对氨基苯甲酸生物合成基因pabAB的缺失对抗生素FR-008生物合成的影响

抗生素FR-008是由链霉菌FR-008产生的一种七烯大环内酯类抗真菌抗生素,它以对氨基苯甲酸(PABA)为起始单位,在I型聚酮合酶(PKS)的催化下合成聚酮内酯环.前期生物合成基因簇序列测定发现了可能的对氨基苯甲酸生物合成基因(pabAB),编码4-氨基-4-脱氧-分支酸(ADC)合成酶.通过同框缺失实验获得pabAB发生缺失的基因置换突变株BLQ-1并通过聚合酶链式反应(PCR)扩增进行了验证.高效液相色谱(HPLC)分析和生物测定证实突变菌株BLQ-1丧失了合成抗生素FR-008的能力.这种产量的丧失可以通过回补克隆的pabAB基因或喂养外源PABA得到回复.实验证明,pabAB负责对氨基苯甲酸的合成,是抗生素FR-008生物合成的必需基因.     

Construction of the glucose isomerase deficient strain ofStreptomyces M1033 by homologous recombination

After the establishment of the transformation conditions ofStreptomyces diastaticus No.7 Strain M1033, the integration plasmid pXW for homologous recombination, which contains a 600 bp fragment of incompleteGI (G138P. G247D) gene, has been constructed in order to realize the stable overexpression of theGI (G138P. G247D) which is valuable for large-scale industrial production. The Gigene’s disruption has been realized by pXW’s integration into M1033 chromosomes via homologous recombination andGI deficient strain ofStreptomyces M1033 has been obtained. The reliability of introduction of mutation has been proved by analysis of recombinant fragment and affirmance of existence of the mutation, as well as detection of the stability of the deficient strain.     

链霉菌(Streptomyces sp103)发酵产物对4种病原真菌的抑菌活性

采用生长速率法测定了链霉菌Streptomyces sp103的发酵液及其菌丝体的乙醇提取物对小麦赤霉病病菌、苹果轮纹病菌、苹果炭疽病菌、油菜菌核病病菌4种病原真菌的抑菌活性.结果表明:发酵液对4种病原真菌的相对抑制率分别为100%,86.7%,82.9%和100%,而其菌丝体的乙醇提取物对3种病原真菌的相对抑制率均为100%.     

他克莫司产生菌原生质体制备、再生与诱变

对筑波链霉菌的原生质体制备、再生条件进行了研究,建立了筑波链霉菌的原生质体诱变筛选体系.在此基础上,通过原生质体的紫外诱变处理,筛选得到1株高产菌株,与出发菌株相比,该菌株的平均发酶单位提高51.4%.通过原生质体的紫外诱变来筛选他克莫司高产菌株是一种行之有效的方法.     

具有杀虫效果的生物肥料的研制

具有杀虫效果的生物肥料是一种集药效和肥效为一体的生物制剂.本项目研究了胶质芽孢杆菌、圆褐固氮菌和阿维链霉菌的发酵工艺,并研制出一种新型生物肥料.该产品的各项技术指标均符合农业部有关肥料的质量标准,既具有较好的增产作用,同时具有较强的杀虫效果.     

海洋链霉菌产生几丁质酶的研究

从闽南地区潮间带红树林根际海泥中分离到能产生几丁质酶(Chitinase)的放线菌(Actinomyces)300余株,研究了各种诱导物、碳氮源及培养条件对链霉菌S-128(Streptomyces sp.S-128)菌株几丁质酶生物合成的影响,结果表明,该菌株几丁质酶的合成能被多种几丁质所诱导,是一种诱导酶,添加氮源尤其是有机氢源能促进酶的合成,而碳源却没有这种作用,基本培养基中加入2.O％脱矿质几丁质和1.5％玉米浆,在28℃发酵5d,发酵液的几丁质酶活性可达290u/ml,该酶对几丁质的水解反应显出较宽的pH范围(pH3～8)和较好的pH稳定性,最适pH5.0,在一定的温度范围内,该酶的活性随温度的上升而增高,并以65℃的酶活性最高。     

生米卡链霉菌突变株生理特性的研究

产生麦迪霉互的生米卡链霉菌经过诱变育种后，其生理代谢特征发生了变化，不仅产生 迪霉素单位有差异，而且孢子形成和发酵生理特征与菌体蛋白及胞外酶也发生了改变，并且对外辊加入的诱导物质也存在不同的反应。     

泾阳链霉菌抗菌能力研究

对液体培养及固体培养条件下泾阳链霉菌的抗菌作用进行了测定,结果表明:这种放线菌对多种微生物类群的生长有抑制作用,并且不同的发酵条件下表现出的抗菌活性不一致,液体发酵条件下只对10种指示菌中的细菌和酵母菌有抗性,而固体培养条件下则只对其中的2种霉菌有效.两种农作物病原菌棉花枯萎病菌和青枯病菌也可被泾阳链霉菌有效地抑制.     

BlaB,a protein involved in the regulation of <Emphasis Type="Italic">Streptomyces cacaoi</Emphasis> β-lactamases,is a penicillin-binding protein

Streptomyces cacaoi -lactamase genes are controlled by two regulators named blaA and blaB. Whereas BlaA has been identified as a LysR-type activator, the function of BlaB is still unknown. Its primary structure is similar to that of the serine penicillin-recognizing enzymes (PREs). Indeed, the SXXK and KTG motifs are perfectly conserved in BlaB, whereas the common SXN element found in PREs is replaced by a SDG motif. Site-directed mutations were introduced in these motifs and they all disturb -lactamase regulation. A water-soluble form of BlaB was also overexpressed in the Streptomyces lividans TK24 cytoplasm and purified. To elucidate the activity of BlaB, several compounds recognized by PREs were tested. BlaB could be acylated by some of them, and it can therefore be considered as a penicillin-binding protein. BlaB is devoid of -lactamase, D-aminopeptidase, DD-carboxypeptidase or thiolesterase activity.Received 13 January 2003; received after revision 9 April 2003; accepted 11 April 2003     

抗生素AGPM高产菌株选育及其蛋白差异分析

从土壤中分离得到一株能产生新型抗生素AGPM的藤黄灰链霉菌菌株,利用紫外线和硫酸二乙酯对新型抗生素AGPM产生菌藤黄灰链霉菌099菌株进行了联合诱变处理,最终得到了一株高产菌株TD0551,其抗生素AGPM产量可达到16．45mg/L,为出发菌株的2．1倍,应用蛋白质二维凝胶电泳技术分析了藤黄灰链霉菌的蛋白质组,比较了高产菌株与低产菌株在分泌AGPM过程中的蛋白质组差异。结果表明,在高产菌株的蛋白样品中有11个特异点,而在低产菌株的蛋白样品中有3个特异点,这些蛋白特异点可能与新型抗生素AGPM的合成有关。