猪胰蛋白酶自溶后的活性产物

酶的催化作用起因于分子中某些部位氨基酸残基的特定空间结构,即“活性部位”的存在。使酶分子发生有限度的降解,观察它对酶活性的影响,乃至分离出具有酶活性的降解产物——“活性碎片”,这是研究酶的结构与功能的关系的方法之一。在这方面,胰蛋白酶特别引人注意,因为在一定条件下,无需外加蛋白酶,胰蛋白酶本身就能发生自溶作用;同时胰蛋白酶的高度的专一性对于确定肽链断裂的位置也是很有帮助的。     

由生产胰岛素后的猪胰残渣和废液中用亲和层析法制备胰蛋白酶抑制剂

1.介绍了两种新的固定化胰蛋白酶的制备方法。一种是以微球型硅胶为载体,以戊二醛为交联剂,将猪胰蛋白酶吸附和固定在载体上。另一种是以甘蔗渣纤维素为载体,以对-β-硫酸酯乙砜基苯胺为双功能试剂,将猪胰蛋白酶共价偶联在载体上。两者都已成功地用作亲和层析的吸附剂,从工业生产胰岛素后的胰渣和废液中回收胰蛋白酶抑制剂。 2.提出了应用固定化胰蛋白酶的亲和层析技术从胰渣和废液中回收胰蛋白酶的工艺流程。经过中间试验,证明采用所制订的工艺流程,可以得到相当数量、具有一定纯度的胰蛋白酶抑制剂。 3.根据对所得抑制剂的初步分析,推测它是一种小分子量的硷性多肽,类似Kazal抑制剂。     

猪胰蛋白酶及其自溶活性产物的圆二色性研究

用圆二色性谱(CD谱)研究了猪胰蛋白酶及其自溶活性产物在溶液中的构象,并观察了在十二烷基硫酸钠(SDS)溶液中酶分子构象的变化。 猪胰蛋白酶的CD谱显示有相当量的α-螺旋成份及少量β-折叠成份,它在190nm附近的[θ]值远大于牛胰蛋白酶。其自溶活性产物的CD谱显示α-螺旋的成份减少5—6％,β-折叠成份上升3—6％,而有序部分所占比例基本不变,提示自溶后α-螺旋转化为β-折叠。 在SDS溶液中,α-螺旋和β-折叠在胰蛋白酶分子中所占的比例提高,而α-螺旋成份增加更为明显,表明酶分子的有序度提高。 参照Chou与Fasman以及Chen,Yang与Martinez等人的方法,预测猪胰蛋白酶有36％的氨基酸残基可以形成α-螺旋,由实测CD谱计算,亦在37％左右,两者相符。     

C-反应蛋白的研究:1.驴C反应蛋白的纯化与理化性质

1930年Tillet和Francis在炎症急性期病人血清中观察到有一种能特异性地与肺炎球菌细胞壁C多糖发生沉淀反应的蛋白质,后来被命名为C-反应蛋白(简称CRP)。 最初,CRP被认为是一种抗体,后来的实验证明它不是抗体,而是典型的非特异性的炎症急性期的反应性蛋白质。用放射免疫方法测定,CRP在正常动物血清中仅微量存在(平均为1340ng/ml血清),当动物患有组织损伤或炎症时,血清中CRP含量便成千倍地增加,几乎与组织损伤或炎症的程度成正比。当病理状况恢复正常时,CRP含量也下降。     

北京鸭血清中C-反应蛋白的研究

C-反应蛋白(CRP)从北京鸭血清中分离和纯化。其方法是根据此蛋白对Ca~(2+)结合依靠性的亲和层析,之后通过Sepharose 4B和DEAE-Sephadex A-50层析。在C_4~(2+)存在下,鸭CRP很容易和肺炎球菌C-多糖反应生成沉淀。聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-PAGE测定结果表明,鸭CRP的表观分子量是1,100,000 doltons。很可能天然条件下的CRP是两种不同亚基的聚合体。鸭CRP是糖蛋白。在电子显微镜下观察到CRP分子呈圆盘状,其直径约为100nm。     

C-反应蛋白的研究:2,骆驼和猪C反应蛋白的分离和性质

自30年代发现人血清中C-反应蛋白(CRP)以来,由于它与免疫系统功能有密切关系,因此,对它的生理生化特性和功能的研究正在逐步深入。这些研究在很大程度上取决于有足够数量的高纯度的CRP样品。早期的研究多采用在血清中加入固体硫酸铵,先将CRP沉淀出来,然后再进一步纯化。后来又发展了用人工合成的带磷酸胆碱的各种亲和吸附剂来分离CRP。由于不同种属动物血清的成分十分复杂,除人和兔血清通过亲和层析法,直接可以得到SDS凝胶电泳纯制品以外,其他动物血清用此方法一般都得到两种以上的蛋白质组分的产物,还需要经过离子交换、凝胶过滤等进一步纯化,才能得到适于结构分析的CRP制品。     

C-反应蛋白的研究3.熊C-反应蛋白的分离纯化和性质

C-反应蛋白(CRP)是一种急性炎症期的血清蛋白,它能与肺炎球菌细胞壁上的C-多糖结合而产生沉淀。对CRP的性质和生物学功能已有不少报导。CRP的有些生物学性质类似免疫球蛋白,但CRP的作用是非专一性的,在化学结构上与免疫球蛋白也不同。另外Robey发现CRP还可以和染色质结合,他认为CRP可能在清除损伤细胞的DNA上起重要作用。