HproTα／hIL-2融合蛋白真核载体的构建及鉴定

利用基因重组技术构建了含信号肽的人源胸腺素α原和白介素2(proTα/IL-2)融合基因的真核表达载体pVAX-PI.用脂质体转染试剂转染COS-7细胞,转染后24、48、72、96 h采用ELISA法检测细胞培养上清中IL-2的表达情况,分别用CTLL-2依赖细胞株/MTT法和脾细胞增殖实验测定融合蛋白IL-2和proTα活性,采用ECL western blotting分析和鉴定目的蛋白的相对分子质量大小.结果表明,转染上清在31 kDa处有特异性阳性反应条带,质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达,且于转染后48 h目的蛋白的表达量达峰值.细胞转染上清中的IL-2活性可达58 IU/mL,proTa具有促进小鼠脾脏细胞增殖的作用,可作为基因治疗药物的开发之用.     

rhFGF-8a制备及其对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响

为研究rhFGF-8a对鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成的影响,通过基因工程方法获得了rhFGF-8a包涵体蛋白的大量表达,经复性、纯化后获得纯度高达99%以上的rhFGF-8a蛋白。通过细胞增殖法测定rhFGF-8a的生物学活性,运用鸡胚绒毛尿囊膜实验观察其对新生血管生成的影响,结果表明:纯化后的rhFGF-8a能够刺激小鼠成纤维细胞NIH 3T3的生长;rhFGF-8a诱发鸡胚绒毛尿囊膜新生血管生成能力很弱。     

抗艾滋病病毒蛋白CVNH在大肠杆菌中表达条件的优化

CVNH(Cyanovirin-N homology)蛋白家族是具有抗HIV活性的蓝藻抗病毒蛋白-N(Cyanovirin-N,CVN)的同源物。在前期研究中,已首次获得水蕨Ceratopteris thalictroides CVNH基因的全长序列,构建了pET32a-CtCVNH的原核表达载体。以此为基础,对CVNH在大肠杆菌Rosetta 2(DE3)中的表达条件进行优化。分别探讨了最佳培养基类型及成分、培养基初始pH、诱导时机、诱导剂浓度及诱导时间。优化后的诱导条件是:含24 g.L-1酵母提取物和72 g.L-1胰蛋白胨的TB培养基、培养基初始pH为8.0、菌液A600nm为0.6时加入1.6 g.L-1乳糖诱导6 h。CVNH蛋白的表达量较优化前提高了1.9倍。这为进一步开展CVNH的药物研制和开发奠定基础。