利用固定化酵母细胞生产ATP

利用明胶戊二醛制备的固定化啤酒酵母细胞,由腺苷酸(AMP)生产腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)。在含有15 mmol/L AMP,75 mmol/L葡萄糖,5mmol/L硫酸镁(MgSO_4·7 H_2O)的0.2 mol/L磷酸缓冲液(pH 7.0)中,在34℃振荡反应1h,ATP转化率可达100%,分批连续反应10次,ATP转化率保持在90%以上。     

硼酸基亲和层析纯化5-甲基尿苷

利用聚乙烯系大孔聚合物与间氨基苯硼酸偶联制备亲和介质，配基密度为每克湿胶0．92mmol。最佳吸附条件为pH9．0和2．0mol/LNaCl；最佳洗脱条件为0．1mol/LHCl。测定了吸附等温线，算得解离常数Kd为0．155mol/L，最大吸附量qm为每克湿胶78．8mg。将含有胸腺嘧啶的5－甲基尿苷溶液进行亲和层析，5－甲基尿苷收率为56．3％。     

高产耐热3''''-磷酸二酯酶菌种的选育及酶性质的研究

以粘红酵母(Rhodotorula glutinis)Q0402为出发菌株,经紫外谤变,得到一株粘红酵母QX0402.5 L发酵罐的发酵液中3'-磷酸二酯酶酶活力可达250 U/mL,为文献报道过的最高酶活力的2.5倍.所产生的3'-磷酸二酯酶在70℃下保温1 h,酶活力仍有50%以上.该酶最适反应pH为5.4,最适反应温度为60℃,反应3 h的反应转化率为56.37%,底物浓度可以提高到3%,生产效率为文献报道的3倍.     

麦芽根中5′-磷酸二酯酶的制备及性质

从麦芽根中提取5′－磷酸二酯酶，酶活可达474U／mL。将所得酶液用于水解酵母核糖核酸，得到5′－CMP、UMP、GMP、AMP4种单核苷酸。最佳反应条件为：底物RNA浓度为0.01g/mL，每毫升底物的酶用量为30U，酶解温度70℃，pH7.0，时间2h,5′－核苷酸转化率达80％。     

产核苷磷酸化酶大肠杆菌的培养及2′-脱氧-5-氟尿苷的酶法合成

研究了产核苷磷酸化酶大肠杆菌的摇瓶培养和发酵罐培养特征以及乙酸盐和底物诱导对核苷磷酸化酶活力的影响。结果表明：摇瓶培养时，延长菌体培养时间，菌体部分自溶时酶的转化率最高；发酵培养基中加入１０ｇ／Ｌ乙酸钠可使底物转化率提高７．７％，０．００１ｇ／Ｌ的底物ｄＵ诱导可使酶活力提高１１．０％；流加底物ｄＵ对酶反应转化率无显著影响，表明该酶促反应为非２′－脱氧尿苷底物抑制型；反应过程存在扩散控制，酶反应的最佳摇床转速为１６０ｒ／ｍｉｎ。     

用大肠杆菌游离细胞酶法合成核苷药物

研究了采用大肠杆菌游离细胞核苷磷酸化酶合成核苷药物过程中反应平衡常数和底物转化率的计算方法及其变化规律，阐明了游离细胞内核苷磷酸化酶的活力与细胞的培养、菌体的预处理方式密切相关。实验结果表明，大肠杆菌湿菌体经４℃干燥处理２￣３ｄ后，胞内核苷磷酸化酶不易失活，并能有效地降低胞内抑制物对酶反应的抑制作用。与湿菌体相比，干燥菌体用于酶反应时底物的转化率可提高３３．５％。     

用固定化啤酒酵母细胞合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱

κ－卡拉胶－魔芋多糖复配胶包埋的啤酒酵母细胞，经冻融处理后用于合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱（CDP－胆碱）。结果表明：250mL摇瓶中加入50mL反应液（葡萄糖400mol/L，CMP10mmol/L，磷酸碍碱50mmol/L,K2HPO4-KH2PO4缓冲液100mmol/L，MgSO410mmol/L,pH=8.0），固定化细胞1200g/L,34℃、150r/min下，反应4h后补加400mmol/L葡萄糖，反应8h可使60％以上的CMP转化为CDP－胆碱。反应液经灭菌和添加辅酶I（NAD^ ）后，固定化细胞可连续使用4次，CDP－胆碱转化率维持在40％以上。     

固定化啤酒酵母细胞合成5’-三磷酸腺苷

用K-卡拉胶包埋啤酒酵母制成固定化细胞,在0.05mol/L葡萄糖,0.022mol/L腺苷酸,0.012mol/LMgSO_4·7H_2O,0.2mol/L氯化钾,0.2mol/L磷酸钾缓冲溶液(pH7.0)中,35℃反应4小时,5′-三磷酸腺苷转化率可达42%,在50ml三角烧瓶中分批反应,连续使用5次,5′-三磷酸腺苷转化率仍维持在37%以上。     

酶法合成抗癌新药氟铁龙前体——5-FUR

筛选得到一株核苷磷酸化酶活力高的乙酰短杆菌,以该菌体为酶源酶法合成抗癌新氟铁龙前体5－氟尿苷,所用反应物为鸟苷和和5－氟尿嘧啶。在150mL的摇瓶装液15mL的条件下进行研究,结果显示：菌体添加量20－30g／L,底物浓度100mmol／L,磷酸盐浓度500mmol／L（pH8．0）,60℃,摇床转速160r/min,反应4h,5－氟尿苷的转化率可以达到60％以上。     

D-核糖发酵过程中的pH控制及对产D-核糖关键酶的影响

在枯草芽孢杆菌突变株D-756发酵生产D-核糖过程中,采用葡萄糖和葡萄糖酸钙混合发酵,葡萄糖酸作为pH调节剂,能促进菌体的生长,显著地提高D-核糖的产量。经酶活测定,发现流加葡萄糖酸能提高单位发酵液中葡萄糖酸激酶的酶活。在5L发酵罐中,利用葡萄糖酸维持发酵pH值在7．2,培养72h后产核糖76．8g／L。