脂肪酶促Ketoprofen对映体选择性酯化反应--有机溶剂、助溶剂及添加剂的影响

系统研究了有机介质、助溶剂及添加剂对脂肪酶Novozym 435(Candida antarctica lipase B)催化的Ketoprofen的对映体选择性酯化反应的影响.以环己烷为反应介质,Novozym 435表现出较高的活性和对映体选择性;助溶剂及添加剂对Ketoprofen的立体选择性酯化反应有较大影响: 极性助溶剂苯和甲苯能提高酶反应的对映体选择性;添加少量的18-Crown-6能提高酯化反应速率和对映体选择性;在研究的范围内,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)不能提高酶反应对映体选择性.     

脂肪酶作用下鱼油和卵磷脂的酯交换反应

在正己烷有机溶剂中脂肪酶能有效地催化鱼油和卵磷脂的酯交换反应,本研究探讨了反应温度,酶活力和底物不同比等条件下对卵磷脂和鱼油在的ω－3脂肪酸结合率的影响,结果表明,当在25mL的正己烷中,反应温度为45度,酶活力为0．8u/mL,r(卵磷脂）：r( 鱼油）＝1：4时,反应24h后卵磷脂中DHA／EPA的结合率为16．3％。     

脂肪酶干燥方法对环十五内酯合成的影响

研究了冷冻干燥法,真空干燥法,N2吹干法3种干燥方法对Candida.sp.GXU08所产脂肪酶活力的影响,以3种方法制得的酶为催化剂进行了15-羟基十五烷酸甲酯环化反应.结果表明,冷冻干燥的酶粉酶活保留率最高,有78.74%,转化率为1.367%;真空干燥酶活保留率有75%,转化率为1.158%;N2吹干法的酶活保留率最低为63.9%,转化率仅有0.405%.     

6种中药单体脂肪酶抑制活性及其作用机制

筛选具有胰脂肪酶抑制活性的中药有效成分，明确其作用机制。以文献报道的有减肥降脂作用的6种中药单体化合物（熊果酸、齐墩果酸、姜黄素、大黄酸、芒果苷和二氢杨梅素）为筛选对象，以市售减肥样品奥利司他为阳性对照品，采用对硝基苯酚法通过测定反应体系在405 nm下的吸光度数值来测算出其对胰脂肪酶的抑制率。同时测定抑制作用最强姜黄素的3种主要分解产物（反式阿魏酸、香草酸、香草醛）对胰脂肪酶的抑制率。结果显示：奥利司他、黄素和熊果酸的半数抑制浓度（IC₅₀）依次是0.95 μmol/L、27 μmol/L和100 μmol/L，黄素和熊果酸的抑制作用机理都是通过抑制剂和酶的相互作用，阻碍酶和底物的作用，属于非竞争性抑制。齐墩果酸和双氢杨梅素的最大抑制率是（27.45±0.04）%和23.76%，其余样品的最大抑制率均少于10%；姜黄素和熊果酸具有显著的胰脂肪酶抑制作用，其抑制作用机理属于非竞争性抑制，齐墩果酸和双氢杨梅素有一定脂肪酶抑制作用，其余单体及姜黄素分解产物均无明显脂肪酶抑制作用。     

根癌农杆菌介导脂肪酶在无孢黑曲霉中的高效表达

黑曲霉(Aspergillus niger)具有高效的蛋白表达和分泌能力.为实现异源蛋白在无孢黑曲霉中的高效重组表达,在优化遗传筛选标记的基础上,建立了根癌农杆菌介导的、以潮霉素抗性基因为筛选标记的黑曲霉转化体系.利用该体系介导米黑根毛霉脂肪酶(RML)转化黑曲霉SH-1,通过PCR鉴定、酶活检测、镍柱亲和层析及SDS-PAGE电泳检测等确定成功获得了RML的黑曲霉转化子,并通过发酵条件优化实现了RML的高效表达,对硝基苯酚比色法测得转化子酶活最高可达15 U/mL,是其在酵母中表达水平的10倍以上.     

离子液体中6-O-(11-十二烯酸)葡萄糖酯的脂肪酶催化合成及其表征

为了探索脂肪酶在离子液体中选择性地催化葡萄糖与11-十二烯酸乙酯的转酯化反应,通过不同脂肪酶在不同离子液体中进行转酯化反应,并用单因素法研究离子液体种类、温度、底物的比例、体系含水量和脂肪酶含量对反应产率的影响,优化反应条件。反应产物的结构通过红外光谱、高效液相色谱、质谱和核磁共振等表征。结果表明:脂肪酶Novozym-435在离子液体1-正丁基-3-甲基咪唑氟硼酸盐[BMIM][BF4]中,当反应温度为55℃、酶浓度20mg/mL、葡萄糖/11-十二烯酸乙酯的摩尔比1∶2、体系的水含量为2%时,获得糖酯的产率最高,Novozym-435可以重复使用7次。脂肪酶Novozym-435在离子液体[BMIM][BF4]中选择性转酯化反应的产物为6-O-(11-十二烯酸)葡萄糖单酯。     

三组分大孔树脂的合成及其在脂肪酶固定中的应用

以甲苯和正庚烷为致孔剂,采用悬浮聚合法合成了三组分甲基丙烯酸缩水甘油酯-二甲基丙烯酸乙二醇酯-丙烯酸丁酯(GMA-EGDMA-BA)环氧基大孔树脂,并应用于脂肪酶的固定。结果表明,加入第三单体丙烯酸丁酯后,同GMA-EGDMA相比较,GMA-EGDMA-BA树脂的孔径变大,其固定化酶量提高约1倍(达20mg/g);同游离酶相比较,固定化酶对温度和pH值的适应性有所提高,其活性恢复达到83.3%以上。     

固定化脂肪酶催化（R，JS）-1-苯乙醇转酯化拆分反应及动力学研究

利用制备的舍Fe304无机磁性复合物FSN固定假单胞茵脂肪酶（Pseudomonas sp Lipase,PSL）,获得具有高活性、高对映体选择性和易分离的固定化酶PSL／FSN．乙酸乙烯酯做酰化试剂,PSL／FSN在正庚烷溶剂中催化（R,S）-1-苯乙醇转酯化拆分反应,40℃反应2h时,（S）-1-苯乙醇对映体过量值eep和（R）-乙酸-1-苯乙酯的对映体过量值eep均为99％,（R,S）-1-苯乙醇的转化率达到理论值。固定化酶PSL／FSN在70℃经2h热处理,其活性和对映选择性没有明显的下降;PSL／FSN重复使用10次,其活性和对映体选择性未出现衰减。基于实验数据,研究了固定化酶催化（R,S）-1-苯乙醇转酯化拆分反应的动力学行为,获得了（R,S）-1-苯乙醇转酯化拆分反应的动力学方程。     

脂蛋白酯酶的分离纯化及其部分性质研究

将Candida rugosa用橄榄油诱导培养,所得上清液依次经过截留分子量10 000中空纤维柱浓缩,85%硫酸铵沉淀,然后经过DEAE-Sepharose F.F.离子柱和Phenyl Sepharose CL-4B柱进行交换层析和疏水层析,得到了活力达6.04 U/mg的脂蛋白酯酶,纯化倍数和回收率分别为13.8倍6.6%。所得纯化酶经还原和非还原SDS-PAGE分析为单一蛋白染色带,HPLC显示纯度为95%以上。该酶的最适温度为40℃～50℃之间,最适pH为7.5,具有较强的热稳定性和酸碱稳定性,在最适温度和pH条件下该酶Km值为3.4×10-4mol/L。     

解脂假丝酵母胞外脂肪酶的提纯和性质

通过ＤＥＡＥ－ＣｅｌｌｕｌｏｓｅＤＥ－５２和ＤＥＡＥ－ＳｅＰｈａｄｅｘＡ－５０离子交换层析等提纯步骤，对解脂假丝酵母胞外脂肪酶进行了纯化，得到了层析纯样品，比活提高２７．４倍，得率１１％．该酶反应最适温度为４０℃；最适ＰＨ为７．５；等电点约在ＰＨ４．５～５．０之间；８℃以下存放，酶活力损失较少，３０℃以上存放，酶活力有明显损失．金属离子Ｓｒ２＋，Ｂａ２＋，Ｚｎ２＋和Ｍｇ２＋对该酶的激活作用为Ｓｒ２＋＞Ｂａ２＋＞Ｚｎ２＋＞Ｍｇ２＋．Ｃｕ２＋和Ｎａ＋对酶活性有抑制作用．ＮａＮ３对保持酶活性有重要作用．