鹰嘴紫云英抗甲硫氨酸变异系离体筛选及鉴定

目的离体筛选鹰嘴紫云英(Astragalus cicerL.)抗甲硫氨酸变异系。方法通过NaN3诱变处理鹰嘴紫云英(Astragalus cicerL.)的愈伤组织来筛选获得抗甲硫氨酸变异细胞系。结果获得了抗100 mmol/L甲硫氨酸变异细胞系,并分化成再生植株。结论该变异系对甲硫氨酸具有一定的抗性,并对乙硫氨酸具有交叉抗性。     

高粱胞质雄性不育及保持系的RAPD技术优化

以高梁细胞质雄性不育系和保持系A1T623A/B,A2V2A/B为材料，考察了Mg^2 ，Taq酶，dNTP，引物，模板等的用量、循环参数及不同的PCR仪对随机扩增多态性DNA（RAPD）反应的影响。结果发现：在25μL体系中，MgCl22．0mmol/L，Taq酶0．75U（1U＝1μmol/min），dNTP0．15mmol／L，引物16．5ng，模板30ng，明0．001％，KCl50mmol。L，Tris10mmol/L（pH8．3）为最佳反应混合物组合。对PeltierThermalCycler200而言，94℃预变性5min，94℃预变性5in，94℃变性1min，35℃退火1min，72℃延伸2min，最后72℃保温5min，共计40个循环为最佳扩增条件；对PerkinElmerCetusDNAtThermalCycler-480而言,采用94℃预变性3min后，前3个循环，94℃变性1min，35℃退火1min，72℃延伸2min，后37个循环，94℃变性30s，36℃退火45s，72℃延伸45s，72℃延伸1min，最后72℃保温5min的循环程序可获得理想扩增。并阐述了优化RAPD实验体系的设计原则。     

小麦叶基切段愈伤组织的诱导和植株再生

从3～5d龄小麦籽苗幼叶基部切段诱导出大量愈伤组织。诱导可再生的愈伤组织的培养基为MS 1．5mg／L 2，4-D 0．2mg／L，激动素(KT) 500mg／L，水解酪蛋白(CH) 120mg／L，天冬酰胺 100mg／L，肌醇 3％蔗糖 0．7％琼脂粉。当愈伤组织转移到生长调节物质改变为2mg／L KT，1mg／L NAA和0．1mg／L 2，4-D的MS培养基上培养后，出现了苗的分化。当分化苗在无机盐分减半的MS培养基上培养后，产生了根。愈伤组织的形成和植株再生的频率与外植体的位置和籽苗的发育阶段密切相关，3～4d龄苗叶基1cm处的切段效果最好。叶基愈伤组织的分化能力可保持3～4个月。     

发根农杆菌A_4菌株转化红豆草途径及转化组织植株再生研究

将生长２０ｄ的红豆草（ｏｎｏｂｒｙｃｈｉｓｖｉｃｉａｅｆｏｌｉａ）无菌苗的下胚轴切成０．５～１ｃｍ片段，倒插在含２，４－Ｄ的固体ＭＳ培养基上预培养两天；然后转至无激素培养基上，用发根农杆菌Ａ４，（ＡｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓＡ４）菌悬液感染切面，１０ｄ后长出许多发状根。这些发状根在无激素培养基上继代培养，生长旺盛，且产生许多次生侧根，将次生根切段后，在含２，４－Ｄ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织，进一步分化形成完整植株，初生根、次生根、愈伤组织，以及再生植株叶片均含有农杆碱和甘露碱，而未转化的对照愈伤组织则没有。另外对Ｃｕ２＋促进发状报生长的作用进行了研究。     

用Ames试验检测某铝厂电解车间粉尘有机提取物及其组分的诱变活性

应用化学分离与Ａｍｅｓ试验相结合的方法,研究了某铝厂电解车间粉尘有机提取物及其５个组分的诱变活性．结果表明,某铝厂电解车间粉尘有机提取物具有较强的诱变活性．５个组分中,其中的３个组分有机酸、多环芳烃、极性化合物在铝厂电解车间粉尘有机提取物的诱变活性中起重要作用;另外２个组分有机碱和脂肪烃没有诱变活性．铝厂应采取消烟除尘措施,控制致癌、致突变物的污染,保护环境及人类健康     

影响小麦原生质体培养因素的研究

小麦胚性愈伤组织酶解５小时后，原生质体产率可达６．３×１０６ｇ．ｆｗ－１，酶种类和浓度对小麦原生质体的产率有影响小麦原生质体对不同浓度渗透剂的适应范围较广，在添加０．３ｍｏｌ·Ｌ－１０．７ｍｏｌ·Ｌ－１甘露醇、山梨醇的培养基上，存活率超过５０％所试培养基中，ＫＭ８Ｐ效果最好，实验表明可能与含丰富的附加成分有关除高浓度精胺外，小麦原生质体的存活率随腐胺、精胺浓度的增加而上升，但对原生质体的分裂频率影响不大在上述最佳条件下，小麦原生质体在培养３５天后出现第一次分裂，２０天后统计分裂频率为２５．６％，３个月后植板率为２８％，并形成较多的愈伤组织     

天仙子+烟草体细胞杂种愈伤组织遗传转化的研究

处于对数生长时期的五种野生型根癌农杆菌菌株分别与继代培养的天仙子+烟草属间体细胞杂种愈伤组织系共培养育后,在元激素条件下以不同的频率获得了离体转化的愈伤组织系.在转化组织内,根癌农杆菌 Ti 质粒上 T—DNA 编码的激素合成酶基因和冠癌碱合成酶基因得到了转移、整合与表达.     

用mRNA差异显示技术分离盐胁迫下小麦耐盐相关cDNA

目的用mRNA差异显示技术分离小麦盐胁迫应答cDNA,为进一步研究小麦耐盐机理奠定基础。方法将小麦(Triticum aesticum L.)耐盐品系宝丰7228r种子分别置于含NaC l 0‰和12‰的Hoagland培养液中生长,7d后分别取叶片,提取总RNA并分离出其中的mRNA,通过锚锭引物O ligo dT10GC反转录和9个10核苷酸随机引物进行PCR扩增。结果DDRT-PCR结果显示,有4个差异DNA片段只在盐胁迫的小麦耐盐品系基因组中表达,而在对照中没有出现。这4个差异cDNA片段分别命名为ts01(260 bp),ts02(330 bp),ts03(420 bp),ts04(600 bp)。4个差异cD-NA片段的RNA杂交结果显示,只有ts04存在明显差异,在盐胁迫条件下有杂交斑点而在对照中没有杂交斑点,其余3个cDNA片段在盐胁迫和对照中都没有杂交斑点。进一步将ts04克隆并进行DNA序列测定及同源性分析。结论ts04可能是耐盐相关cDNA片段,该片段核酸序列与麦属抗性相关的肌动蛋白基因有23%同源。     

小冠花高效体细胞胚胎发生与植株再生的研究

目的建立小冠花稳定高效体细胞胚胎植株再生体系。方法采用植物离体组织培养技术,通过优化外植体,基本培养基及其激素组合,提高体细胞胚发生和植株再生频率。结果子叶外植体在附加1.0mg/L 2,4-D,1.0mg/L NAA,0.5mg/L KT和100mg/L脯氨酸的MSB培养基上35d100%形成体细胞胚,产生体细胞胚数量达625个/g,在MS KT 1.0mg/L IBA 0.1mg/L 脯氨酸300 mg/L培养基上转换成完整植株的平均数为21棵/g。再生植株移栽成活率为80%,其形态特征和生长习性未见变异。外源激素是体细胞胚胎诱导所必需的,2,4-D是其中最关键的一种。结论建立了小冠花高频稳定高效体细胞胚胎发生和植株再生体系。