4个群体西太公鱼mtDNAD—loop区段的限制性片段长度多态性分析

应用PCR技术对天津市于桥水库、北京市密云水库、日本北海道和日本青森县4个群体共151尾西太公鱼（Hypomesusnipponensis）的mtDNAD-loop区段进行扩增,得到长度约为1．8kbp的扩增片段．扩增出的DNA片段使用13种核酸内切限制酶进行酶切,其中8种核酸内切限制酶（AluI、DraI、HaeⅢ、Hindm、HinfI、MboI、TaqI和XspI）有酶切位点,5种核酸内切限制酶（AluI、HinfI、MboI、TaqI和XspI）个体间存在变异．不同酶切结果组合后,共得到28种单倍型,于桥水库、密云水库、北海道和青森西太公鱼均以单倍型6为主,分别为36．36％、38．30％、43．33％和26．67％;于桥水库、密云水库、北海道及青森西太公鱼单倍型多样性指数（危）分别为0．8171、0．8141、0．7793和0．8828;核苷酸多样性指数Or）分别为0．007918、0．007326、0．007255和0．009710．于桥水库西太公鱼与密云水库西太公鱼之间的Rogers遗传距离最小,为0．1499;于桥水库西太公鱼与日本青森西太公鱼之间的Rogers遗传距离最大,为0．2215;日本北海道西太公鱼与密云水库西太公鱼之间的遗传距离为0．1511,大于于桥水库西太公鱼与密云西太公鱼之间的遗传距离,但小于日本境内北海道西太公鱼与青森西太公鱼之间的遗传距离．     

用5′加尾长引物进行AFLP片段的直接测序

现有的AFLP标记片段测序方法比较费时,成本也较高.设计一个包括EcoRI接头引物和5′端加36个额外核苷酸的长引物AF2SC,用该引物再扩增时可AFLP片段末端增加36个碱基.再利用这36个碱基的末端序列进行测序,只需一次反应就能获得AFLP标记片段的全序列.该方法缩短了AFLP片段测序所需时间,也降低了实验成本.     

朝天椒遗传多样性的AFLP标记分析

利用AFLP技术对22份朝天椒材料进行遗传多样性分析.结果显示,9对AFLP引物共扩增出724条谱带,其中97条为多态性条带,占总条带数的13.40%.聚类分析表明,材料间遗传距离GD变幅为0.028～0.677,平均值为0.306;位点多态性信息含量PIC变幅为0.157～0.399,平均值为0.263;在遗传距离GD值0.360水平上,22份朝天椒材料可聚成三大类.AFLP标记揭示出这22份朝天椒材料遗传变异较小,遗传基础比较狭窄.     

转基因鲤的生态安全检测

以抚远的野鲤、松花江哈尔滨江段的鲤和养殖鲤作对照,对混有不同比例转大麻哈鱼生长激素基因鲤亲本的子一代的基因组进行扫描,评价其生态安全性.在64对AFLP引物中,选出10对扩增条带清晰的引物对对照组、1%实验组、10%实验组、25%实验组、50%实验组、60%实验组、H组和Y组8个群体的基因组扩增,得到了663个位点,每个群体的多态位点数目均大于50%,且随着转基因鱼亲本比例的上升,子代中多态性位点比例的数目在下降;计算了观测等位基因Na、有效等位基Ne、Nei’s基因多样指数H、Shannon信息I、群体内遗传相似度S和遗传距离D、群体间遗传相似度S和遗传距离D、群体间遗传分化度Gst和基因流Nm,并对8个群体进行了比较.结果显示：观测等位基因Na、有效等位基因Ne、Nei’s基因多样指数H 和Shannon信息I 都是Y组最大,其次是对照组,H组最小,在5组含有不同比例转基因鱼亲本的子代中,随着转基因亲本的比例的上升,这4个指数呈下降趋势.群体间相似性S和遗传距离D显示：25%,50%和60%实验组在不同程度上与其它群体产生了分化,特别是60%实验组已经明显的超出了同一种群的范围,可见与60%实验组已经与其它实验组间产生了较大的差异.5个转基因实验组与H组和Y组的遗传分化度Gst和基因流Nm比较显示：群体间基因分化较大,基因流较小,随着转基因鱼亲本比例上升,子代群体中的遗传分化度增大,基因流下降.可以看出随着转基因亲本比例的增加,子一代的基因组呈一定的规律在变化,说明转基因对逃逸后对野生种群的影响是随着逃逸数量增大而增大的,应该防止高比例的转基因鱼逃逸到野生群体中,对野生群体的基因组造成污染.     

利用AFLP技术分析果蝇黑疱翅突变体

参考家蚕AFLP构建遗传连锁图的构建方法,建立了适于果蝇的AFLP反应体系.利用该AFLP反应体系分析了果蝇黑疱翅突变体基因组与其亲本黄身果蝇的差别,得到数个差异片段,散布于果蝇2,3号染色体上.     

Construction of AFLP-based genetic linkage maps for the Chinese shrimp Fenneropaeneus chinensis

Fenneropaeneus chinensis is an important species in marine fishery resources and aquaculture in China. A genetic linkage map is essential for improving the efficiency of its breeding by marker-assisted selection and identifying commercially important genes. Linkage maps of F. chinensis were constructed with an F2 mapping population （110 progenies） using amplified fragment length polymorphic （AFLP） marker in this study. Fifty-five AFLP primer combinations produced 532 AFLP markers fitting for map strategy in mapping family. The markers with 3：1 segregating ratios were analyzed using F2 intercross model for the common linkage map, while the markers with 1：1 ratio were analyzed using the pseudo-testcross strategy. The maps of male, female and common were constructed. The female map included 103 markers that formed 28 linkage groups, covering a total length of 1090 cM. All markers were linked with the linkage groups. Segregation distortion was observed for 6 of 103 markers in the female map. The average distance between markers was 14.53 cM and ranged from 4.4 to 24.8 cM. The male map included 144 markers that formed 35 linkage groups. Ten markers remained unlinked in male map. Segregation distortion was observed for 7 of 144 markers in the male map. The total distance of male map covered 1617 cM. The average distance between markers was 16.36 cM. The male map was 32.6% longer than the female map, which may reflect sex-specific recombination rates in Chinese shrimp. The common map was composed of 216 markers, including in 44 linkage groups covering a total distance of 1772.1 cM. Two markers remained unlinked. No distorted markers of 216 markers were shown in the common map. The distance between markers was 10.42 cM. An average estimated genome size for the Chinese shrimp was 2420 cM, which was consistent with the relative size of the Penaeid genome. The distribution of AFLP markers was relatively even in chromosomes of Chinese shrimp maps. The linkage analysis presented in this work provided some insight     

鳡鱼群体遗传多样性的AFLP分析

利用AFLP分子标记技术对长江下游苏州段野生和野生F1代人工养殖的2个鳡鱼(Elopichthys bambusa)群体遗传多样性进行分析研究.6对选择性引物在2个群体47个个体中,共扩增出313个位点,多态位点47个.鳡鱼野生和野生F1代人工养殖2个群体的多态位点比率和Shannon's指数分别为13.42%、8.31%,0.0544、0.032 O;前者遗传多样性较后者略高.基因分化系数Gst 和Shannon's指数分析均显示2个鳡鱼群体之间出现一定遗传分化.鳡鱼UPGMA系统树有分支出现且依据群体分别聚类,表现出一定的遗传趋异.结果分析表明,鲢鱼群体的遗传多样性相对贫乏;野生F1代人工养殖群体尚未形成自己独立的遗传结构,但2个群体间已经产生了一定的遗传分化,经过较多世代的人工繁育有可能形成自己独立而稳定的遗传结构.     

新疆棉花枯萎病菌7号生理小种的AFLP分析

采用AFLP技术对新疆棉花枯萎病菌7号生理小种的36菌株和2个标准枯萎病菌菌株进行了DNA指纹分析。结果表明：11对AFLP引物对供试菌株扩增出287条带,其中多态性带99条,占总带数的34.49%,棉花枯萎病菌7号小种的遗传距离变化在0.41~0.95间,平均为0.71,表明新疆棉花枯萎病菌的遗传多样性较高。利用NTSYS pc软件中UPGMA算法构建了新疆棉花枯萎病菌的亲缘关系树状图,聚类分析结果表明：供试菌系的AFLP指纹多态性与致病力多态性不相关,但枯萎病菌遗传多样性与病原菌的地理来源有一定的相关性。     

AFLP技术在昆虫分子系统学研究中的应用

概述了AFLP分子标记技术在昆虫分类鉴定、遗传图谱构建、遗传多样性分析、群体遗传结构和分化、生态型分析等分子系统学应用研究方面取得的较大进展．总结了AFLP的改进技术,并提出对相关问题的思考．     

α-淀粉酶固态发酵的研究

研究了固态法发酵生产α－淀粉酶的工艺,用麸皮作原料,其优化条件是:在接种量0.08%,拌水比1：0.6,pH6.0,培养温度37℃,葡萄糖浓度15%,发酵72小时,其酶活力可达1742u/g。与液态发酵相比,固态发酵能有效地克服分解代谢产物的阻遏作用。