XeCl准分子激光辐照能量变化对溶菌酶结构与活力的影响

采用XeCl准分子激光器,以不同能量密度激光(0.1 mJ/mm2,0.3 mJ/mm2,0.5 mJ/mm2)辐照溶菌酶,研究辐照后酶活力和蛋白质结构变化。以SDS-PAGE方法检测酶分子间聚合情况,并结合荧光光谱、圆二色光谱变化,探讨不同能量密度激光辐照对溶菌酶活力和分子结构变化规律。结果表明,较低能量密度(0.1 mJ/mm2,0.3 mJ/mm2)辐照,溶菌酶的荧光光强和酶活力随着辐照剂量(脉冲数)的增加出现先上升后下降的规律变化,而较高能量激光辐照(0.5 mJ/mm2)导致溶菌酶活力和荧光光强均呈下降趋势,这说明激光辐照导致的溶菌酶活力和分子结构变化存在剂量依赖效应。SDS-PAGE显示,随着辐照能量密度和脉冲数的增加,溶菌酶出现了更多的分子间聚合。较低能量密度辐照时,聚合是由分子间二硫键形成的,而较高能量密度诱发的分子聚合是由分子间二硫键及疏水键协同作用形成的。圆二色光谱分析显示,激光辐照使溶菌酶分子内α螺旋和转角的含量均呈现不同程度下降,β-折叠和无序的氨基酸无规则卷曲的比例均有升高,这说明溶菌酶活力的降低及分子聚合是由溶菌酶分子二级结构改变造成的。     

绿草履虫Paramecium bursaria大核染色质组份和组蛋白的研究

绿草履虫P.bursaria是在接有产气杆菌Aerobacter aerogems的无菌稻草提取液中进行克隆培养后取得的。在非离子去污剂NP-40(含有二价阳离子Ca~(2 ),Mg~(2 ))的溶液中裂解细胞,经蔗糖梯度离心分离、提纯细胞大核,并制备染色质,测定其中组蛋白、非组蛋白、DNA和RNA的相对含量。用稀酸抽提绿草履虫大核和大核染色质,得到的酸溶性蛋白(即组蛋白),经PAGE、SDS-PAGE、PAGIF和氨基酸分析等方法测定。得到的结果是:绿草履虫大核染色质中DNA:RNA:组蛋白:非组蛋白=1:0.02:1.30:0.59;组蛋白占染色质蛋白质的68.8％;大核和大核染色质的酸溶性蛋白是相同的,都具有相当于高等动物的全组蛋白的五条组蛋白带,只在其相对含量及电泳迁移率上,与高等动物的全组蛋白略有差别;由16种氨基酸组成,20％是酸性氨基酸,不存在色氨酸和半胱氨酸;五条蛋白带的分子量为1.1000～21000道尔顿,也类似于哺乳动物细胞组蛋白;这是一类碱性很弱的蛋白质,等电点为pH8.02～9.4;碱性氨基酸和酸性氨基酸的比为1.03:1,这一点却更接近酵母全组蛋白。     

菠菜叶绿体蛋白质的提取与分离

以菠菜叶片为材料运用亚细胞分离技术——蔗糖密度梯度离心分级分离得到完整叶绿体,再利用多种不同裂解液分步顺序处理叶绿体以得到叶绿体基质蛋白和膜蛋白。经Brmldford法测定,其蛋白含量相对较高。最后用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分离上述蛋白。结果表明：在所得蛋白条带中发现有许多不同的条带,预示着分步顺序提取法的有效性和叶绿体各部分蛋白存在的差异性。此外除得到叶绿体成分外,还发现一些高密度成分（尚未鉴定）。对如何分离完整叶绿体进行了较为详细的讨论。     

高压诱变啤酒酵母及突变株SDS-PAGE电泳分析

本文运用现代高压生物技术，选育优良啤酒酵母菌种。分析了高压处理对啤酒酵母的生长影响，研究不同压力，不同保压时间对啤酒酵母致死率的影响，考察高压与啤酒酵母变异之间的关系。确定300MPa，保压时间为15min时，啤酒酵母具有较高的突变卒，以此条件处理啤酒酵母，并以高温筛选，获得耐高压耐高温变异菌株MS-3。并对变异菌株蛋白质进行SDS—PAGE分析。     

一些抗氧化剂对蛋白质氧化降解的保护作用

SDS-PAGE were employed to detect the inhibitions of some antioxidants to the degradation of bovine serum albumin induced by AAPH.The result showed that Rosmarinic acid,uric acid,sodium deoxycholate and GSH exhibited inhibitions at low concentration(125μmol/L),but thiourea needs high concentration(250μmol/L).Nicotinicacid and Vc did not show obvious protection even the consistence up to 2000μmol/L.Mannitol's behavior was neither clear no concentration-dependent.Thymol blue bromide,pyrogallic acid and Trolox     

十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳的实验教学改进

在本科生物化学实验教学中,为减少有机溶剂的使用,同时缩短实验时间,作者对SDS-PAGE的脱色过程进行改进,使用0.5mol/L NaC l代替含挥发性有机溶剂做脱色液,取得了良好的实验效果。     

鲤鱼过敏原(胶原蛋白)的体外模拟消化

首先采用酸法提取纯化鲤鱼过敏原(胶原蛋白),依据美国药典提供的模拟胃液、肠液配方,分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对纯化的胶原蛋白进行酶解消化,以SDS-PAGE和免疫印迹分析测定纯化的胶原蛋白在体外模拟胃液、肠液中的消化稳定性及免疫原性.结果表明,鲤鱼胶原蛋白经模拟胃液(胃蛋白酶)消化15 min出现较为明显的降解,消化1 h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液(胰蛋白酶)消化30 min出现较为明显的降解,消化3 h的产物仍具有一定的免疫原性;经模拟肠液(胰凝乳蛋白酶)消化1~4 h均未出现明显降解,其消化产物仍具有较强的免疫原性.结果提示,鲤鱼胶原蛋白的耐消化性及免疫原性可能是导致食物性过敏反应的重要原因.     

Tris-HCl法提取蝶类干标本蛋白质的研究

用Tris-HCl法对蝶类干标本头部、胸部和腹部进行蛋白质的提取,提出了适合蝴蝶干标本蛋白质的提取方法,并成功地应用于SDS-PAGE分析.表明用该方法提取蝴蝶干标本蛋白质可行.     

大连湾牡蛎蛋白的分离提取及分子量测定

以大连湾牡蛎为实验材料．首先采用冰醋酸粗提法提取牡蛎蛋白,然后用葡聚糖凝胶(Sephadex-G100)进行柱层析分离,SDS—聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白,Kodak凝胶成像分析仪分析及测定分子量．结果显示大连湾牡蛎中含有分子量为55kd的牡蛎特征蛋门,同时分离出其它4种蛋白质,分子量介于33．0～63.4kd之间．     

大豆分离蛋白酶解过程的研究与产物分析

将大豆蛋白（ＳＰＩ）经过Ａｓｌ．３９８中性蛋白酶水解，可以获得良好溶解性的多肽，氢基酸及ＩＳＳＰＨ等极有利用价值的大豆水解产物．本文探讨大豆分高蛋白经酶水解后产物（ＳＰＨ）的水解度及粘度变化．通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，半微量－凯氏定氮法，Ｇ－２５凝胶过滤，双缩脲法和茚三酮法分析ＳＰＨ的可溶上清液和不溶渣滓中成分变化情况，并探讨了水解大豆蛋白在食品上的应用．因为其在营养上有更多的优点，可以作为功能型食品的原料开发出具有生理活性作用的食品．