经大肠杆菌感染的中国家蚕cDNA文库的构建

用建立非表达文库的方法,从大肠杆菌感染后９ｈ的中国家蚕的ｍＲＮＡ合成ｃＤＮＡ片段,重组入噬菌体λｇｔ１０的ＥｃｏＲＩ的位点之间,所构成的基因非表达文库库容量为２×１０６重组子,经大肠杆菌Ｃ６００与Ｃ６００ｈｌｆ菌株平皿测定,重组率为７６％．     

含色氨酸系列抗菌肽对多药耐药粪肠球菌的抗菌作用

粪肠球菌是院内感染中最常见的一种革兰氏阳性致病菌,与多种疾病密切相关.近年来,由于抗生素的滥用,粪肠球菌对市场上的多种抗生素都有不同程度的抗性,死于粪肠球菌感染的患者人数逐年增加,因此,迫切需要寻找和开发新的抗菌药物.抗菌肽是广泛存在于生物体内的一种小分子肽,具有广谱性、高效性、稳定性等特点,其独特的杀菌机理使细菌不易产生耐药性,因此,抗菌肽是目前最有应用前景的新型抗菌药物.研究了含色氨酸系列抗菌肽对临床分离的多药耐药粪肠球菌的抗菌活性及膜作用机制.结果显示含色氨酸系列抗菌肽对多药耐药粪肠球菌具有高杀菌活性,其作用靶点位于细胞膜上.通过增加多药耐药粪肠球菌外膜和内膜的通透性,并扰乱膜稳定性,使细胞内容物泄漏致细胞死亡.含色氨酸系列抗菌肽还能通过抑制多药耐药粪肠球菌群体感应系统中fsr各组分的表达,抑制毒性因子自溶素和明胶酶的活性,降低生物被膜组分胞外DNA的生成量,最终抑制生物被膜的生成.     

鲎素抗菌肽的分子结构稳定性及生物活性

为了实现鲎素这种高效、广谱的抗菌肽在生产实践中的应用,采用不同温度、pH值、体外蛋白酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶B)分别处理鲎素,通过检测鲎素最小抑菌浓度(MIC)的变化来衡量鲎素的生物活性稳定性;采用高效液相色谱(HPLC)检测鲎素残留量,通过HPLC图谱变化来评定鲎素分子结构的稳定性.结果表明:温度小于120℃、pH值小于11.30时,鲎素对大肠杆菌K88的MIC为1.25～5.00 mg/L;高效液相色谱检测得鲎素残留量在65.46～70.21 μg之间;鲎素对胃蛋白酶的作用表现出很高的稳定性,对胰蛋白酶、羧肽酶B、弹性蛋白酶的作用稍微敏感;在胃蛋白酶酶活浓度不高于5.33 mmol/,(s·L)、胰蛋白酶酶活浓度不高于0.67mmol/,(s·L)、羧肽酶B酶活浓度不高于0.17mmol/,(s·L)、弹性蛋白酶酶活浓度不高于0.021 mmol/,(s·L)的条件下,鲎素仍具有活性.这说明鲎素抗菌肽具有较强的高温耐受性,在酸性条件下具有稳定性,且具有一定的耐受蛋白酶降解的能力.     

大黄鱼Piscidin—like抗菌肽基因部分cDNA的克隆与序列分析

利用RT-PCR、3'RACE等技术,从养殖大黄鱼免疫器官头肾和脾组织克隆出Piscidin-like抗菌肽基因的cDNA(311 bp),其中包含部分信号肽、完整的成熟肽与优势域的编码区、终止密码子以及3'端非编码区(3'UTR)和典型的多腺苷酸化信号(AATAAA).获得的cDNA编码80个氨基酸,与已报道的鱼类Piscidins家族抗菌肽序列比对,表明存在相似的结构域,相似性(Similarity)和一致性(Identity)分别为50%～77%和41%～70%,分子量为2 596.06 u,理论等电点为12.10.与该家族抗菌肽普遍特征相吻合,属于Piscidins家族的新成员.     

苯并(a)芘暴露引起黑鲷肝、脾、肠组织病理变化

研究了黑鲷暴露于不同浓度的苯并（a）芘水体中,其肝、脾、肠等内脏组织的病理变化．观察结果表明：黑鲷较长时间暴露于含有苯并（a）芘的水体中,其肝、脾、肠等内脏器官组织结构受到不同程度的损害,如：肝细胞核肿胀,肝窦扩张,水样变性;脾窦扩张,淤血,空泡化;肠绒毛紊乱,杯状细胞增多．并且这3种组织随着暴露时间的延长,损伤程度日益严重．因此,海洋鱼类的组织病理变化可作为有机污染物的直接生物标记．     

基于多标签直推学习的抗菌肽及其抗菌功能预测

抗菌肽是广泛存在于生物体内的一类具有广谱抗菌作用的天然多肽,因其不易导致细菌耐药性,已成为医药界开发新型抗菌制剂的主要选择,识别出更多的抗菌肽并预测其抗菌功能具有重要意义.提出了一种基于多标签直推学习的抗菌肽及其抗菌功能的预测方法,该方法利用K-spaced氨基酸对组成方法提取多肽特征,采用多标签学习框架和加权近邻图构建直推预测模型,通过对有标签训练样本和无标签待测样本的共同学习来提升预测性能.该方法不仅能够识别多肽是否为抗菌肽,还能同时预测出抗菌肽所具有的单种或多种抗菌功能,且适用于对多效抗菌肽和普通抗菌肽的预测.数值实验表明,与已有的iAMP-2L预测方法相比,所提方法在全局预测精度和多标签预测性能上均有较大提升.     

人工合成绿蝇防御素及其活性研究

采用人工合成的方法研究绿蝇防御索（phormicin A）对细胞及肿瘤作用效果，实验结果发现，人工合成的绿蝇防御素可以在较低浓度下抑制革兰氏阳性菌的生长（MIC＝5－75μg/mL），其中以金黄色葡萄球菌的反应最为敏感，MIC为5μg/mL，而且当人工合成的绿蝇防御素浓度升至300μg/mL时可以抑制大肠杆菌的生长，但无法抑制绿脓杆菌的生长，此外，它还能抑制MDA435乳腺癌细胞及TSU前列腺癌细胞的体外增殖，抑制率分别为22．21％（P＜0．05）和35．53％（P＜0．01）。     

抗菌肽Mastoparan V1及其衍生肽对细菌细胞膜通透性的影响

通过测定抗菌肽Mastoparan V1及其衍生肽与细菌细胞膜的作用，对比探究了其对细菌细胞膜通透性的影响．首先，应用生物信息学软件分析抗菌肽Mastoparan V1理化性质参数；其次，通过氨基酸替换方式设计得到衍生肽N2K/K5L．采用Fmoc固相合成制备多肽．通过抑菌活性和细菌外膜、内膜实验，对比探究了Mastoparan V1肽和N2K/K5L肽以细菌细胞膜为靶点的抑菌机理．结果表明，N2K/K5L肽的疏水性高于MastoparanV1肽．N2K/K5L肽抗革兰阴性菌和革兰阳性菌活性分别是Mastoparan V1肽的14.5,9.5倍．Mastoparan V1肽和N2K/K5L肽均能增加细菌外膜和内膜的通透性，但N2K/K5L肽提高细菌细胞膜通透性能力更强，这应是N2K/K5L肽抑菌活性相比于Mastoparan V1肽显著提高的主要原因．     

天然家蚕抗菌肽对人白细胞及巨噬细胞淋巴瘤细胞骨架系统作用的比较

报道了天然家蚕抗菌肽ＣＭ４对离体Ｕ９３７癌细胞骨架及核骨架损伤作用的扫描电镜观察。随着时间的延长，经天然家蚕抗菌肽ＣＭ４作用后的癌细胞骨架断裂，固缩成团状；癌细胞核骨架断裂，部分凝聚成团，结构不完整。相同剂量的天然家蚕抗菌肽ＣＭ４与正常人白细胞作用后细胞骨架及核骨架未见损伤现象。说明天然抗菌肽与重组抗菌肽的抗癌作用相同。     

黑鲷和青石斑鱼对气泡幕反应的比较

在室内水池中观察了黑鲷（Sparus macrocephalus）和青石斑鱼（Epinephelus awoara）对孔径0.5mm、孔距5.0cm，空气压力0.25kg/cm^2固定气泡幕的反应。结果表明，气泡幕对两种海水鱼都有显著的阻拦作,平均阻拦率分别为黑鲷75.1%、青石斑鱼82.4%。分析显示，气泡幕对两种鲁的阻拦率间无显著差异，在本实验中，该两种鱼对气泡漠均无明显的适应现象。