克拉维酸发酵液中碳源--甘油含量的比色法测定

研究了克拉维酸发酵液中甘油含量的测定方法,在412 nm得到了甘油测定的线性回归方程y=0.0236x-0.0036,R2=0.9997,在0～40mg·L-1范围内,线性关系良好.通过回收率实验,证明发酵液中其他成分对测定结果干扰较小.该方法重现性好,方法简单,比较适合发酵液中甘油含量的测定.     

杂多酸催化合成聚氧丙烯甘油醚

采用可溶性固体杂多酸作均相反应催化剂,以及不可溶性固体杂多酸盐作非均相反应催化剂,合成了聚氧丙烯甘油醚。实验结果表明,采用杂多酸作催化剂在中温、常压条件下,就可合成了产率较高的符合工业技术指标的聚氧丙烯甘油醚。用元素分析、IR、1HNMR和羟值的测定确定了产物的组成和分子量,得出最佳合成条件。     

Debaryomyces sp.甘油激酶基本动力学性质研究

通过平板初筛和摇瓶复筛,从105株菌中筛得一株甘油激酶的高产菌株,并研究了其所产甘油激酶的动力学性质.研究结果表明:在MES系统中,甘油激酶有较好的酸碱稳定性,pH稳定范围为5.5～10.5;最适pH和最适温度分别为pH 8.0和50℃,该酶催化甘油的米氏常数(Km)为3.5×10-5mol/L,催化ATP的Km为4.46×10-4mol/L.同时对一些金属离子和有机化合物对酶活性的影响也进行了研究.     

优选发酵毕赤酵母与酿酒酵母混合发酵的葡萄酒酿造应用潜力

实验基于主要发酵副产物的生成含量评价优选发酵毕赤酵母与酿酒酵母混合发酵对葡萄酒质量的影响。采用优选发酵毕赤酵母Z9Y-3和商业酿酒酵母F33设计同时和顺序两种接种方式启动模拟葡萄汁的酒精发酵,以酿酒酵母和发酵毕赤酵母单菌株发酵为对照。琥珀酸和乳酸利用高效液相色谱法测定,甘油采用高碘酸钠氧化法分析,挥发酸采用水蒸气蒸馏法测定。结果显示,优选菌株参与下的发酵没有显著影响酒精发酵的进程,但在发酵过程中发酵毕赤酵母生长速率低于酿酒酵母。与酿酒酵母纯发酵相比,混合发酵提高了甘油的含量,降低了挥发酸的含量,其中顺序接种的发酵过程中酿酒酵母活菌数最高,发酵毕赤酵母存活期最长(7d),发酵过程中甘油累积量最高(2.7g/L),挥发酸含量最低(0.2g/L)。不同发酵处理中,琥珀酸和乳酸含量均呈现先增后降的趋势,但其最终含量变化不显著。综上可得,优选发酵毕赤酵母和酿酒酵母的混合发酵具有应用于葡萄酒酿造的应用潜力。     

甘油脱水酶的研究进展

甘油脱水酶是微生物发酵法生产3-羟基丙醛和1,3-丙二醇过程中的关键限速酶.文中对甘油脱水酶的结构与功能、作用机制、基因工程研究等情况进行综述,探讨了甘油脱水酶的研究进展并提出一些建议.     

Rational design of glycerol dehydratase： Swapping the genes encoding the subunits of glycerol dehydratase to improve enzymatic properties

1,3-propanediol (1,3-PD) is an important material for chemical industry,and there has been always much interest in the production of 1,3-PD using all possible routes. The genes encoding glyc-erol dehydratase (GDHt) from Citrobacter freundii,Klebsiella pneumoniae and metagenome were cloned and expressed in E. coli. All glycerol dehy-dratases but the one from metagenome could be detected to show enzyme activities. In order to im-prove the enzymatic properties of GDHts,the genes encoding α and β-γ subunits were cloned,and the enzyme characteristics were evolved by rational de-sign based on their 3D structures which were con-structed by homology modeling. Six heteroenzymes were obtained by swapping the α subunit genes of these three different-source-derived GDHts. The pH,thermal stability and Vmax of some heteroenzymes were dramatically improved by 2―5 times compared with the wild one (GDHtKP). The GDHt cloned from metagenome,originally proved to be with no enzyme activity,was converted into active enzyme by swap-ping its subunits with other different GDHts. In addi-tion,the effect of subtle 3D structural changes on the properties of the enzyme was also observed.     

耐高浓度甘油的1,3-丙二醇生产菌的诱变选育

利用紫外线对克雷伯杆菌进行诱变,筛选出耐高浓度甘油且1,3-丙二醇(1,3-PD)产量较高的突变株KpⅥ.实验结果表明,在距离34 cm,功率30 W的紫外灯垂直照射下,最佳紫外诱变时间为6 min,此时,致死率为90.9%.克雷伯杆菌经过紫外诱变后,菌落明显增大,是原始菌株的2~4倍;变异菌株KpⅥ经过6代遗传稳定性考察,甘油消耗率和1,3-PD产量稳定,且保持了较高水平.在甘油质量浓度为90 g.L-1的条件下,变异菌株KpⅥ的甘油消耗率为98.3%,甘油转化率为50.4%,1,3-PD产量为44.81 g.L-1,生产能力达到0.75 g.(L.h)-1.     

不同胁迫下盐生杜氏藻3-磷酸甘油脱氢酶基因表达及其与甘油合成的响应

在已克隆的盐藻（Dunaliella salina）3-磷酸甘油脱氢酶GPD基因的基础上，利用实时荧光定量PCR的方法，研究了经高盐、厌氧、磷酸盐以及氧化等不同外界胁迫条件下该基因的表达情况，并同时监测了盐藻细胞甘油合成的动态变化.对比酿酒酵母的GPD基因，发现D.salina GPD基因受高渗诱导，同时D.salina细胞内可能存在多个形式的GPD基因.     

油脂一步法合成脂肪腈──工艺条件对甘油回收率的影响

研究了油脂一步法制脂肪腈工艺中，甘油回收技术。选用适当的低温催化剂，在230℃~280℃，氨气流速1000L/hkg左右，采用分段冷凝回收工艺和回流萃取技术可获得浓度85%以上工业粗甘油，总收率达90%，杂质含量很少。     

pET-11b-rhIL-6/BL21(DE3)工程菌高密度发酵工艺研究

以甘油作为碳源、乳糖为诱导剂的发酵方法,平均表达量可达21.91%±5.64%,平均生物量可达338.00 g±77.30 g;以葡糖糖为碳源、IPTG诱导法,平均表达量21.35%±4.94%、平均生物量191.18 g±32.09 g);而以葡糖糖为碳源、乳糖为诱导剂的方法平均生物量可达319.00 g±63.98 g,但表达量只有13.57%±4.56%.