Cytoskeleton reorganization and FAK phosphorylation are involved in lanthanum （Ⅲ）-promoted proliferation and differentiation in rat osteoblasts

The effect of lanthanum ion (La³⁺) on osteoblast function and cytoskeleton is assessed in vitro. Osteoblasts were isolated from Sprague-Dawley fetal neonatal rats. Cell proliferation and gene expression levels of cbfa-1, alkaline phosphatase (ALP), osteocalcin (OC), bone sialoprotein (BSP) and osteopontin (OPN) were examined by cell counting and RT-PCR. Cytoskeleton F-actin was stained with rhodamine-conjugated phalloidin and was visualized by a confocal microscope. As the results, 10⁻⁸-10⁻⁴ M La³⁺-induced osteoblast proliferation on day 2. Data from the RT-PCR assay revealed that 10⁻⁶ M La³⁺ up-regulated the expression levels of ALP, BSP, and cbfa-1 on day 4, while it enhanced the expressions of OC and OPN on day 21. The F-actin cytoskeleton was strengthened and reorganized under the exposure of La³⁺. In addition, the phosphorylation of focal adhesion kinase (FAK) was significantly promoted in 24 h evaluated by Western blot analysis. These findings indicate that La³⁺ promotes osteoblast activity through the phosphorylation of FAK and reorganization of the cytoskeleton.     

拟南芥信号传递途径

探讨拟南芥发育过程中一些调控基因表达的信号是如何传递的。广泛查阅近期有关发育生物学方面的文章,综述了拟南介信号传递的过程。发现植物体有许多与动物相同的信号传递途径,如磷酸化级联途径。在拟南芥中Raf1激酶,蛋白激酶（MEK）、蛋白激酶激酶（MAPK）都与信号转导直接有关。另外发现磷酸化过程在一定程度上依赖于卷须蛋白（CLV1）的自动磷酸化。植物信号转导途径类似于动物,通过磷酸化作用传递各种信号,来保持细胞增殖和分化的平衡。     

平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白非Ca2 依赖性磷酸化(2)

为了初步揭示肌球蛋白轻链激酶(MLCK)对肌球蛋白(myosin)非Ca2 依赖性磷酸化的特征 试验方法采用10%甘油聚丙烯酰胺凝胶电泳检测myosin的磷酸化,用孔雀绿法测定myosin Mg2 -ATP酶活性及选择Scoin Image扫描软件分析所获得的数据。提出在MLCK参与的myosin活性调节中,myosin以非磷酸化、非Ca2 依赖性(CIPM)及Ca2 依赖性磷酸化(CDPM) 种状态存在 研究发现非Ca2 依赖性磷酸化myosin有以下特征:(1)耗能(Mg2 -ATP酶活性)高于非磷酸化myosin但低于Ca2 依赖性磷酸化myosin;(2)花生四烯酸(AA)可选择性加强myosin非Ca2 依赖性磷酸化;(3)在本试验条件下,未观察到MLCK抑制剂ML-9对非Ca2 依赖性myosin磷酸化的抑制作用;(4)组胺(histamine)对非Ca2 依赖性的抑制小于对Ca2 依赖性磷酸化的抑制,且这些差异在统计学上有显著性。以上结果提示myosin非Ca2 依赖性磷酸化不仅在程度上,而且在机制上与Ca2 依赖性磷酸化可能存在重要区别     

平滑肌肌球蛋白轻链激酶对肌球蛋白非Ca^2＋赖性磷酸化（2）

为初步揭示肌球蛋白轻链激酶(MLCK)对肌球蛋白(myosin)非Ca^2 依赖性磷酸化的特征。试验方法采用10％甘油聚丙烯酰胺凝胶电泳检测myosin的磷酸化,用孔雀绿法测定myosin。Mg^2 -ATP酶活性及选择Scoin Image扫描软件分析所获得的数据。提出在MLCK参与的myosin活性调节中,myosin以非磷酸化、非Ca^2 依赖性(CIPM)及Ca^2 依赖性磷酸化(CDPM)三种状态存在。研究发现非Ca^2 依赖性磷酸化myosin有以下特征：(1)耗能(Mg^2 -ATP酶活性)高于非磷酸化myosin但低于Ca^2 依赖性磷酸化myosin;(2)花生四烯酸(AA)可选择性加强myosin。非Ca^2 依赖性磷酸化;(3)在本试验条件下,未观察到 MLCK抑制剂ML-9对非Ca^2 依赖性myosin磷酸化的抑制作用;(4)组胺(histamine)对非Ca^2 依赖性的抑制小于对Ca^2 依赖性磷酸化的抑制。且这些差异在统计学上有显性。以上结果提示myosin非Ca^2 依赖性磷酸化不仅在程度上,而且存机制上与Ca^2 依赖性磷酸化可能存在重要区别。     

原癌基因K-Ras调控APPThr668位点磷酸化及APP的切割

在阿尔茨海默症(Alzheimer′s disease,AD)发病的早期,Ras蛋白所在的信号通路被激活,但具体作用机制还不清楚.探讨了K-Ras及其突变体K-RasG12V对淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)的剪切的影响.Western blot结果显示,过量表达K-Ras能够激活细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase,ERK 1/2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)通路,并增加APP在Thr668的磷酸化;抑制JNK通路则阻断了K-Ras过表达所引起的APP Thr668磷酸化.此外,过表达K-Ras造成分泌到细胞外的sAPPα增加,而sAPPβ减少.通过生物素标记实验发现,过表达K-Ras使得APP在细胞膜上的定位增加,而细胞内APP总量没有改变.这些结果表明,过量表达K-Ras可以通过调控JNK的通路,增加APP在Thr668位点的磷酸化,造成APP在细胞膜上水平升高,导致APP向sAPPβ的切割减少,而向sAPPα的切割增加.提示K-Ras对APP切割的影响可能在AD的发病过程中起着一定的应激作用.     

禁食对小鼠下丘脑磷酸化蛋白质组的影响

本研究旨在通过干预小鼠进食,探讨对小鼠下丘脑中蛋白质磷酸化修饰和相关信号通路的影响,为完善蛋白磷酸化调控网络提供有价值的信息.将实验小鼠平均分为3组,分别为对照组(con)、禁食组(D2)和禁食后恢复组(DR),每组小鼠数量为3只.在48 h内,con组正常提供饲料,D2组不提供饲料,DR组前44 h不提供饲料、后4 h提供饲料.同时解剖3组小鼠并提取下丘脑组织,提取、纯化和酶解下丘脑组织的蛋白质,并采用二氧化钛富集分离技术富集磷酸化肽段,运用高通量液相色谱-质谱联用进行检测,以鉴定样品中的磷酸化蛋白质组.利用非标记定量方法筛选差异表达的磷酸化蛋白以及位点,对鉴定数据进行GO富集和KEGG通路分析,并探究磷酸化蛋白间的相互作用关系.结果显示,共鉴定到4 810个磷酸化蛋白质,对应于14 259个磷酸化位点发生了变化.采用数学统计方法分析,成功确认小鼠下丘脑中有681个磷酸化蛋白差异显著,观察到这些差异蛋白与蛋白结合、激酶行为、转运、轴突生成等分子活动和生物学过程有关,并富集到了MAPK、细胞内噬和环磷酸腺苷信号通路等11个主要的信号通路.这说明禁食会对小鼠下丘脑中多种蛋白质的磷酸化修饰...     

人类TBC1D7蛋白的表达纯化及其在mTOR通路中的作用机制研究

mTOR信号通路在真核细胞代谢调控中发挥着关键的调控作用，该通路核心元件mTORC1复合物的活性受其上游TSC复合物负调控，TSC复合物包括TSC1、TSC2、TBC1D7三种蛋白.以TBC1D7蛋白为研究对象，通过氨基酸序列比对显示多物种来源的TBC1D7蛋白具有较高的保守性，且蛋白三维结构分析证实其分子表面存在高度保守区域.随后，构建了人类TBC1D7蛋白原核表达载体并在大肠杆菌中表达得到全长TBC1D7蛋白，经过酶切去除标签和凝胶排阻层析得到了高纯度TBC1D7蛋白.另一方面，通过在HCM细胞中对TBC1D7进行敲降和过表达，证实了TBC1D7的表达会直接升高mTORC1的活性；反之，升高TBC1D7的表达则会抑制mTORC1的活性.本研究表达和纯化了人类TBC1D7蛋白，并探讨了在人类心肌细胞中TBC1D7的表达与其下游mTOR信号通路之间的联系，为人类TBC1D7蛋白和mTOR信号通路的进一步研究打下了良好基础.     

BLAP75蛋白在细胞有丝分裂期中的磷酸化研究

BLAP75为分子量75kDa的一个维持基因组稳定性的重要蛋白,但是其在细胞有丝分裂期中的分子调控机制尚不清楚.运用Western印迹和细胞有丝分裂期细胞同步化技术,检测BLAP75蛋白在细胞有丝分裂期的变化,以及采用蛋白磷酸酶反应和基因定点突变技术来确定BLAP75蛋白的磷酸化位点.研究发现,当细胞处于有丝分裂期时,BLAP75蛋白会受到翻译后磷酸化修饰,位于BLAP75蛋白中部的第284位丝氨酸和第292位丝氨酸是其磷酸化位点.     

大脑葡萄糖代谢研究获重要进展

在大脑中,葡萄糖通过不同的新陈代谢途径起作用从而产生能量——这是它在大脑中最重要的功能,但葡萄糖同时也可以通过其他几种关键的调节(例如,细胞凋亡)、保护(即对抗     

海洋病原细菌Enterobacter sp. EM28-2共存氯霉素乙酰化和磷酸化灭活机制

报道1例氯霉素耐药性病原菌中共存乙酰化和磷酸化灭活机制。海洋病原菌Enterobactersp.EM28-2(Cmr,M IC=128μg/mL)接种在含25μg/mL标准品D-(-)-氯霉素LB培养基中培养24h后,可同时生成乙酰化和磷酸化氯霉素。LC-MS分析检测出新生成3类指纹峰:①[M C2H2O-H]-(m/z 363.0,364.9),对应氯霉素C1位羟基的乙酰化产物;②[M PO3-H]-(m/z 398.9,400.9,402.9),对应氯霉素C3位羟基的磷酸化产物;③[M C4H4O2-H]-(m/z 408.7,410.7),对应氯霉素C1位和C3位羟基的乙酰化产物。