人Cu，Zn-SOD在重组毕赤酵母中表达的发酵工艺研究

以表达人Cu,Zn-SOD的重组毕赤酵母为出发菌株,通过摇瓶实验研究发酵初始pH值、诱导剂浓度、诱导温度和培养基组成等因素对目的蛋白表达水平的影响.实验结果表明,培养基组分对目的蛋白表达水平的影响最大.与YPG培养基相比,菌株在FM22培养基(含0.15%组氨酸及PTM4)中目的蛋白表达量提高5.5倍.在优化摇瓶发酵条件下(诱导剂浓度1%,诱导温度27℃,FM22培养基(含0.15%组氨酸及PTM4),初始pH值为6.0),发酵液上清酶活水平为895 U/mL,较初始提高8.5倍;以摇瓶实验结果指导5 L罐发酵,得到13 539 U/mL酶活,为摇瓶试验的15倍.     

产烟酸羟化酶菌株Pseudomonas sp BK-1培养条件的研究

对产烟酸羟化酶的菌株Pseudomonas sp.BK-1的培养条件进行了优化,结果表明10g.L-1蔗糖为最佳碳源,20g.L-1玉米浆为最佳氮源,诱导物烟酸浓度12.5g.L-1,培养基的最适初始pH值7.0.5L发酵罐中进行发酵,在转速400r.min-1、通气量4.2L.min-1、30℃条件下,16h时酶活可达1.47U.mL-1.经36h的连续催化,产物6-羟基烟酸的浓度可以积累到154g.L-1.     

美洲商陆不同外植体组培的初步研究

以美洲商陆(Phytolacca americana L.)叶、下胚轴、根尖为外植体,初步研究了3者最适于诱导形成愈伤组织的激素种类和浓度水平.研究证实,叶诱导愈伤组织的最佳培养基为:MS+0.1 mg.L-16-苄基腺嘌呤(6-BA)+0.1 mg.L-1吲哚丁酸(IBA)+0.1 mg.L-1赤霉素(GA)3+300mg.L-1水解乳蛋白(LH)+30g.L-1蔗糖+9.0g.L-1琼脂,pH5.8.下胚轴诱导愈伤组织的最佳培养基为:MS+0.1mg.L-16-苄基腺嘌呤(6-BA)+0.1 mg.L-1赤霉素(GA)3+300 mg.L-1水解乳蛋白(LH)+30 g.L-1蔗糖+9.0 g.L-1琼脂,pH5.8.根尖诱导愈伤组织的最佳培养基为:MS+5.0 mg.L-16-苄基腺嘌呤(6-BA)+5.0 mg.L-1吲哚丁酸(IBA)+0.1 mg.L-1赤霉素(GA3)+300 mg.L-1水解乳蛋白(LH)+30g.L-1蔗糖+9.0g.L-1琼脂,pH5.8.     

重组工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA可溶性AiiA蛋白的发酵条件优化

通过对工程菌E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA的摇瓶发酵培养条件进行优化,确定了AiiA蛋白可溶性表达的最佳发酵培养基为牛肉膏蛋白胨.目的蛋白可溶性表达的最佳诱导条件为:IPTG浓度0.6 mmol/L,诱导初始OD600为0.5,诱导时间为20 h,温度20℃,pH为7.0,微量元素Na2HPO420 mmol/L,250 mL三角瓶的装液量为70 mL.优化前可溶性AiiA蛋白的相对含量为2.23 mg/mL,占总目的蛋白的31.4%,优化后达到4.54 mg/mL,占总目的蛋白的60.3%,大大提高了目的蛋白的可溶性表达.     

多粘类芽孢杆菌培养条件优化研究

对多粘类芽孢杆菌菌株B-306的培养基配方及培养条件进行优化研究,优化后的多粘类芽孢杆菌B-306培养基配方及培养条件为:可溶性淀粉17.5 g·L-1、蛋白胨25.0 g·L-1、NaCl 1.25 g·L-1、Na2HPO40.5g·L-1、CaCl21.0 g·L-1,pH7.5;培养温度30℃、转速170 r·min-1、装液量80 mL/250 mL;接种量为10%(体积分数).经过以上条件优化,多粘类芽孢杆菌B-306的细胞生物量可达5.3×109cfu·mL-1,比优化前(3.17×108cfu·mL-1)提高了15.72倍.     

一株产高温纤维素酶曲霉菌的发酵条件及培养基优化

对一株产高温纤维素酶的曲霉(Aspergillus sp.)F4菌株进行培养基及发酵条件的优化.最佳产酶液体培养基配方为:稻草粉40 g·L-1,(NH4)2SO43.5 g·L-1,NaCl 2 g·L-1,KH2PO42 g·L-1,MgSO4.7H2O 0.5g·L-1,甘油0.20%,pH 5.5;优化后CMC酶活力提高16.7倍.优化后产酶条件为:接种量4%,温度37℃,摇床转速150 r.min-1,装液量80 mL/250 mL.在此条件下发酵8 d,CMC酶活力达到了12.26 U.mL-1,比优化前提高了约2倍.     

美洲商陆快速繁殖实验体系的建立

以美洲商陆(Phytolacca americana L.pokeweed)的茎尖为外植体,建立了美洲商陆的快速繁殖实验体系.茎尖增殖最佳培养基为 MS 0.05mg·L-16-苄基腺嘌呤(6-BA) 0.1mg·L-1赤霉素(GA3) 300mg·L-1水解乳蛋白(LH) 20g·L-1蔗糖 7.0g·L-1琼脂,pH5.8.诱导根的最佳培养基为1/2MS 0.4mg·L-1吲哚丁酸(IBA) 0.1mg·L-1GA3 300mg·L-1LH 15g·L-1蔗糖 7.0g·L-1琼脂,pH5.8.     

突变芳香基硫酸酯酶H260L工程菌的发酵条件优化

通过摇瓶培养对突变芳香基硫酸酯酶H260L工程菌的发酵条件进行初步优化,研究不同发酵条件包括接种量、诱导时期、诱导剂浓度、发酵时间、诱导剂加入方式、发酵温度及培养基初始pH值对重组芳香基硫酸酯酶表达的影响。结果表明,重组芳香基硫酸酯酶工程菌发酵的乳糖诱导表达优化条件为:以5%接种量培养3 h后,加入乳糖诱导剂至5 g/L,诱导表达7 h;当发酵温度为25℃、培养基的初始pH值为7.5时,重组芳香基硫酸酯酶活性最高。在优化条件下,工程菌芳香基硫酸酯酶活性达到2.63 U/m L,是未优化酶活性的46.9倍。突变酶H260L对龙须菜粗多糖硫酸基团的脱硫率为82.1%。     

酿酒酵母生长代谢影响因素的测定

以酿酒酵母为研究对象,通过单一变量控制,分别观察一定梯度的外界条件（温度,pH值,培养基,钙离子浓度及酒精浓度）对酵母生长和发酵的影响,探讨微生物生长代谢的规律性。结果表明,温度,酸碱度,培养基浓度,钙离子及酒精浓度是酵母生长代谢的重要影响因素。酵母最佳生长条件是：温度30℃,初始pH值为5,麦汁培养基浓度为11°BX,钙离子浓度为0.14 g.L-1,酒精浓度为1%;而酵母最适代谢条件略有不同,初始pH值为6,钙离子浓度为0.07 g.L-1,酒精浓度为0%。     

产菊酯降解酶重组菌的高密度发酵工艺优化

为提高菊酯降解酶的产量,利用单因素和正交实验法对重组菌Escherichia coli BL21(DE3)/p ET-28a(+)-sys410的发酵培养基组成和发酵条件进行优化。结果显示最优培养基含有20.0 g·L-1甘油、20.0 g·L-1酵母粉、8.0 g·L-1硫酸铵、100.0 mmol·L-1磷酸盐、5.0 mmol·L-1硫酸镁,以及1.5 m L·L-1的微量元素;发酵条件为装液量50 m L/250 m L、初始培养基pH 7.0、接种量2%,接种培养8 h后乳糖诱导6 h。在7.5 L发酵罐上,使用低浓度碳氮源进行培养,前期恒速补料,对数中后期进行乳糖诱导,后期恒溶氧补料,最终菌体密度和酶活力分别为142.6和3 105.1 U·m L-1,较摇瓶发酵分别提高13.7倍和31.9倍。发酵液经破碎和冷冻干燥后酶活力达到119 426.9 U·g-1,且该酶对菊酯的降解率高于95%。     

低浓度白芨葡甘聚糖溶液的流变性研究

研究了低浓度白芨葡甘聚糖(BSG)溶液的流变性与多糖浓度、外加电解质浓度、pH值及温度等的相关性。结果表明,BSG水溶液在2～16g.L-1时是假塑性流体。在低剪切速率下(γ.1s-1),溶液的表观黏度η迅速降低;剪切速率增大(γ.1s-1),溶液的η达到稳定(ηs)。在高剪切速率下溶液的ηs随浓度的增加而增加。向溶液中加入电解质,或者改变pH值,都不会影响ηs。对质量浓度为16g.L-1的BSG溶液,升高温度,η降低,η与温度的关系符合Arrhenius方程。     

RP-HPLC法测定原料药中头孢拉定的含量

利用反相液相色谱法（RP-HPLC）直接测定原料药中头孢拉定的含量.采用YQG-ODS色谱柱，以V(CH₃OH）∶V(4%HAc-NaAc）＝3∶7的溶剂作流动相，于λ=262 nm处紫外检测，以峰面积外标法定量.头孢拉定在0.027～0.29 g·L^-1浓度范围内具有良好的线性关系，回归方程为Y（μV·ｓ）=1.88×107X(g·L^-1)+20 876,r=0.998 3，平均回收率为99.7%,RSD为0.57%（n=3）.     

毛竹叶中氰化物的提取及其含量测定

建立了以水蒸气蒸馏法提取、采用离子选择性电极法测定毛竹竹叶中氰酸根离子的方法.以H₃BO₃溶液为离子强度剂,在18～25 ℃条件下中速搅拌,pH值12.0碱性介质中,测量范围为0.1～10.0 μg·g^-1,RSD (n=6)为1.1%～4.2%,回收率在96.0%～102.0%之间.方法具有操作简便、快速、灵敏度高等优点,测定结果满意.     

共沉法制备锰锌软磁铁氧体微粉钙镁脱除实验

研究了在碳酸盐共沉淀法制备锰锌软磁铁氧体前躯体净化过程中NH4F对钙镁杂质深度脱除的影响.实验结果表明,NH4F用量、反应时间和温度、pH值对钙镁的深度脱除都有显著影响.在反应温度为90 ℃,加入的NH4F溶液质量浓度为370.4 g·L^-1、体积分数为2.4×10^-2,pH值控制为3.5,反应时间为1 h的条件下,净化后液中的钙镁质量浓度分别为0.003,0.019 g·L^-1,共沉粉中的钙镁质量分数分别为7.5×10^-5和5．6×10^-5,均小于10^-4,达到制备高档锰锌软磁铁氧体产品的要求.     

Submerged culture of Magnetospirillum gryphiswaldense under N2-fixing condition and regulation of activity of nitrogen fixation

A submerged culture technique for Magnetospirillum gryphiswaldense under the nitrogen-fixing condition (microaerobic and N-limited) was set up. In N-limited medium with Na-lactate as a sole carbon source, the optical density (A_600nm) and activity of nitrogen fixation of cells were 1.3 and 217 nmol of ethylene produced per hour per A_600nm respectively within 21 h by three times of feeds. The pH and temperature were controlled at 7.2 and 30℃ respectively, and the oxygen concentration was controlled by sparging with N₂ containing 0.4%—0.8% of O₂. The activity of nitrogen fixation of cells was obviously inhibited by oxygen and ammonium. It indicated that the posttranslational regulation of nitrogenase existed in M. gryphiswaldense.     

阔叶缬草叶愈伤组织诱导初步研究

本试验以阔叶缬草( Valeriana fauriei Briq. ) 为材料,就激素对叶外植体愈伤组织诱导和增殖的影响作了初步研究.结果表明, 培养基中添加 2, 4- D能诱导愈伤组织产生, BA 能促进愈伤组织增殖. MS+ 2, 4- D 5 mol•L^{- 1}+ BA 2. 5μmol•L^{- 1}为诱导叶块愈伤组织的最佳组合.     

重组脂肪酶自诱导发酵培养基优化

【目的】优化自动诱导发酵培养基,提高脂肪酶产量。【方法】通过对构建的一株转座子整合型脂肪酶重组菌株,采用自动诱导发酵表达方法,并结合CCD响应面实验设计方法,对自动诱导培养基中的碳源进行优化,获得了1个二次模型用于描述发酵培养基中碳源对产脂肪酶的影响。【结果】优化后的最适自动诱导培养基(W/V)组成为glycerol 2.596,glucose 0.035,lactose 1.289,tryptone 1.0,yeast extract 0.5,Na_2HPO_4·12H_2O 1.79,KH_2PO_4 0.68,NH_4Cl 0.267 5,Na_2SO_4 0.071,MgSO_4·7H_2O 0.05。【结论】发酵试验表明,最优碳源培养基的比活力为R_1=6.35U/mg,比初始发酵培养基提高近3倍。     

Expression of E1 gene of a hepatitis C virus inE. coli and protein purification

The cDNA containing full encoding region of E1 antigen of HCV was cloned into an expression plasmid pRSETHisB. The recombinant plasmid pRSETE1 was introduced into the BL21 (DE3) strain ofE. coli. The engineering bacteria harbouring the pRSETE1 was cultivated in 2YT medium at 37°C. When the Expression of E1 protein was induced by 1 mmol IPTG, the bacteria was killed and the number of living cell was droped down from 10⁷ to 10³ cell/mL one hour post induction. Suggest that E1 protein is poisoned toE. coli. However, the 26kD polypeptide of E1 fussion protein still synthesized in appropriate condition. The expression level was about 10% of total protein 4 h after inducing. The E1 protin was purified by Ni²⁺-NTA-Agarose column chromatography to homogeneous. The purified E1 protein was sensitive and specific in reaction with anti-HCV antibody in sera. Supported by the Science Committec of Hubei Province Ye Linbai: born in Feb. 1948. Professor     

巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达rHCMVp的研究

目的：提高人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp)在巴斯德毕赤酵母中的表达量,并进行发酵罐高密度发酵。方法：将生长培养基的菌体离心后等量接入诱导培养基中(包括不同体积分数的甲醇、pH值)培养,通过菌体密度检测和发酵液上清的SDS—PAGE结果分析不同条件、不同诱导时间对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响,并依据优化条件进行高密度发酵。结果：摇瓶培养时,转化子在体积分数1％的甲醇pH6．0的条件下诱导72h,A600(菌体密度)为45．2,目的蛋白表达量达到10．2mg／L。2L发酵罐进行了高密度发酵,经体积分数1％甲醇诱导48h,最终A600(菌体密度)达到124,每升发酵液中含目的蛋白57．21mg。结论：通过条件优化,进行高密度发酵,获得大量的rHCMVp。     

猕猴桃软变及其多酚酶特性与动力学研究

研究表明, 常温下贮藏,猕猴桃软化速率与果实中多酚化合物含量的变化相一致. 软化时多酚物含量因氧化显著减少.对其多酚氧化酶研究发现: 其最佳底物是 4- 甲基儿茶酚;其催化的反应可用单底物反应模型来描述; 用氧电极测出酶催化反应的最佳条件是 pH 值为7.3, 温度为60;米氏常数为2.20*10^-3mol•L^-1,r_max=2.306 mg•L^-1 min^-1.