运用绿色荧光蛋白探讨肉葡萄球菌双精氨酸分泌途径

根据肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)TM300的基因组序列设计引物,经PCR扩增得到其tufA基因的启动子Peftu片段与大肠杆菌–葡萄球菌穿梭载体pBT2-Tat-GFP连接,构建了穿梭质粒pBT2-ETG.结果表明,穿梭质粒pBT2-ETG成功地转入大肠杆菌与肉葡萄球菌宿主中稳定表达具有活性的绿色荧光蛋白GFP,并被转运到肉葡萄球菌宿主的细胞壁,为进一步研究肉葡萄球菌双精氨酸(Tat)转运系统正确分泌其他外源蛋白奠定了实验基础.     

Crystal structures,antibacterial activity and thermal decomposition kinetics of lanthanide complexes with 4-chloro-2-methoxybenzoic acid and 1,10-phenanthroline

A series of lanthanide complexes [Ln(4-Cl-2-MOBA)3phen]2(Ln=Sm(1), Nd(2), Ho(3), Eu(4), Dy(5), and Tb(6); 4-Cl-2-MOBA=4-chloro-2-methoxybenzoate, phen=1,10-phenanthroline) were synthesized and characterized. The single-crystal X-ray diffraction demonstrates that 1–3 are isomorphous, which present dimeric structures with four 4-Cl-2-MOBA anions function as bridging ligands. Complexes 1 and 4–6 display their characteristic luminescence emission bands of central Ln3?ions. The heat capacities, the thermodynamic functions and the thermogravimetry–Fourier transform infrared spectra of gaseous products of complexes 1–6 were investigated.Their non-isothermal kinetics of the second decomposition stage was studied by the integral isoconversional non-linear method and Stark method. Furthermore, 1–6 exhibited excellent antibacterial activity against Candida albicans,Escherichia coli and Staphylococcus aureu.     

新型肠毒素蛋白SElK编码基因的克隆测序、生物信息学分析和表达载体构建

采用微波加热法提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,根据NCBI上登录的肠毒素基因sek设计引物,PCR克隆selk基因,对selk基因测序并进行生物信息学分析,在此基础上构建重组表达质粒p ET-32a(+)-selk.测序结果表明本研究克隆得到具有正确编码序列的新型肠毒素selk基因;Protparam分析表明在一级结构水平上该蛋白具有较高的热稳定性;亲疏水性分析表明SEl K蛋白是一个亲水性较高的蛋白质;同源建模表明SEl K蛋白的domain B结构域缺乏传统肠毒素所具有的胱氨酸环,但SEl K蛋白domain B中β-折叠片数量比传统肠毒素更高.这些结果为进一步研究SEl K蛋白的结构与功能奠定基础.     

技术的“爆发点”

 相较于青霉素和干细胞,有一项对普通人而言,完全是“高端大气上档次”的技术也在酝酿自己的“爆发点”--你能想象得到,去沃尔玛超市的时候,顺便买颗卫星么？     

金黄色葡萄球菌GST-mTSST-1的免疫活性检测方法的研究

通过对影响琼脂扩散反应的多种条件进行优化,建立了检测金黄色葡萄球菌无毒诱变中毒性休克综合征毒素1融合蛋白GST-mTSST-1免疫活性的双向免疫琼脂扩散检测方法．检测的灵敏度可达到120ng／mL．此方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等特点,对具有免疫活性的抗原蛋白的定量检测有一定的参考价值．     

大蒜汁抑菌作用的研究

采用平板菌落计数法,比较不同浓度的生蒜汁、熟蒜汁、醋酸汁、糖蒜汁对常见的3种菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)的抑菌作用.结果表明:生蒜、醋蒜汁对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均具有一定的抑制作用,且生蒜汁和醋蒜汁的抑菌作用显著高于熟蒜和糖蒜,且随大蒜汁浓度的增加,抑菌作用逐渐增强.     

喙尾琵琶甲抗菌活性的研究

目的:观察喙尾琵琶甲乙醇提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抑菌活性.方法:采用试管稀释法测定喙尾琵琶甲乙醇提取物对5株临床分离的MRSA菌株的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC),初步判断其抑菌效果.结果:喙尾琵琶甲乙醇提取物对5株MRSA的MIC值为0.98～1.95 mg/mL,MBC值为3.9～7.8 mg/mL.结论:喙尾琵琶甲乙醇提取物具有良好的体外抑菌活性.     

ICU耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的临床分析

目的:通过对重症监护病房(ICU)耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染的分析,探讨合理使用抗生素及防治措施以预防医院内MRSA感染的发生和流行.方法:对我院ICU2008年7月1日至2009年10月30日近15个月的追踪观察,对102例MRSA引起的医院内感染进行回顾性临床耐药性分析.结果:我院ICU病房15个月内共发生MRSA感染102例,占金黄色葡萄球菌感染的96.2%,均全部使用过广谱抗生素,使用大于2种抗生素占41%(OR值1.46,95%CI 1.54～3.17),大干3种侵入性操作占56%(OR值4.80,95%CI 2.27～10.29),大于3种基础疾病占49%(OR值2.88,95%CI 1.40～6.02).结论:ICU中MRSA感染率较普通病房高,必须引起重视,控制MRSA感染应积极进行病原学监测、及时发现病例、隔离和治疗患者、合理使用广谱抗生素、严格消毒隔离措施、认真洗手等.     

几种表面活性剂对金黄色葡萄球菌生长的影响

在液体培养基中分别加入不同浓度不同种类的表面活性剂(AES、Tween-80、Tween-20和SDS),接种金黄色葡萄球菌,37℃恒温振荡培养,在不同培养时间测定培养液OD值,比较4种常用表面活性剂对金黄色葡萄球菌生长的影响.结果表明:4种表面活性剂对金黄色葡萄球菌的生长都表现出抑制作用,但抑制效应不同:AES对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用最大,其次为Tween-80和Tween-20,SDS抑菌作用最弱.     

BCR/ABL和SEA双基因重组载体的构建和表达

目的:构建和表达含BCR/ABL融合基因和葡萄球菌肠毒素A(SEA)的真核双表达质粒.方法:利用RT-PCR技术从K562细胞中扩增出含BCR/ABL融合位点基因片段,提取金黄色葡萄球菌基因组DNA扩增出SEA基因,分别将两基因片段连在pIRES载体的多克隆位点A和B上,构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA- pIRES-BCR/ABL重组质粒.将重组质粒转染K293细胞,RT-PCR鉴定重组质粒在真核细胞的转录情况, SDS-PAGE电泳鉴定目的蛋白在真核细胞的表达.结果:成功扩增出BCR/ABL和 SEA基因片段;双酶切鉴定BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL重组质粒中含有BCR/ABL和SEA基因,测序证实完全正确;将重组质粒转染K293细胞后,经 RT-PCR扩增鉴定,插入到重组质粒的BCR/ABL和SEA基因能在真核细胞正常转录,经SDS-PAGE电泳鉴定重组质粒能够在真核细胞中表达BCR/ABL和SEA蛋白.结论:成功构建BCR/ABL-pIRES-SEA、SEA-pIRES-BCR/ABL真核双表达质粒,可在真核细胞中正常转录并表达BCR/ABL和SEA蛋白.