成纤维细胞生长因子 (rhbFGF)的纯化工艺和活性鉴定 .方法 :将rhbFGF工程菌大量扩增后通过包涵体提取、复性、阳离子交换、凝胶过滤等技术进行纯化 .结果 :纯化后的rhbFGF ,相对分子质量为 17× 10 3,蛋白纯度为 95 %以上 ,比活为 1 7× 10 6 U/mg ,对NIH3T3细胞具有明显的促分裂活性 .结论 :通过复性和两步层析的纯化方法可获得高纯度、高回收率和高生物活性的rhbFGF ,可用于实验室研究及临床试验     

人工合成人表皮生长因子在大肠杆菌中的表达

目的：在大肠杆菌中高产表达人表皮生长因子（hEGF），并探索提高外源基因在pET-3c：BL（DE3）表达系统的表达水平的途径。方法：根据大肠杆菌对密码的偏爱性，合成编码53个氨基酸的hEGF基因，分别以非融合蛋白和融合蛋白两种方式表达。计算机两者mRNA的翻译起始区（translation initiation region，TIR）的结构。结果：融合蛋白表达产量为27％，非融合蛋白的表达用SDS－PAGE检测不到，两者均具有促细胞增殖的活性。融合蛋白mRNA的TIR的△G值较非融合蛋白的高。结论：在pET－3c：BL21（DE3）大肠杆菌表达系统中，以融合蛋白方式表达人表皮生长因子，表达效率高且不影响其活性，此外，mRNA的TIR的结构可能是影响外源基因在本研究的表达系统的表达效率的一个重要因素。